乳腺癌中MCM7的表达及其与新辅助化疗关系的研究

　　作者：戴文斌,黄平,任占平,石吉吉,张芫,杨立　　作者单位：1.广西柳州市人民医院，广西医科大学第五附属医院病理科，广西柳州545006;2.广西柳州市人民医院，广西医科大学第五附属医院乳腺外科，广西柳州545006

　　【摘要】 目的 探讨乳腺癌新辅助化疗前后MCM7蛋白的表达状况，分析其与化疗效果的关系。方法 采用免疫组织化学法检测55例乳腺癌新辅助化疗前后标本中MCM7的表达。结果 新辅助化疗有效率为76.36%。化疗前MCM7蛋白阳性表达显著高于化疗后(P<0.01)。化疗有效组(42例增殖期)MCM7蛋白阳性表达显著高于无效组(13例静止期)(P<0.01)。结论 ET方案新辅助化疗有较好的疗效，可能通过抑制MCM7蛋白的表达来阻止乳腺癌细胞的增殖。MCM7蛋白高表达者化疗更为敏感，MCM7可作为临床指导乳腺癌化疗并预测化疗敏感性的分子生物学指标。

　　【关键词】 乳腺肿瘤,化学疗法,辅助;MCM7蛋白

　　Abstract: Objective To study the expressions of MCM7 before and after neoadjuvant chemotherapy in patients with breast cancer, and to analyze its relationship with response to neoadjuvant chemotherapy. Methods An immunohistochemistry was used to measure the expressions of MCM7 before and after neoadjuvant chemotherapy for 55 cases of breast cancer. Results The overall response rate to neoadjuvant chemotherapy was 76.36%. The positive expression of MCM7 before neoadjuvant chemotherapy was significantly higher than that after neoadjuvant chemotherapy (P<0.01). The positive expression of MCM7 in the group of response to neoadjuvant chemotherapy (42 cases in proliferative phase) was significantly higher than that of no response to neoadjuvant chemotherapy (13 cases in quiescence phase) (P<0.01). Conclusion Neoadjuvant chemotherapy with ET regimen is effective, and it may inhibit the proliferation of breast cancer cell by down-regulation of the expression of MCM7. Patients with high expression of MCM7 were more likely to respond to chemotherapy. The expression of MCM7 as biological marker could be a guide for chemotherapy and prediction for its response to chemotherapy in breast cancer.

　　Key words: breast neoplasms; chemotherapy, neoadjuvant; MCM7 protein

　　乳腺癌是妇女最常见的恶性肿瘤之一，其发生、发展与细胞的异常增殖有关。新辅助化疗是乳腺癌综合治疗的重要组成部分，术前其主要通过抑制肿瘤细胞增殖、杀灭肿瘤细胞，从而缩小肿瘤体积，降低肿瘤分期、分级。了解乳腺癌对化疗药物的敏感性，有利于术后治疗方案的选择。但新辅助化疗前后乳腺癌细胞增殖状况的判断和评价标准及其与临床疗效评价的关系仍不十分清楚，寻找有效的细胞增殖标志物作为客观评价新辅助化疗效果及预后的指标是当前研究的热点。本研究采用免疫组织化学技术检测新辅助化疗前后乳腺癌MCM7的表达变化，探讨其与化疗效果的关系及作为乳腺癌新辅助化疗预测因子的意义。

　　1 对象与方法

　　1.1 对象 选取我院2005年1月～2008年12月可手术的原发性乳腺癌患者55例，均为女性，年龄25～74岁，平均50岁。以上病例术前均未接受过化疗、放疗及内分泌治疗，术前进行穿刺活检，并经病理确诊为乳腺浸润性导管癌。参照2003年WHO乳腺癌TNM分期，Ⅰ期6例，Ⅱ期35例，Ⅲ期11例，Ⅳ期3例。有淋巴结转移者33例，无淋巴结转移者22例。

　　1.2 新辅助化疗方案 术前采用ET方案，表阿霉素(EPI)70～90mg/m2，每天1次，静脉滴注，紫杉醇(PTX)135～175mg/m2，每天1次，静脉滴注，每21天为1个周期，共3个周期。

　　1.3 新辅助化疗疗效评价 化疗疗效以原发实体瘤的体积变化来衡量。采用B超或钼靶X线测量乳腺癌肿瘤大小。化疗前后肿瘤体积计算采用椭圆体计算公式：4π/3×宽轴半径×长轴半径×高轴半径[1]。按照国际抗癌联盟(UICC)实体瘤通用疗效评定标准进行疗效评价。完全缓解(CR)：所有已知病灶消失至少达4周;部分缓解(PR)：可测量的病灶总体积减少≥50%至少达4周以上及病情无进展或无其它病灶出现;病情稳定(SD)：一个或多个可测量的病灶总体积减少<50%或增加<25%，时间至少长达4周;病情进展(PD)：一个或多个可测量的病灶总体积增加超过25%。总有效率(RR)=CR+PR。

　　1.4 主要试剂及免疫组织化学检测 鼠抗人MCM7(47DC141) 单克隆抗体购自Neo Markers公司，抗体稀释度为1∶100。SP试剂盒(Kit-9710)购自福州迈新生物公司。采用SP法免疫组化技术，切片均需高压水煮修复抗原，免疫组织化学染色操作步骤按说明书进行，用已知乳腺癌阳性切片作阳性对照，用PBS代替一抗作阴性对照。

　　1.5 免疫组织化学染色结果判断 MCM7以细胞核出现棕黄色颗粒为阳性标志，染色判断参照Bukholm等[2]提出的标准。计数≥500个肿瘤细胞，以细胞核内出现棕黄色颗粒且阳性细胞数<10%为(-)，10%～30%为(+)，30%～70%为(++)，>70%为(+++)。

　　1.6 统计学方法 应用SPSS 10.0统计学软件对数据进行秩和检验。

　　2 结果

　　2.1 新辅助化疗的近期疗效 55例乳腺癌病例中，CR 3例(5.45%)，PR 39例(70.91%)，SD 13例(23.64%)，无PD病例，总有效率(RR)为76.36%。

　　2.2 新辅助化疗前后MCM7的表达及与新辅助化疗疗效的关系 MCM7蛋白阳性定位于乳腺癌细胞核，在间质细胞中无着色。化疗前MCM7蛋白阳性表达显著高于化疗后(P<0.01)。对化疗前乳腺癌穿刺标本进行统计学分析：化疗有效组(CR+PR，42例)MCM7蛋白阳性表达显著高于SD组(13例)(P<0.01)，见表1。　表1 新辅助化疗前后乳腺癌组织MCM7表达的变化及与疗效的关系

　　3 讨论

　　新辅助化疗疗效肯定，被越来越多地应用于乳腺癌的术前治疗，其优点是：①缩小原发病灶，便于手术，争取保乳;②降低肿瘤细胞增殖活性，减少术中播散机会，利于消灭微小病灶，减少耐药机会;③了解肿瘤对化疗药物的敏感性，帮助制定合理的术后化疗方案。本研究采用ET方案化疗3个周期，总有效率为76.36%，完全缓解率为5.45%，证实了新辅助化疗能够有效地诱导肿瘤细胞凋亡，抑制肿瘤细胞增殖，使肿瘤缩小甚至消失，临床疗效好。

　　细胞增殖调控异常与肿瘤发生、发展密切有关。寻找准确判断新辅助化疗效果与乳腺癌肿瘤状态的某些生物学标志物，特别是细胞增殖标志物的关系以及化疗前后这些指标的变化，有利于评价临床疗效及判断预后。微小染色体维持蛋白(MCMs)是近期发现的一组DNA复制的准许因子，可启动DNA复制与细胞增殖密切相关的蛋白家族。在正常情况下，正常细胞中的MCM蛋白的mRNA水平随细胞周期的变化而改变，MCM蛋白的表达在G1/S期转换达峰值，当细胞进入G0期和分化、衰老时，MCM表达水平下降甚至不能测出。分子生物学研究表明[3]，MCM是一种多功能蛋白，它不但是DNA复制和延伸的重要组成部分，且作为细胞增殖的一种新标志物比Ki-67等细胞增殖因子更具特异性和准确性，这可能与MCM7更早地参与DNA复制、更多地参与细胞的有丝分裂、更准确地标识处于增殖中的细胞有关[4]。MCM蛋白家族是一组在序列上高度同源、功能上密切相关的蛋白，MCM7是MCM蛋白复合物的成分之一，可直接反映MCM蛋白的表达水平。任占平等[5]报道在乳腺癌组织中MCM7阳性率为96.4%，MCM7阳性表达(++)～(+++)者为72.7%，而正常乳腺组织无MCM7阳性表达。本研究发现，化疗前乳腺癌MCM7阳性表达率为90.9%，MCM7蛋白阳性表达(++)～(+++)者达72.7% ，化疗前MCM7蛋白表达水平显著高于化疗后(P<0.01)，化疗后MCM7表达下调，表明MCM7能够准确地反映肿瘤细胞的增殖活性，且有较高的敏感性和特异性，是一种较为理想的细胞增殖标志物。新辅助化疗可能通过抑制MCM7蛋白的表达来降低乳腺癌癌细胞的DNA合成速度，从而阻止乳腺癌细胞的增殖，有明显的抑癌作用。化疗有效组MCM7蛋白表达水平显著高于化疗无效组(P<0.01)，表明MCM7蛋白的表达水平与化疗效果密切有关，即MCM7表达水平高，肿瘤细胞增殖活跃的乳腺癌化疗效果较好，提示化疗药物对增殖活性高的肿瘤细胞杀伤力更强。预示着新辅助化疗可能使原本预后较差的MCM7高水平表达组患者更加受益，同时MCM7在判断肿瘤细胞增殖活性和指导临床化疗、判断化疗效果方面有重要意义。

　　【参考文献】

　　[1] Boughey JC, Peintinger F, Meric-Bernstam F, et al. Impact of preoperative versus postoperative chemotherapy on the extent and number of surgical procedures in patients treated in randomized clinical trials for breast cancer [J]. Ann Surg,2006,244(3):464-470.

　　[2] Bukholm IR, Bukholm G, Holm R, et al. Association between histology grade, expression of HsMCM2, and cyclinA in human invasive breast carcinomas [J]. J Clin Pathol,2003,56(5):368-373.

　　[3] Bailis JM, Forsburg SL. MCM protein: DNA damage,mutagenesis and repair [J]. Curr Opin Genet Dev, 2004,14(1):17-21.

　　[4] Shechter D, Ying CY, Gautier J. DNA unwinding is an Mcm complex-dependent and ATP hydrolysis-dependent process [J]. J Biol Chem,2004,279(44):45586-45593.

　　[5] 任占平,石吉吉,杜娟,等.乳腺癌组织中HPV16 18E6及p53 MCM7蛋白的表达及意义[J].中国肿瘤临床,2008,35(60):327-331.