泌尿生殖道支原体培养及耐药性变迁研究

作者：杨怡等 

摘  要 ：目的：探讨北京地区2002～2005年间泌尿生殖道支原体感染状况及其耐药性变化，为临床合理用药提供参考。　方法：采用法国生物-梅里埃IST2试剂盒检测支原体及药敏。　结果：1806例标本中检出673例支原体，检出率为37.3%，其中解脲脲原体（Uu）541例(占80.4%)，解脲脲原体合并人型支原体（ Uu+Mh）107例(占15.9%)，人型支原体（Mh）25例(占3.7%)。总药敏趋势表明原始霉素（敏感率98.7%）、交沙霉素（敏感率92.6%）敏感性较高且较稳定，强力霉素（敏感率91.8%） 其次，四环素和红霉素敏感呈增强趋势，环丙沙星和氧氟沙星敏感率最低。不同性别、不同型别支原体对抗生素敏感性亦不同。　结论：加强支原体药敏检测,根据药敏结果合理用药。无条件进行药敏检测时，治疗支原体感染宜首选交沙霉素。

关键词：泌尿生殖道；解脲脲原体；人型支原体；抗微生物敏感性试验；抗生素 Study on Urogenital Mycoplasma Infection and Their Antibiotic Susceptibility 杨怡　张捷　张小伟　刘振英Yi Yang; Jie Zhang; Xiao-wei Zhang; Zhen-ying Liu Peking University Third Hospital  Beijing 100083 ,China ABSTRACTObjective：Investigate Urogenital Mycoplasma infection and drug sensitivity in Beijing from July 2002 to June 2005 ． Methods：Mycoplasma were isolated and their antibiotic susceptibility was detected with Mycoplasma IST 2 Reagent Box from France.  Results：673 cases were positive mycoplasma among1806 cases, accounting for 37.3% of the total. Among 673 clinical isolates , Ureaplasma urealyticum (Uu) positive were 541cases (80.4%), higher than complicated Uu and Mh infection (107cases,15.9%) or Mycoplasma hominis(Mh) infection (25cases,3.7%). The result of drug sensitivity test showed that Uu Mh and Uu+Mh isolated from both sexs had different drug resistance. The most sensitive and stable antibiotics were josamycin (the rate of sensitivity 98.7%) and pristinamycin (the rate of sensitivity  92.6%), the next was doxycyline (the rate of sensitivity 91.8%). It seemed to have an increasing sensitivity trend for tetracycline and erythromycin .The lowest rate of sensitivity was to ofloxacin and ciprofloxacin. Conclusions：It is important to enhance the detection of drug resistance of mycoplasma , guide the drug use and prevent from producing antibiotic resistance. If antibiotic susceptibility testing of mycoplasma can not be tested, josamycin may be selected as the first drugs to treat mycoplasma infection.Key words：Urogenital tract；Ureaplasmalyticum；Mycoplasmahominis；Antimicrobiotial susceptibility test；antibiotics支原体是一种大小介于细菌与病毒之间且能在人工培养基上生长的最小病原微生物，可引起非淋菌性尿道炎、尿路结石、前列腺炎、肾盂肾炎等多种疾病,也是女性盆腔炎的重要病原菌,并与男性不育及女性不孕有关[1、2、3]。近年来，随着以解脲脲原体(Uu)和人型支原体(Mh)感染为主的非特异性炎症不断增加、新耐药支原体株的不断出现及耐药性的不断增强，使临床用药面临很大困难。并且不同地区支原体的感染率不同，流行的耐药株亦不同，即使同一菌株对同一种抗菌药物不同时间检测的耐药率有显著差异[4]。因此综合分析支原体感染情况和药敏结果，总结其规律和发展趋势可以极大地促进用药科学性。为了解北京地区支原体感染和耐药情况，为临床用药提供参考，本研究统计了1806例泌尿生殖道标本的支原体培养及药敏结果，并结合图表总结了我院2002－－2005年支原体的感染情况及药敏趋势。一、材料与方法1．标本来源：收集2002年7月～2005年6月本院皮肤性病科、妇科、生殖科及泌尿外科就诊疑似支原体感染患者共1806例。其中男性982例、女性824例，年龄19～62岁。女性以无菌拭子取宫颈、阴道或阴道后穹窿分泌物；男性取尿道分泌物、前列腺液,少数取精液置无菌管内立即送检。2．试剂：法国生物梅里埃公司产MycoplasmaIST2支原体鉴定及药敏试剂盒。药敏试剂盒内含分别包被有9种抗生素：强力霉素（DOT）、四环素（TET）、交沙霉素（JOS）、氧氟沙星（OFL）、红霉素（ERY）、原始霉素（PRI）、克拉霉素（CLA）、阿奇霉素（AZI）、环丙沙星（CIP）。仪器为上海跃进医疗机械厂恒学隔水式电热恒温培养箱,型号PYX-DHS-X。3．方法：原理:尿素—精氨酸肉汤培养基能为支原体提供理想的生长环境，且其中含有三种抗生素和一种抗真菌药物以避免污染菌。当有支原体生长时,培养基的PH值升高，使得指示剂（苯酚红）转变为红色。操作:严格按试剂盒操作说明进行。将棉拭子或200 ul的液体加入已混合好的尿素—精氨酸肉汤培养基中混匀，然后将培养基肉汤按每孔55 ul加人试剂条，最后滴入两滴矿物油覆盖,放入36℃度恒温箱中培养，24h后观察CFU,48 h后观察培养和药敏结果。结果判断:Uu检测孔或Mh检测孔变为红色时，为Uu或Mh阳性，两者均阳性为Uu+Mh混合感染。当Uu或Mh阳性，含抗生素孔中培养液颜色为黄色，则表明Uu或Mh对该抗生素敏感；变为红色则表明耐药；如果某种抗生素较低浓度孔培养液变红色，而较高浓度孔为黄色，表明该抗生素对Uu或Mh有抑制作用，即中介。4．统计：SPSS 10.0 软件包处理。二、结果1．支原体检出率结果：从2002年7月至2005年6月支原体检出率有增高趋势，见图1。1806例泌尿生殖道标本共分离出673株支原体，检出率为37.3%；673例支原体阳性者中，Uu检出率最高（80.4%），其次为Uu+Mh阳性（15.9%），单纯Mh检出率较低（3.7%）。从性别看女性支原体感染率显著高于男性（Ｐ<0.01）。检测结果见表1。2．支原体药敏试验：98.2%支原体感染者有不同程度耐药，其中3例患者(Uu+Mh混合感染)对9种抗生素均耐药。2002-2005年支原体总药敏趋势表明原始霉素（敏感率98.7%）、交沙霉素（敏感率92.6%）敏感性较高且较稳定，强力霉素（敏感率91.8%）。不同型别支原体以及同型支原体在感染不同性别患者后对同种抗生素的敏感性也不尽相同。

（1）02-05年支原体的药敏变化 解脲支原体对抗生素的敏感性较好且稳定为原始霉素、交沙霉素、强力霉素、克拉霉素、阿奇霉素，其次为四环素、红霉素,氧氟沙星和环丙沙星的敏感率在2.9%-29.9%间，并呈下降趋势（见表2）。对解脲支原体和人型支原体混合感染较为敏感的抗生素首选原始霉素、交沙霉素，其次为强力霉素，四环素的敏感性近两年有较大回升部分病人也可选择，而克拉霉素、阿奇霉素、红霉素、氧氟沙星、环丙沙星敏感率均较低（见表2）。人型支原体对抗生素的敏感性达90%以上的为交沙霉素、强力霉素，其次可选原始霉素、四环素，但其对氧氟沙星、克拉霉素、环丙沙星、阿奇霉素、红霉素的敏感性均在40%以下（见表3）。（2）对同型支原体感染，女性耐药性比男性严重, 氧氟沙星和阿奇霉素对UU感染者,男性比女性敏感性高(P<0.05),原始霉素和强力霉素对UU+MH混合感染者,男性比女性敏感性高(P<0.05)。（见表4、表5）三、讨论从我们的研究结果可知，本地区支原体分离率有逐年增高的趋势，且以Uu感染为主,阳性率80.4%；其次为Uu+Mh混合感染,阳性率15.9%；再次为Mh单独感染，阳性率3.7%，值得注意的是Mh复合阳性则较单项阳性多见,提示Mh多以复合感染的形式存在,与文献报道相似[5]。女性支原体感染率高于男性,可能因为女性生殖道易被支原体感染,且症状轻微而忽视治疗。需要指出的是: Mycoplasma IST 2 试剂为液体培养基础,以颜色变化判断支原体生长与否,并未要求转种固体培养基(目前国内大部分支原体培养试剂亦如此)。虽然试剂中加有抑制Ｇ+及Ｇ-菌的药物,但并不能抑制除支原体外所有微生物的生长。女性生殖道菌群较为复杂,其较高的支原体培养阳性率,是否与污染有关,有待继续研究。随着抗生素的广泛应用,Uu 和Mh 的耐药菌株也日渐增多,并出现支原体多重耐药现象，在检测的673例支原体感染者中有3例患者对9种药物全都耐药。国外文献报道,特别在支原体混合感染时容易出现对药物的交叉耐药[6]。从解脲脲原体的耐药趋势来看,原始霉素、交沙霉素、强力霉素、克拉霉素、阿奇霉素的敏感率较高并稳定在一定的范围内，因此这些药比较适宜选用。四环素和红霉素的敏感性近两年有回升趋势,氧氟沙星和环丙沙星抗生素的敏感性最低并且逐年下降，与一些学者报道对四环素和红霉素的的耐药率最高不一致[7，8]。这可能与患者滥用抗生素未经正规治疗有关或与地区差异有关。对解脲和人型支原体混合感染者来说原始霉素、交沙霉素的敏感性较高稳定在一定的范围内, 强力霉素和四环素不同时期存在较大差异,造成这种结果的原因可能与检测例数和当时的用药情况有关。但我们可以看出四环素的敏感性有升高趋势，目前它仅次于前三种药物的治疗效果。单纯的人型支原体感染对抗生素的敏感性达90%以上的为交沙霉素、强力霉素，其次可选原始霉素、四环素，人型支原体对氧氟沙星、克拉霉素、环丙沙星、阿奇霉素、红霉素的敏感性均在40%以下。

人型支原体的耐药率总体上明显高于解脲脲原体,两者的耐药谱亦有明显差异，克拉霉素和阿奇霉素对解脲脲原体的敏感性（91.5%和87.2%）明显高于人型支原体（36%和24%）。这是因为Uu和Mh各自的代谢有所不同，使的Mh对阿奇霉素和克拉霉素等药物具有抵抗力，与柯建良等报道结果相符[9]。对同型支原体感染，女性耐药性比男性严重, 氧氟沙星和阿奇霉素对UU感染者,男性比女性敏感性高(P<0.05),原始霉素和强力霉素对Uu+Mh混合感染者,男性比女性敏感性高(P<0.05),由于单纯的Mh感染者例数太少不具有统计学意义,故没进行两性感染者耐药性对比。这种现象可能与女性泌尿生殖道更易感染和不合理用药有关.因此治疗女性支原体感染用药时临床应更加谨慎,建议临床医生采用联合用药，根据韦丽淑等报道联合用药的耐药性比单一用药低,可以提高疗效[10]。值得注意的是本研究显示解脲和人型支原体均对氧氟沙星、环丙沙星高度耐药, 这可能与该类药物的不合理应用及喹诺酮类耐药决定区(QRDR)的gyr A、par C基因突变有关[11，12]，提示本地区该类药物的使用应更为谨慎。四环素和红霉素敏感性增强,可能与本地区近两年来较少使用有关。由于支原体型别不同、患者性别不同对抗生素耐药谱的不一致,患者应做支原体鉴定分型及药敏测定,以便确定治疗的首选药物或联合用药的最佳治疗方案，此对防止支原体耐药株的产生具有重要意义。当没有条件做药敏试验，临床经验用药时我们建议首选交沙霉素，它对于男性或女性的各型支原体感染均有较高的敏感性。

目前临床尚无统一的支原体药敏试验标准，各实验室的实验分析和结果不能够一致。鉴于支原体的耐药性的升高，感染率也呈增高的趋势，因此有必要建立统一的实验室检测标准，有利于支原体感染的临床治疗。参考文献1．Naessens A ,Foulon W,Breynaest J,et al.Serotypes of Ureuplasma urealyticum isolated from normal pregnant Women andpatients with peagnuncy complicution[J].Clin microbiol,1998;26:319-3212．吴进曾,高谷音.解脲支原体与不孕不育关系探讨.男性学杂志,1991,5:273．冯笑峰.医院感染调查[J].中华医院感染学杂志,2000,10(2):113-114.4．邱木雄,马文辉,程力明 等. 广东省普宁市2001年与2003年门诊患者支原体感染及药敏结果对比[J]岭南皮肤性病科杂志，2004，11（3）：248-249 5．高爱平,张万翔,张海霞等.泌尿生殖系统感染支原体培养及药敏结果分析[J] 中国微生态学杂志，2003,15(4):231-2326．DominguesD, TavoraTaviraL, DuarteA, etal. Genitalmyco plasmasin womenatten dingafamily planningclini cinGuine -Bissaua ndtheirsuscep tibilitytoantimi crobialagents [J]. ActaTrop, 2003,86(1):197．程力明，梁流亚，徐孝伦.550例支原体药敏分析[J]中国微生态学杂志,2002,14(2):105-1068．徐修礼,孙怡群,彭道荣等.217例非淋菌性尿道炎患者支原体检测及耐药性分析[J] 中华医院感染学杂志，2003，13（10）：985-9879．柯建良,苏坚,黄海花,等.广东省江门市区解脲支原体、人型支原体对8种常用抗菌药物的敏感性测定[J].岭南皮肤性病科杂志,2002,9(4):25510．韦丽淑,陈贤华.2001-2003支原体培养鉴定和药敏趋势分析[J].现代医药卫生 2005,21(6):651-652 11．Bebear CM, Bove JM, Bebear C, et al. Characterization of Mycoplasma hominis mutations involved inresistance to fluoroquinolones [J]. Antimicrobal Agent Chemother, 1997,41(2):269-273.12．Bebear CM, Renaudin H, Charron A, et al. In vitro activity of trovafloxacin compared to those of five antimicrobials against mycoplasmas including Mycoplasma hominis and Ureplasma urealyticum fluroquinolone resistant isolates that have been genetically characterized [J].Antimicrob Agents Chemother,2000,44(9):2557-2560.