胃癌组织CD44v6、COX-2、MMP-2表达及其与淋巴结转移的关系

　　作者：夏加增，马涛，赵伟，郑南翔

　　【摘要】 目的 研究胃癌组织中CD44v6、COX-2、MMP-2的表达及其与胃癌淋巴结转移的关系。方法 用免疫组化方法检测胃癌组织中CD44v6、COX-2、MMP-2的表达情况，并分析其表达与胃癌淋巴结转移的关系。结果 60例胃癌组织中，CD44v6、COX-2和MMP-2表达阳性率分别为61.7%(37/60)，55.0%(33/60)和73.3%(44/60)。胃癌组织中CD44v6、COX-2、MMP-2的表达与淋巴结转移密切相关。结论 胃癌组织中CD44v6、COX-2、MMP-2的表达与胃癌淋巴结转移密切相关，提示CD44v6、COX-2、MMP-2可作为判断胃癌预后的指标。

　　【关键词】 胃癌;CD44v6;环氧合酶-2;基质金属蛋白酶;淋巴结转移;免疫组织化学

　　Expression of CD44v6,COX-2,MMP-2 in gastric carcinomas and their relationship to lymph node metastasis

　　XIA Jia-zeng,MA Tao,ZHAO Wei,et al.Department of General Surgery,Wuxi Second People’s Hospital,Nanjing Medical University Affiliated Wuxi Second Hospital,Jiangsu 214002,China

　　【Abstract】 Objective To study the expression of CD44v6,COX-2 and MMP-2 in gastric carcinomas and there relationship to lymph node metastasis.Methods The expression of CD44v6,COX-2 and MMP-2 in gastric carcinomas were detected by immunohistochemical method,and their relationship with lymph node metastasis was analyzed.Results The positive rates for the expression of CD44v6,COX-2 and MMP-2 in 60 gastric cancer tissues were 61.7%(37/60),55.0%(33/60)and 73.3%(44/60),respectively.The expression of CD44v6,COX-2 and MMP-2 were significantly related with lymph node metastasis.Conclusion The expression of CD44v6,COX-2 and MMP-2 were significantly related with lymph node metastasis in gastric carcinomas,showing that they can be used as indicators to predict prognosis of gastric carcinomas.

　　【Key words】 gastric carcinoma;CD44v6;COX-2;MMP-2;lymph node metastasis;immunohistochemistry

　　淋巴结转移和复发是影响胃癌患者预后的重要因素之一。淋巴结转移是一个复杂的过程，CD44v6可参与癌细胞与基质的黏附作用及淋巴细胞归巢，从而有利于癌细胞的扩散与转移。环氧合酶-2(COX-2)的过度表达可上调基质金属蛋白酶-2(MMP-2)的表达，并增加其活性，从而促进肿瘤浸润和转移。本文采用免疫组化方法对60例胃癌术后淋巴结转移进行检测，并分析胃癌组织中CD44v6、COX-2和MMP-2表达与胃癌淋巴结转移的关系。

　　1 对象与方法

　　1.1 研究对象 选择60例手术切除并经病理证实的胃癌标本，男39例，女21例，年龄32～81岁，平均58岁。其中早期胃癌8例，进展期胃癌52例。所有患者均行根治性胃癌切除，术前未接受放疗和化疗。病理标本均按《中国胃癌诊治规范》和日本胃癌处理规范进行处理。胃癌组织及淋巴结标本均经10%甲醛溶液固定，常规石蜡包埋，切片厚度5μm，进行常规HE染色和免疫组化染色。

　　1.2 免疫组化检测 采用ABC法免疫组化染色，ABC试剂盒购自美国Vector公司，组织切片经二甲苯脱蜡、酒精水化后，浸入3ml/L的过氧化氢中30min，以阻断内源性过氧化酶的活性，然后将玻片置入0.01mol/L，pH 6.0的柠檬酸缓冲液中加热30min,以充分暴露抗原，分别滴加鼠抗人CD44v6单抗(北京中山生物技术公司)、兔抗人COX-2多抗(北京中山生物技术公司)和鼠抗人MMP-2单抗(福州迈新生物技术公司)，4℃孵育过夜，再滴加第二抗体，室温下反应20min，过氧化酶反应15min。随后经二氨基联苯胺四盐酸盐显色5min，再经苏木素复染，脱水、透明、封片。每次染色均以磷酸盐缓冲液代替一抗作为阴性对照。

　　1.3 方法 每张切片分别取上、下、左、右和中心共5个区域进行细胞计数，每个区计数200个肿瘤细胞，共计数1000个肿瘤细胞，计算染色细胞所占比例。CD44v6定位于胃癌细胞胞膜，COX-2和MMP-2定位于胃癌细胞胞浆，以细胞内出现棕黄色颗粒为阳性细胞，阳性细胞所占比例<10%为阴性，阳性细胞≥10%为阳性。

　　1.4 统计学方法 所有数据采用χ2检验，P<0.05为差异有显著性。

　　2 结果

　　胃癌组织中CD44v6表达定位于癌细胞的胞膜，60例胃癌中其表达阳性率为61.7%(37/60)。胃癌中COX-2和MMP-2均定位于癌细胞胞浆，60例中其表达阳性率分别为55.0%(33/60)和73.3%(44/60)。分析发现，胃癌组织中CD44v6、COX-2、MMP-2的表达与淋巴结转移密切相关，其表达阳性者淋巴结转移阳性率显著高于表达阴性者(P<0.05)，见表1表1 CD44v6、COX-2、MMP-2表达与淋巴结转移的关系

　　3 讨论

　　CD44v6是广泛分布于细胞表面的跨膜糖蛋白，作为细胞基质透明质酸受体，参与细胞膜与基质的黏附作用及淋巴细胞归巢，从而促进癌细胞的扩散与转移。研究表明，CD44v6与人类恶性肿瘤的发生、侵袭和转移密切相关[1]。Yamamichi等[2]报道，胃癌浸润胃壁淋巴管及淋巴结阳性者，CD44v6表达显著高于阴性者。COX-2是花生四烯酸合成前列腺素的限速酶，在正常组织中不表达。COX-2与肿瘤的关系表现在以下几个方面：(1)COX-2的过度表达可促进肿瘤细胞增殖，抑制其凋亡;(2)COX-2的过表达与肿瘤新生血管形成有关;(3)COX-2的过表达可提高肿瘤发生及转移的潜能。有研究表明，COX-2的表达与肿瘤淋巴结转移呈正相关[3]。MMP-2是MMP家族的主要成员之一，又称“明胶酶A”，其主要依赖降解IV型胶原以促进肿瘤细胞突破基底膜屏障发生浸润转移。

　　本研究用免疫组化方法检测胃癌组织中CD44v6、COX-2、MMP-2的表达情况，并分析其表达与胃癌淋巴结转移的关系。结果表明，在肿瘤CD44v6、COX-2和MMP-2表达阳性的病人中，其胃周淋巴结转移阳性率分别为81.1%、81.8%和77.3%，而表达阴性者的淋巴结转移阳性率分别为52.2%、55.6%和50.0%，其差异有显著性(P<0.05)(见表1)。提示胃癌细胞在异常分化中，获得CD44v6、COX-2和MMP-2表达的同时,也获得高转移的能力。基础研究显示，CD44v6仅在转移细胞株中表达，而非转移细胞株中不表达，将CD44v6转移到非肿瘤细胞中，后者就具有转移能力[4]。亦有临床研究显示，COX-2抑制剂(非甾体类抗炎药)可显著降低胃肠道肿瘤的发生率和死亡率，而MMP-2抑制剂BBS2516imastat也已进入临床试验阶段。这些均表明，CD44v6、COX-2、MMP-2蛋白在胃癌的进展中起重要作用，检测这些蛋白表达对判断胃癌患者淋巴结转移潜能和预后、提供胃癌新的治疗靶点有重要意义。

　　【参考文献】

　　1 Yamaguchi A,Goi T,Yu J,et al.Expression of CD44v6 in advanced gastric cancer and its relationship to hematogenous metastasis and long-term prognosis.J Surg Oncol,2002,79:230.

　　2 Yamamichi K,Uehara Y,Kitamura N,et al.Increased expression of CD44v6 mRNA significantly correlates with distant metastasis and poor prognosis in gastric cancer.Int J Cancer,1998,79:256.

　　3 Kinoshita T,Takahashi Y,Sakashit Y.Regulation and induction of epidermal growth factor receptor by overexpression of cyclooxygenase 1 and 2 in human colon carcinoma cell.Biochemical et Biophysica Acta,1999,1483:120.

　　4 Gunthert U,Hofmann M,Rudy W,et al.A new variant of glycoprotein CD44 cofers metastatic potential to rat carcinoma cells.Cell,1991,65:13.

　　作者单位： 214002 江苏无锡，无锡市第二人民医院 南京医科大学附属无锡二院普外科