VEGF和MVD在大肠癌组织中的表达及其临床意义

　　作者：马涛,罗湘江,吕叶,韩恩善,王宁菊　　作者单位：宁夏医学院附属医院病理科，银川

　　【摘要】目的 探讨血管内皮生长因子(VEGF)和微血管密度与大肠癌发展的关系。方法 采用免疫组化方法对65例大肠癌、65例癌旁组织及16例正常大肠黏膜组织进行VEGF表达及微血管密度(MVD)测定。结果 大肠癌组织中VEGF的表达阳性率明显高于癌旁组织及正常组织(P<0.05)，与组织学分级无关(P>0.05)。VEGF阳性者MVD值显著高于VEGF阴性者(P<0.05);大肠癌组织中VEGF的表达水平与MVD呈显著性正相关(rs=0.410，P=0.001)。VEGF表达和MVD与大肠癌浸润深度、TNM分期、血行转移密切相关(P<0.05)。VEGF表达阳性或高MVD的大肠癌患者预后差(P<0.05)。结论 VEGF表达与大肠癌血管生成密切相关，VEGF和MVD可作为大肠癌预后检测的指标。

　　【关键词】 大肠癌,血管内皮生长因子,血管密度

　　Abstract: Objective To explore the relationship of vascular endothelial growth factor(VEGF)and angiogenesis with the progression of colorectal carcinoma. Methods VEGF protein expression and microvascular density(MVD)in 65 cancer tissues, 65 neighboring non-cancerous and 16 normal tissues were examined by S-P immunohistochemical technique. Results The positive rate of VEGF expression in colorectal carcinoma tissues was significantly higher than that of neighboring non-cancerous and normal tissues(P<0.05).MVD was significantly higher in VEGF-positive colorectal carcinoma than that in VEGF-negative colorectal carcinoma(P<0.05).There was a significantly positive correlation between the intensity of the expression of VEGF and that of MVD value in colorectal carcinoma tissues(r=0.410，P=0.001); but VEGF and MVD were not related to histological grade (P>0.05).VEGF and MVD were significantly positively correlated with the depth of invasion, TAM stage, and blood metastasis of tumor(P<0.05). The prognosis of patients with positive VEGF and high MVD was significantly poorer than that of those with negative VEGF and low MVD(P<0.05). Conclusion VEGF is closely related to angiogenesis of colorectal carcinoma and promotes growth, invasion and metastasis of colorectal carcinoma. MVD and VEGF can be used as an useful markers that guide the choice and better use of therapy and predicts prognosis in colorectal cancer.

　　Key words:colorectal carcinoma; vascular endothelial growth factor; microvascular density

　　肿瘤的生长和转移依赖血管的生成，血管生成是肿瘤生长转移的必要条件[1]。血管内皮生长因子(Vascular endothelial growth factor，VEGF)是目前所知的20种肿瘤血管生成因子(Tumor angiogensis factor，TAF)中最重要的一个。微血管密度(microvessel density，MVD)是反映肿瘤组织内血管生成状况的一个重要参数。本文就大肠癌组织中VEGF表达和MVD与大肠癌生长、临床相关因素和预后的关系进行分析。

　　1 材料和方法

　　1.1 标本来源及病例资料

　　65例结直肠癌患者均为宁夏医学院附属医院化疗科1995年1月-1999年10月收治并经病理组织学确诊的住院患者，行根治性切除47例，姑息性切除13例，探查手术5例，提取其库存蜡块，重新切片进行免疫组化观察。所有入选病例术前均未行化疗，其中男38例，女27例，年龄27～77岁，中位年龄54岁;病理类型：乳头状腺癌3例，管状腺癌54例，黏液腺癌8例。组织学分化：低分化癌18例，中分化癌32例，高分化癌15例。肿瘤部位： 直肠癌33例，结肠癌32例。肿瘤大体形态：溃疡型40例，外生型25例。肿瘤大小：≤5cm者33例，>5cm者32例。合并息肉15例。按国际抗癌联盟(UICC)1997推荐的结直肠癌TNM分期标准分为：Ⅰ期11例，Ⅱ期18例，Ⅲ期18例，Ⅳ期18例。取癌旁组织(距瘤组织<2cm)65例、正常大肠组织16例做对照。65例均获得完整随访资料。

　　1.2 方法

　　取上述库存蜡块切成5μm厚切片，常规脱蜡至水，采用常规HE染色法及S-P免疫组织化学法标记VEGF和CD34，DAB显色。S-P试剂盒、鼠抗人VEGF单克隆抗体、鼠抗人CD34单克隆抗体及阳性乳腺癌组织切片均购自福州迈新生物技术开发公司。用PBS缓冲液代替一抗作为阴性对照。

　　1.3 结果判断

　　1.3.1 VEGF结果判断标准

　　VEGF蛋白主要定位于癌细胞的细胞浆中，呈棕黄色/棕褐色，参照Saito等[2]综合计分法由阳性着色细胞所占百分数与细胞着色强度二者结合起来判断。阳性着色细胞<5%计0分;5%～25%计1分;26%～50%计2分;51%～75%计3分;>75%计4分。细胞着色强度：不着色计0分;淡黄色计1分;棕黄色计2分;棕褐色计3分。二者积分相加0～2分为阴性，≥3分为阳性。

　　1.3.2 MVD计数方法

　　CD34单克隆抗体能与血管内皮细胞上的CD34蛋白相结合，定位于血管内皮，呈棕褐色。参照Weidner[3]评判标准计算，先在低倍视野内(40、100×)找到肿瘤组织内微血管密度最高的区域(hot spot)，然后在高倍视野内(200×)通过计算机图像分析系统在监视器上计数微血管的数目，凡呈现棕色单个内皮细胞或内皮细胞簇者均作为1个血管计数单位，管腔面积大于8个红细胞直径的血管不计数。每张切片在200倍视野下计数5个视野，取平均值。

　　1.4 统计学方法

　　采用SPSS 10.0软件，计数资料采用χ2检验，计量资料采用t检验和方差分析;生存率计算采用Kaplan-Meier法，检验采用Log-Rank法;相关性检验采用Spearman检验，P<0.05为差异有统计学意义。

　　2 结果

　　2.1 VEGF的表达和MVD

　　VEGF在65例患者大肠癌组织中的阳性表达率为63.1%(41/65)，阳性染色主要定位于癌细胞的细胞浆内，VEGF在大肠癌组织的表达明显高于正常组织及癌旁组织(P<0.05)，但后两者间差异无统计学意义(P>0.05)。大肠癌组织中微血管内皮细胞均为CD34染色阳性，在肿瘤间质尤其在肿瘤浸润前沿的微血管较肿瘤内部密集。在65例结直肠癌组织中MVD检测值为48.68±15.65，明显高于正常组织及癌旁组织(P=0.001)。

　　2.2 VEGF表达和MVD与大肠癌临床及病理之间的关系

　　VEGF表达阳性率随原发肿块大小的增加及临床分期的升高而升高(P=0.011和P=0.00)。且随浸润深度的增加，VEGF的表达率增高，差异有统计学意义。在确诊时有血行转移患者的VEGF表达明显高于没有血行转移者，差异有统计学意义(P<0.05)。VEGF的阳性表达与肿瘤的病理分化程度无相关性(χ2=2.52，P=0.28)。MVD也随肿瘤分期和浸润深度的增加而增加(P=0.03和P=0.00)。

　　2.3 VEGF表达与MVD的关系

　　MVD记数VEGF阳性表达组为53.35±11.85，阴性表达组为37.98±16.78，两者差异有统计学意义(t=-4.32，P=0.000);采用Spearman检验方法，经相关性检验，VEGF表达与MVD计数呈正相关(rs=0.410，P=0.001)。

　　2.4 VEGF表达及MVD与大肠癌的预后

　　VEGF表达者与未表达者的生存率分析，VEGF表达阳性者的5年生存率为34.15%，而未表达者的5年生存率为70.83%，Log-Rank检验显示随着VEGF表达升高，患者生存期缩短，差异有统计学意义(P=0.0043)。在死亡及生存满5年以上患者MVD检测分别为59.54±5.81和32.94±10.56，两者之间比较差异有统计学意义(P<0.05)，表明生存期越长微血管密度越小。

　　3 讨论

　　VEGF是一种糖基化分泌性多肽因子，分子量约34～45kD，为血管内皮特异的血管新生因子，与内皮细胞上的受体Flk-1、Flt-2结合而使血管内皮细胞增生、迁移、管腔形成，并使血管通透性增加。已发现多种恶性肿瘤中VEGF表达增高，并认为其与肿瘤的生长、血管的新生有关[4]。本研究结果显示VEGF在大肠癌中阳性表达率为63.1%;在癌旁组织和正常组织的表达锐减，提示VEGF在促进大肠癌新生血管生成的同时，也促进了癌的浸润和转移，导致预后不良。MVD在癌组织中较正常、癌旁组织中明显升高，说明血管新生在大肠正常组织或良性病恶变的进程中起到了积极的作用[5]。

　　文献报道VEGF表达与大肠癌的浸润、转移和预后有关[6]。本研究结果示，VEGF阳性表达及MVD计数与大肠癌肿瘤大小、临床分期、血行转移密切相关。VEGF阳性表达率及MVD计数在肿瘤>5cm组、Ⅲ～Ⅳ期组、有血行播散组明显高于肿瘤≤5cm组、Ⅰ～Ⅱ期组、无血行播散组，这与国内学者的报道一致[7]，提示VEGF和MVD可以反映大肠癌的生物学行为。VEGF阳性表达者术后复发转移率高而生存率低，提示VEGF表达与大肠癌患者的预后有关。

　　微血管生成是受到多种促进和抑制因子共同作用的结果。在已知的各种因子中，VEGF是了解最多作用最强的，并且是其他多种调控因子发挥作用的最后共同途径。VEGF表达与MVD之间的一致性已多次被证实。本研究亦支持在大肠癌中VEGF是主要血管调控因子的观点。故对大肠癌进行拮抗VEGF处理可以明显减少肿瘤血管的生成，起到抗肿瘤治疗的作用，为个体化实施抗VEGF的单克隆靶向治疗提供临床依据。

　　【参考文献】

　　[1]Folkman J，Shing Y.Angiogenesis[J].J Biol Chem，1992，267(11)：10931-10934.

　　[2]Saito H，Tsujitani S，Oka S，et al.The expression of thymidine phosphorylase correlates with angiogenesis and the efficacy of chemotherapy using fluorouracil derivatives in advanced gastric carcinoma[J].Br J Cancer，1998，81(3)：484-489.

　　[3]Weidner N，Semple JP，Weleh WR，et al.Tumor angiogenesis and metastasis-correlation in invasive breast carcinoma[J].N Engl J Med，1991，324:1-8.

　　[4]Volm M，koomagi R，Mattern J.Prognostic value of vascular endothelial growth factor and its receptor Flt-1 in squamous cell lung cancer[J].Int J Cancer，1997，74(l):64-68.

　　[5]Evelyhe D，Patricia H，Ande V，et a1.Tumor angiogensis and tissue factor expression during hepatocellular carcinoma progression in a transgenic mouse mode[J].J Hepatol，2003，38(6)：793-802.

　　[6]Ishigami SI，Arii S，Furutani M，et al.Predictive value of vascular endothelial growth factor(VEGF)in metastasis and prognosis of human colorectal cancer[J].Br J Cancer，1998，78(10):1379-1383.

　　[7]彭佳萍，张苏展，朝明勇.VEGF和MVD在大肠癌组织中的表达及临床意义[J].中国肿瘤临床，2004，31(21)：1244-1245.