Ki-67和CD44v6在肾癌中的表达及其临床意义

　　作者：李威武,李培军,张宁妹　　作者单位：1.宁夏医科大学，银川 750004;2.宁夏医科大学附属医院，银川 750004

　　【摘要】 目的 探讨Ki-67和CD44v6蛋白在肾癌中的表达和临床意义。方法 应用免疫组化方法对40例肾癌组织进行Ki-67和CD44v6蛋白检测。结果 在肾癌组织中Ki-67和CD44v6蛋白表达阳性率分别为65%和35%。Ki-67表达和CD44v6表达与肾癌的病理类型无关(P<0.05)，与肾细胞癌分级、分期相关(P<0.05)，Ki-67表达与CD44v6表达无相关(P<0.05)。结论 Ki-67高表达和肾癌的术后转移相关，CD44v6高表达和淋巴结转移相关。两者对预测肾细胞癌术后转移及淋巴结转移有一定的参考价值。

　　【关键词】 肾肿瘤;Ki-67;CD44v6;免疫组织化学

　　The Clinical Significance and The Expression of Ki-67 and　CD44v6 in Patients with Renal Cell Carcinoma

　　The Affiliated Hosp.of Ningxia Med. Univ.， Yinchuan 750004

　　Abstract：Objective To investigate the clinical significance and the expression of Ki-67 and CD44v6 in patients with renal cell carcinoma and the relationship between them. Methods 40 proteins were detected by Immunohistochemical methods and defined the type of renal cell carcinoma according to the WHO method.Results The expression rates of Ki-67 and CD44v6 were 65% and 35% ，its expression were not related to the type of the renal cell carcinoma (P>0.05)，but significantly related to the clinical stage or clinical grade(P<0.05). The expression of Ki-67 was not correlated with the expression of CD44v6 (χ2=2.637，P<0.05). The high level expression of Ki-67 were significantly correlated with the postoperative metastasis of renal cell carcinoma. The high level expression of CD44v6 were significantlycorrelated with lymph nodes metastases. Conclusion These results suggest that the high level expression of Ki-67 and CD44v6 might be a good indicator in evaluating postoperative metastasis of renal cell carcinoma and in predicting lymph nodes metastases.

　　Key words：renal cell carcinoma; Ki-67;CD44v6; immunohistochemistry

　　肾癌是常见的泌尿系恶性肿瘤，在泌尿外科肿瘤中占第二位。由于肾癌的转移情况复杂，迄今尚缺乏预测，因此有关肾癌的侵袭和转移已成为目前研究的热点。Ki-67蛋白普遍认为是细胞增殖活性的生物学标志物及研究工具，在泌尿系肿瘤预后及治疗方面的研究应用日益受到关注，目前认为Ki-67的高表达是膀胱癌可靠的独立复发指征[1-2]，但在肾癌方面研究的较少。CD44v6是CD44黏附因子的一种拼接变异体， 其表达常与肿瘤的浸润和转移有关[3]。有关肾癌中联合检测Ki-67和CD44v6蛋白表达的报道很少，本实验采用免疫组化方法检测40例肾癌(RCC)组织、20例癌旁组织和5例正常肾组织中Ki-67及CD44v6蛋白的表达，初步探讨Ki-67与CD44v6蛋白在肾癌中的表达及其临床意义。

　　1 材料与方法

　　1.1 材料来源

　　标本均为宁夏医科大学附属医院1998-2008年行手术切除的40例肾癌组织。其中男27例，女13例，年龄18～78岁，平均56岁。全部病例术前均未经任何放疗和化疗。标本均经10%福尔马林固定，石蜡包埋，4μm厚连续切片。病理组织学分型:透明细胞癌17例，颗粒细胞癌9例，乳头状细胞癌8例，混合细胞癌6例。组织学分级:按照《中国泌尿外科疾病诊断治疗指南》2007年版推荐采用1997年WHO所推荐，即将FuhrmanⅠ、Ⅱ级合并为高分化26例，Ⅲ级为中分化8例，Ⅳ级为低分化或未分化6例。临床分期(2002年AJCC肾癌临床分期):Ⅰ期17例，Ⅱ期11例，Ⅲ期7例，Ⅳ期5例。所有病例随访0.6～9年，其中8例发生术后转移，时间0.8～6年，转移部位为肺3例，肝脏2例，骨转移1例，同侧肾上腺1例，肝脏并骨转移1例。淋巴结转移11例，均为术后病理证实。选择远离肿瘤的正常肾组织5例作为对照观察，另选10例癌旁组织对比。Ki-67和CD44v6抗体均购自福建迈新公司。

　　1.2 检测方法

　　采用石蜡标本集中连续切片，片厚4μm，免疫组化染色法采用Envision，按照说明书进行。用PBS代替一抗作为阴性对照，CD44v6采用阳性胃癌组织作为阳性对照。

　　1.3 结果判断标准

　　Ki-67以细胞核染成棕黄色为阳性染色的判断标准。高倍镜(×400)下选择10个有代表性的视野，每个视野计数100个肿瘤细胞，计算阳性细胞百分比。肿瘤细胞相应部位不着色为阴性(0);Ki-67阳性细胞数<10%为(+);10%～30%为(++); >30%为(+++)，+++为低表达，+++为高表达。CD44v6以细胞质、膜出现棕黄色颗粒为阳性染色的判断标准。高倍镜(×400)下选择10个有代表性的视野，每个视野计数100个肿瘤细胞，计算阳性细胞百分比。肿瘤细胞相应部位不着色或阳性细胞数<5%为阴性(0); 5% ～50%为弱阳性(+)，即低表达; >50%为强阳性(++)，即高表达。

　　1.4 统计学方法

　　应用SPSS 13.00统计分析软件，用秩和检验和卡方检验及相关分析。

　　2 结果

　　2.1 Ki-67蛋白在肾癌中的表达

　　见表1。

　　Ki-67阳性物质定位于细胞核(图1，见封4)。40例肾癌中Ki-67阳性表达为26例，阳性率为65%(26/40)、癌旁组织中低表达率1例10%(1/10)，卡方检测具有统计学意义(P<0.05)。Ki-67表达与肾癌组织类型无关(P>0.05)，与病理分级及临床分期相关(P<0.05)。转移组低表达率为37.5%(3/8)，未转移组为56.25%(18/32)，χ2=0.307(校正四格表)，P>0.05。转移组高表达率50%，未转移组为2.5%(χ2=8.929，P<0.05)，见表1。表1 Ki-67在肾癌中的表达(略)

　　2.2 CD44v6蛋白的表达

　　CD44v6阳性物质定位于细胞膜(图2，见封4)。5例正常肾组织和10例癌旁组织中均未见CD44v6阳性表达。40例肾癌中阳性表达14例，阳性表达率为35%。CD44v6表达与肾癌组织类型无关，与组织病理及临床分期相关(P<0.05)。转移组低表达率为27.3%(3/11)，高于未转移组为13.8%(4/29)，χ2=0.287，P>0.05。转移组高表达率45.5%，高于未转移组为6.9%，χ2=5.759，P<0.05，见表2。表2 CD44v6在肾癌中的表达(略)

　　2.3 Ki-67和CD44v6在肾癌中表达之间的关系

　　两者经相关性分析无相关性(P>0.05)，见表3。表3 Ki-67和CD44v6在肾癌中表达之间的关系(略)

　　3 讨论

　　Ki-67是细胞增殖的核抗原，目前对Ki-67在肾癌中的表达研究不多。Ziya Kirkali等[4]报道70例肿瘤细胞增殖活性(Ki-67LI)与肾细胞癌生物学特征之间的关系，Ki-67分数增高，肿瘤的临床分期及转移几率也相应增加(分别为P=0.027，P=0.002)，与病理级别也有良好的相关性。另外，Ki-67分数低于10%与超过11%两组病例无病生存期(DFS)差异有统计学意义(P=0.0004)。多变量分析(Ki-67、血管生成、核形态测量)结果表明，Ki-67 是肾细胞癌独立的预后因素。Visapaa等[5]研究241例RCC，其中可检侧到Ki-67表达的有175例(73%)，平均肿瘤细胞Ki-67阳性率9%;发现Ki-67染色增强，肿瘤病理级别也增加(P<0.0001);Kaplain-Meier曲线显示Ki-67阴性病例平均肿瘤特异性生存时间要长于Ki-67阳性病例，COX多变量回归分析结果表明，Ki-67的表达是有意义的预后指标(P=0.0216)。但是Cheville等[6]研究分析232例独立性PT1肾透明细胞癌根治性肾切除术后标本，对于40例死于RCC的病例，同时作分层随机抽样对照;死于RCC病例MIB-1(Ki-67单克隆抗体)均值为6.5%，而死于其他原因的病例MIB-1均值则只有3.6%;同时发现，MIB-1增殖活性≥5%的病例死于RCC的概率是MIB-1增殖活性<5%病例的2倍多(P=0.02);然而，在调整了肿瘤大小、核的级别及肿瘤坏死等风险因素后，MIB-1增殖活性则与肿瘤特异性生存期无显著相关。我们的研究表明肾癌Ki-67蛋白在肾癌中表达与病理分级及临床分期密切相关。术后转移组和未转移组高表达率差异有统计学意义(P<0. 05)，提示肾癌Ki-67高表达(>30%)时，术后转移的可能性较大。

　　CD44v6是位于人类第11号染色体短臂上的基因所编码的细胞黏附分子，是一种整合膜糖蛋白。CD44v6是CD44的拼接变异体。近年来发现，CD44v6的过量表达与多种人体恶性肿瘤，如结肠癌、胃癌、恶性黑色素瘤等许多肿瘤的发生发展、侵袭和转移密切相关[7～8]。研究还显示，CD44v6表达与肾癌细胞分化程度和临床分期密切相关[9]，我们的研究表明与之相符。同时淋巴结转移组和未转移组的高表达率存在差异(P<0. 05)，提示CD44v6高表达与淋巴结转移密切相关。CD44v6的促进淋巴结转移作用机制，可能是参与淋巴细胞的激活过程[10]，或者可能是CD44v6阳性癌细胞模仿激活的淋巴细胞而较易发生转移[11]。另外，本文资料显示，在肾癌中Ki-67表达与CD44v6表达无相关。总之，Ki-67表达和CD44v6表达与肾细胞癌分级、分期相关，Ki-67高表达提示肾癌发生术后转移可能性较大，CD44v6的高表达则提示术后淋巴结转移可能性较大。两者联合检测对判断肾细胞癌术后转移和淋巴结转移有一定的参考价值。

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