膀胱癌中Livin的表达及其与突变型P53的关系
发表时间：2010-02-23 浏览次数：505次
膀胱癌中Livin的表达及其与突变型P53的关系作者：陈小刚，任昌慧，张青汉，叶绪龙，王 瑜，顾 磊，肖和平 作者单位：(黄石中心医院：1. 泌尿外科；2. 病理科，湖北黄石 435000) 【摘要】 目的 探讨Livin在膀胱癌中的表达及意义，及其与突变型P53表达的相关性。方法 采用34例膀胱癌石蜡标本及10例正常膀胱组织标本，通过免疫组化SP法检测Livin与突变型P53的表达。结果 Livin在10例正常膀胱组织中不表达，而34例膀胱癌组织标本中有30例Livin阳性表达(P<0.01)。在膀胱癌中Livin蛋白的阳性表达率和膀胱移行细胞癌的病理分级、临床分期、复发性无明显的相关性(P>0.05)；突变型P53在正常膀胱组织中不表达，而34例膀胱癌组织标本中有18例突变型P53阳性表达(P<0.01)；膀胱癌中Livin的表达率与突变型P53无相关性(P>0.05)。结论 Livin蛋白与突变型P53蛋白可作为诊断膀胱癌的特异性指标,亦为抗肿瘤基因治疗提供了新的靶点。 【关键词】 Livin；P53；膀胱癌；免疫组化 凋亡抑制蛋白在抑制凋亡和促进肿瘤细胞增生中起着重要的作用[12]。已有研究表明，Livin蛋白在多种肿瘤组织中呈阳性表达，在肿瘤细胞的凋亡过程中起着重要作用[3]。p53基因是抑癌基因家族中的重要成员，当p53基因发生突变后，表达为突变型P53蛋白，即丧失抑制增殖的功能。在本研究中，我们应用免疫组化SP法检测石蜡包埋的膀胱癌标本Livin和突变型P53的表达，探讨Livin在膀胱癌中的表达及意义，及其与突变型P53表达的相关性，为临床有效诊治提供依据。1 材料与方法 1.1 标本来源 收集我院1998-2005年经手术证实的34例膀胱移行细胞癌标本，其中男27例，女7例，年龄42-82岁。原发膀胱癌23例，复发11例；(肿瘤分类采用国际抗癌协会TNM分期法)Tis期5例，T1期16例，T2期8例，T3期3例，T4期2例；G1 10例，G2 18例，G3 6例。另选正常膀胱组织标本10例作为对照。手术标本经甲醛固定，石蜡包埋后，切成5μm厚，置于经多聚赖氨酸处理过的载玻片。典型石蜡切片用常规苏木精伊红(HE)染色。 1.2 免疫组织化学SP法检测 1.2.1 试剂 鼠抗人Livin单克隆抗体(1∶50)和鼠抗人P53单克隆抗体(1∶100)均为美国Sigma公司产品,免疫组化试剂盒购自北京中山生物有限公司。 1.2.2 Livin蛋白和突变型P53蛋白的检测 采用免疫组化SP法。取石蜡切片，二甲苯脱蜡，梯度乙醇水化，3%过氧化氢作用15min灭活内源性过氧化氢酶，置于0.01mol/L柠檬酸盐液中煮沸10min修复抗原，滴加小牛血清封闭10min后，分别滴加鼠抗人Livin单克隆抗体和鼠抗人P53单克隆抗体，置湿盒4℃过夜，用生物素化羊抗鼠(兔)IgG(1∶200稀释)孵育20min，链霉抗生物素过氧化物酶溶液温育30min(室温)，滴加DAB显色液15min显色，苏木素轻微复染，脱水,透明，封片。以PBS代替一抗作为阴性对照。严格按试剂盒说明书操作。阳性标准：Livin阳性细胞为细胞浆染色发现棕黄色颗粒，P53阳性细胞为胞核染色发现棕黄色颗粒，切片中阳性细胞数超过10%为阳性。 1.3 统计学方法 采用SPSS 13.0统计软件进行数据分析，计数资料用χ2检验。2 结 果 Livin在10例正常膀胱组织中不表达，而34例膀胱癌组织标本中有30例Livin阳性表达(30/34，88.24%)，Livin阳性表达的膀胱移行细胞癌中胞浆着色弥漫，呈黄色至棕黄色( 图1)，膀胱癌组的Livin蛋白阳性表达率高于对照组(P<0.01)；Livin蛋白在不同病理分级、临床分期、复发次数的表达情况不同(表1)，Livin蛋白的阳性表达率和膀胱癌的病理分级，临床分期没有明显的统计学意义(P>0.05)，复发组Livin蛋白的阳性表达率和初发组比较差异无显著统计学意义(P>0.05)。突变型P53在正常膀胱组织中不表达，而34例膀胱癌组织标本中有18例突变型P53阳性表达(18/34，52.94%)，突变型P53阳性表达的膀胱移行细胞癌中胞核着色呈黄色至棕黄色(图2)，膀胱癌组突变型P53蛋白阳性表达率均高于对照组(均为P<0.01)；在Livin阳性的膀胱癌组织中突变型P53阳性为16例(阳性率为53.33%)，在Livin阴性的膀胱癌组织中突变型P53阳性为2例(阳性率为50%)，两组中突变型P53的阳性表达率无统计学意义(P>0.05)。表1 Livin在膀胱癌中的表达3 讨 论 凋亡通路的紊乱、促凋亡因子的抑制、凋亡抑制因子的过度表达以及凋亡基因的表达失控等都会导致肿瘤的发生、发展。近年发现的IAPs家族是生物体内参与凋亡调控的重要因素。而Livin是IAPs家族中的最新成员。Gazzaniga等[4]研究显示Livinα和Livinβ在全部的正常膀胱组织中均无表达，Livinβ在膀胱癌组织中也无表达，而Livinα表达阳性率为23%。进一步分析显示Livinα表达阳性的患者术后肿瘤平均复发时间为3.5月，而Livinα表达阴性的患者则延长至27.2月，差异显著(P<0.01)，提示Livinα表达与膀胱癌患者预后密切相关，可以作为肿瘤是否高复发的判断指标之一。国内李显文等[5]应用半定量逆转录聚合酶链反应(RTPCR)方法检测30例膀胱移行细胞癌组织和10例正常膀胱组织新鲜标本中Livin基因mRNA的表达情况，结果10例正常膀胱组织Livin基因均无表达，20例膀胱癌组织标本Livin基因为表达阳性(20/30，66.6%)，且同时表达Livinα和Livinβ两种亚型。Livin基因是膀胱移行细胞癌发生和演进中的早期事件之一，在膀胱移行细胞癌早期(Ta+T1)和低分级阶段(G1)，Livin有较高的阳性表达率，分别达71.4%和69.2%。这些特性预示着Livin很有希望成为膀胱移行细胞癌早期诊断和术后复发监测的一项重要指标。P53是目前公认的抑癌基因，参与细胞增殖和分化的调控，与细胞周期、细胞增殖密切相关，当基因发生突变时，即变成突变型p53基因时,其肿瘤抑制功能丧失并具致癌作用。 本研究结果显示：①膀胱癌组织中Livin表达率为88.24%，而膀胱正常组织中不表达，提示Livin与肿瘤的发生密切相关，可作为膀胱癌的分子标志物。与Gazzaniga等[4]报道一致。但膀胱癌组织表达率远高于文献报道，分析其原因可能与人种差异有关。②Livin表达与膀胱癌临床分期、病理分级及复发次数不相关。这可能与本实验采用定性方法，而非定量方法有关。Livin与膀胱癌临床分期和病理分级，复发次数的关系，还需进一步从定量上分析。③突变型P53在正常膀胱组织中不表达，而34例膀胱癌组织标本中有18例突变型P53阳性表达(18/34，52.94%)。膀胱癌组的Livin蛋白和突变型P53蛋白阳性表达率均高于对照组(均为P<0.01)。但膀胱癌中Livin的表达率与突变型P53无相关性(P>0.05)。这可能与Livin是通过抑制细胞的凋亡参与膀胱癌的发生、发展，而与细胞周期的调控，促进细胞的增殖关系不明显有关。 综上所述，Livin蛋白与突变型P53蛋白在膀胱癌中呈高阳性表达率，Livin与膀胱癌病理类型、分化程度和复发性无关，膀胱癌中Livin的表达率与突变型P53无相关性。提示Livin蛋白与突变型P53蛋白可作为诊断膀胱癌的特异性指标，亦为抗肿瘤基因治疗提供了新的靶点。【参考文献】[1]Kasof GM, Gomes BC. Livin, a novel inhibitor of apoptosis protein family member [J]. J Boil Chem, 2001, 276(5):32383246.[2]陈炜，陈凌武，罗俊航，等. 细胞黏附分子及抑癌基因和凋亡抑制蛋白在膀胱移行细胞癌中的表达及其意义 [J]. 新医学, 2004, 35(5):277279.[3]Dias N, Stein CA. Potential roles of antisense oligonucleotidesin cancer therapy.the example of BCL2 antisense oligonucleotides [J]. Eur J Pharm Biopharm, 2002, 54(3):263269.[4]Gazzaniga P, Gradilone A, Giuliani L, et al. Expression and prognostic significance of LIVIN, SURVIVIN and other apoptosisrelated genes in the progression of superficial bladder cancer [J]. Ann Oncol, 2003, 14(1):8590.[5]李显文，杨罗艳，王红珊，等. 凋亡抑制蛋白Livin在膀胱移行细胞癌中的表达及临床意义 [J]. 临床泌尿外科杂志, 2006, 21(3):216218。
