Twist在胃癌中的表达及其与临床病理学指标关系研究
发表时间：2011-03-23 浏览次数：423次
作者：时昌文 李杰 孙京杰 曹莉莉 刘爱武 作者单位：山东省千佛山医院 普外科 (山东 济南 250014)
【摘要】 目的： 检测Twist蛋白在胃癌组织中的表达及与临床病理学指标的关系，探讨Twist蛋白在胃癌诊治中的临床应用价值。方法： 应用鼠抗人Twist单克隆抗体免疫组织化学方法检测98例不同类型胃癌组织及32例正常胃组织中Twist的表达。结果： 在98例胃癌组织中，Twist阳性表达60例(61.2%);在正常胃组织中其阳性表达5例(15.2%)，两者比较，P=0.000(χ2=20.06); 结合临床病理资料统计分析发现，Twist在胃癌组织中表达与肿瘤的分化程度、胃壁浸润、淋巴结转移及远处转移有关(χ2分别为6.577、9.557、9.87、4.88，P值分别为0.01、0.002、0.002、0.027) ;而其表达与病人年龄、性别无关(χ2分别为0.226、0.331，P值分别为0.634、0.565)。结论： Twist在胃癌诊断中作用明确，并且在判断肿瘤分化程度、浸润、淋巴结转移等方面均具有较好的辅助诊断价值。
【关键词】 Twist 胃肿瘤 免疫组织化学
Diagnostic value of twist-A tumor related gene in gastric carcinoma
SHI Chang-wen， LI Jie， Sun JING-jie， CAO Li-li， LIU Ai-wu
The Central Laboratory of General Surgery, Shandong Provincial Qianfoshan Hospital(Jinan 250014, China)
【ABSTRACT】 Objective: To investigate the expression of Twist, a tumor-related gene in gastric carcinomas and identify the clinical and pathological diagnostic value of it. Methods: The expression of Twist was detected by mouse antihuman Twist monoclonal antibody and immunohistochemical S-P method in 98 cases of gastric carcinomas and 32 cases of normal gastric tissues. Results: The positive rate of Twist in gastric carcinomas was 61.2% while the positive rate in normal gastric tissues was 15.6%, there was a significant difference between them(χ2=20.06，P=0.000); Twist overexpression was related with the poorly differentiated adenocarcinomas (χ2=6.577, P=0.01), the depth of invasion(χ2=9.557, P=0.002), lymph node metastasis(χ2=9.87, P=0.002) and distant metastasis (χ2=4.884，P<0.05), while not related with age(P=0.634), sex(P=0.565). Conclusion: Twist gene may play an important role in the development and metastasis of gastric carcinomas. The expression of Twist may be a useful marker in clinical and pathological diagnosis of gastric carcinomas.
【KEY WORDS】 Twist·Gastric nuplasmas·Immunohistochemistry
Twist是存在于果蝇、鼠、人等生物体内的一种碱性螺旋-环-螺旋(Basichelix loop helix，bHLH)转录因子，主要表达于胎盘、胚胎中胚层和成人的某些中胚层来源的未分化组织。近期研究证实Twist亦参与了某些上皮来源的肿瘤细胞发生上皮-间叶变(epithelial mesenchymal transition, EMT)并促进其侵袭转移[1]，但关于Twist在胃癌中的表达未见文献报道。因此我们通过检测Twist基因在胃癌组织中的表达，探讨Twist基因表达检测在胃癌临床、病理诊断中的应用价值。
1 资料与方法
1.1 临床资料 选取山东省千佛山医院普外科2003~2005年98例胃癌手术组织标本作为实验组，其他原因胃部手术切除标本(胃黏膜正常)32例为正常对照组，所有标本均经术后病理诊断证实。98例中男57例,女41例; 年龄28～75岁,平均54.9岁。所有标本经中性福尔马林固定，石蜡包埋，4μm厚连续切片。
1.2 试剂 鼠抗人Twist单克隆抗体(H-81,SC15393)购自Santa Cruz公司，免疫组化染色试剂(SP9002)、DAB显色液(ZLI-9033)购自北京中杉金桥生物技术有限公司。
1.3 检测方法 石蜡切片常规脱腊，PBS冲洗，3%H2O2阻断内源性过氧化物酶活性，枸橼酸缓冲液中经微波抗原修复10min,室温下冷却,加入羊血清37℃孵育1h，加Twist单克隆抗体工作液(1∶200稀释)4℃过夜，PBS冲洗，加生物素标记二抗37℃孵育1h，PBS冲洗，加辣根酶标记链霉卵白素工作液37℃孵育1h，PBS冲洗，DAB染色，水洗，苏木素复染，1%盐酸-酒精分色，脱水，透明，封片观察结果。
1.4 结果判断标准 Twist蛋白表达于细胞膜，呈清晰的棕黄色为阳性。在高倍镜下选取10个高倍视野计数，阳性细胞数<25%为(+)，阳性细胞数25%～50%为(++)，阳性细胞数>50%为(+++)。以细胞无棕黄色或与背景一致的浅黄色为阴性。结果判定采用双盲对照法。
1.5 统计学处理 应用SPSS10.0统计软件，对数据进行χ2检验和秩和检验。α=0.05。
2 结果
2.1 Twist在胃癌组织中的表达
Twist在正常胃黏膜表达阴性，在胃癌组织阳性着色部位主要为胞膜，极少数伴有胞质染色(见图1)。癌组织中，阳性60例(61.2%)，对照组组织中Twist阳性5例(15.6%)。 详见表1。
2.2 胃癌组织中Twist表达与肿瘤生物学行为的关系 详见表2。
3 讨论
Twsit促进肿瘤细胞侵袭转移的主要机制在于Twist与其他调控因子如转录因子Snail、SIP1等一样可抑制E-钙黏蛋白(E-Cadherin)的转录表达[2]，E-Cadherin是一个单次跨膜糖蛋白，能在细胞与细胞黏附中以同种分子间“拉链式”结合的形式介导细胞黏附，在绝大多数恶性肿瘤中如乳腺癌、胃癌、前列腺癌、肝癌、食管癌、皮肤癌、肺癌等都存在有E-Cadherin介导的细胞—细胞黏附功能的削弱或丧失[3]，这使得肿瘤细胞容易脱离原发病灶易于向周围组织侵袭，并为肿瘤的远处转移提供了必要的条件。
Jing Yang 等[4]发现浸润性乳腺小叶癌高水平表达Twist，E-Cadherin表达降低或缺失，而E-Cadherin缺失是发生上皮-间叶变(epithelial mesenchymal transition, EMT)的关键。Twist通过此机制促进了浸润性小叶乳腺癌进行EMT从而进一步造成癌细胞转移，同时利用动物模型证实Twist高表达的乳腺癌细胞亚型易发生转移，而Twist低表达的乳腺癌细胞在动物体内没有或极少出现转移灶。王其等[5]报道肝癌多药耐药细胞系HepG2/ADM与其亲本细胞相比Twist表达明显增加，更容易发生侵袭转移。
本试验通过对胃癌及正常组织中Twist的表达进行检测分析，证实Twist在胃癌中阳性率为61.2%，对照组阳性率15.6%， P<0.05，与Song 在鼻咽癌中的研究结果相同。Twist表达阳性与胃癌的分化程度、浸润深度、有无淋巴结转移和远处转移密切相关， P均<0.05，与Song等在鼻咽癌及Lee等在肝癌和Wai Kei Kwok等在前列腺癌中关于Twist基因表达研究的结果基本一致[6~8]。
我们认为，Twist表达可较好的反应胃癌的恶性程度，对肿瘤细胞的浸润程度、淋巴结转移和远处转移判断也有明显的指导作用，具有较好的临床病理学诊断应用价值。
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