细胞蜡块切片中细胞比值在诊断结核性胸膜炎的应用
发表时间：2011-09-07 浏览次数：605次
作者：左定祥,梁根秀,杨小燕 作者单位：宁夏煤炭石嘴山中心医院，宁夏 石嘴山 753200宁夏石嘴山市第一人民医院 宁夏 石嘴山 753200
【摘要】 目的 探讨细胞蜡块切片成熟淋巴细胞比值对结核性胸膜炎的诊断价值。方法 对79例胸水沉淀物进行石蜡切片和涂片，计数200个有核细胞，求出成熟淋巴细胞、间皮细胞及其他血细胞的百分比，然后采取(-)-(++++)半定量计分。结果 (1)成熟淋巴细胞比值细胞蜡块切片(93.4%)较直接涂片(78.5%)高，退变细胞比值(3.9%<16.5%)少。(2)高倍视野中成熟淋巴细胞数,细胞蜡块切片(300-600个)明显高于直接涂片(150-480个)。结论 胸水沉淀物细胞蜡块切片采取细胞成分半定量计分并准确量化，对结核性胸膜炎诊断和鉴别诊断提供了客观依据，具有一定的诊断实用价值。
【关键词】 细胞蜡块;结核性胸膜炎;成熟淋巴细胞;细胞比值
结核性胸膜炎矿区较为多见，尤其是矽肺合并肺结核胸膜炎病人，影像表现与肺肿瘤相似，不易鉴别。常规胸水离心涂片抗酸染色却很难找到抗酸杆菌，利用涂片瑞氏染色或苏木素伊红(HE)后进行细胞分类及比值的计算，常存在着一些不利因素，如背景不清 、大量红细胞、炎性滲出物和黏液、敏感性低等，本文采用细胞蜡块对结核性胸膜炎积液细胞成分进行定量观察并与传统涂片做一比较，发现具有一定的临床诊断实用价值。
1 材料与方法
1.1 标本：呼吸内科及矽肺科抽取胸水79例，除外恶性肿瘤和胸膜其他炎性疾病，均有胸膜活检和(或)PCR基因扩增技术确诊结核性胸膜炎病人的标本。
1.2 方法
1.2.1 标本制作：留取胸水标本500ml，整瓶1500rpm离心10 min，去上清液，吸取细胞层涂片2张，将细胞层转移到2ml微量离心管中，2000rpm离心5min。去上清液，4%中性甲醛液固定30-60min;离心(1500rpm,10min),将上清液除去;将60℃的3% 琼脂装入有待检细胞沉淀物的容器内，轻轻搅拌，使细胞沉淀物琼脂混匀离心(2000rpm,10min);琼脂凝固后取出，将多余琼脂剥离后，布包放脱水盘按常规石蜡包埋切片，每例细胞蜡块切片1-4张，每张平均厚度4μm。然后，烤片、HE染色、封片后镜检计数。
1.2.2 奥林巴斯显微镜BX51,标准配置视场数22的目镜，使用40×物镜观察。
1.3 细胞结果判断：浏览整张切片，计数200个有核细胞，求出成熟淋巴细胞、间皮细胞及其他血细胞的百分比，然后采取半定量计分。(-)：无细胞或有核细胞小于3%或背景模糊细胞难以辨认;(+)：一种细胞比例占4%-25%;(++)：一种细胞比例占26%-50%;(+++)：一种细胞比例占51%-75%;(++++)：一种细胞占比例>76%。
2 结果
2.1 细胞涂片与细胞蜡块切片显微镜下细胞比值。
79例胸腔积液有3例未能制成细胞蜡块，直接涂片细胞数太少也未能计算细胞比值。细胞蜡块切片(93.4%)较直接涂片(78.5%)成熟淋巴细胞比值高，退变细胞比值(3.9%<16.5%)少，细胞核清晰易辨认。
2.2 直接涂片高倍镜视野中细胞数,一般成熟淋巴细胞150-480个/HPF。细胞蜡块切片高倍镜视野中细胞数,一般成熟淋巴细胞300-600个/HPF，大多数细胞呈片状分布。
3 讨论
3.1 涂片计算细胞比值因受纤维素性滲出物和黏液影响及两种制片镜下背景特点：网罗了大量细胞，使细胞分布不均，背景模糊，细胞重叠不易辨认，细胞比值计数不够准确，采取细胞蜡块切片克服了常规观察细胞涂片的这些弊端，可以观察各细胞分布，细胞核结构清晰，容易计算各细胞成分的比值，并对诊断结核性胸膜炎有一定的实用价值。
3.2 细胞蜡块切片镜检特点：(1)90%以上病例，细胞蜡块切片中成熟淋巴细胞比值占80%以上。(2)间皮细胞比值在5%以下(一般在0.53%-1.51%)。(3)也可见少数中性白细胞、嗜酸性白细胞和巨噬细胞等，只占2%-8%。而构成结核性肉芽肿的主要细胞成分即上皮样细胞和郎罕氏细胞均未发现(2)和(3)的原因：胸膜因遭受结核杆菌感染后，由于大量纤维素蛋白沉着于胸膜，胸腔积液吸收过程中可形成包裹性积液和广泛胸膜增厚，使病灶包裹、局限所至。(4)个别病历例外，一病人细胞蜡块切片中，中性粒细胞占70.5%，而淋巴细胞只占20.5%，但确诊为肺结核，应引起高度重视。
3.3 鉴别诊断： 细胞蜡块切片中淋巴细胞比值超过(+++)的胸腔积液，除了结核性胸膜炎外，还要除外恶性淋巴瘤和癌性胸水。
3.3.1 癌性胸水：血性多见，成熟淋巴细胞在(++)-(+++)之间，间皮细胞也往往增生，而且间皮细胞形态大小也不同;细胞蜡块切片能清晰显示成群或散在的癌细胞。但癌性胸水，如在胸腔内多次注射化疗药物后，癌细胞和间皮细胞很少见到，只残留较多的淋巴细胞和中性白细胞，这时要结合临床和病史。
3.3.2 恶性淋巴瘤的鉴别诊断：1).即是分化好的小细胞T淋巴细胞瘤，其淋巴细胞核仍然比较大，而且大小很不一致，常可见核仁及核分裂像。2).核染色质较粗，呈团块状，分布不均，有些淋巴细胞核呈指状突起或不规则形态。另外免疫细胞化学染色可辅助鉴别诊断。
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