豚鼠变应性鼻炎模型血清组胺的测定

　　作者：吉晓滨,邓家德,臧林泉,王磊,谢军　　作者单位：广州市第一人民医院耳鼻咽喉科， 广州 510180

　　【关键词】 鼻炎，变应性，常年性;模型，动物;组胺

　　Blood histamine in guinea pigs with allergic rhinitis

　　JI Xiaobin1, DENG Jiade2, ZANG Linquan3, WANG Lei1, XIE Jun3

　　(1. Department of Otorhinolaryngology; 2. Department of Clinical Laboratory，

　　Guangzhou First Municipal People′s Hospital, Guangzhou 510180, China;

　　3. Department of Pharmacology, Basic Medical College, Sun Yatsen University, Guangzhou 510080, China)

　　To investigate the role of blood histamine in the pathogenesis of allergic rhinitis. Methods Toluene 2,4diisocyanate was mixed with Florence oil in a concentration of 10%, and then this solution was dropped into the nostrils of animals to induce sensitization. 8 guinea pig models were prepared as allergic rhinitis and 8 normal animals served as the blank controls. The content of blood histamine was determined by the ELASA method after the model was successfully established. Results The content of blood histamine of the model group was statistically higher than that of the control group [(9.59±1.11)ng/mL vs(7.62±0.96)ng/mL, P<0.01]. Conclusion Allergic rhinitis was successfully established in guinea pigs by Toluene 2,4diisocyanate combined with Florence oil. Blood histamine may play an important role in the pathogenesis of allergic inflammation.

　　Key words: Rhinitis, allergic, perennial; Model, animals; Histamine 变应性鼻炎(allergic rhinitis, AR)的发病由多个环节起作用，过敏性化学介质如组胺的释放在反应中起重要作用。组胺又称β咪唑乙胺，分子式为C5H9N3，由肥大细胞、嗜碱性粒细胞受刺激后脱颗粒释放组氨酸，组氨酸再经组氨酸脱羧酶脱羧后产生，是分布广、作用强的主要炎症介质，作用于其受体引起血管扩张、渗透性增高、腺体分泌和神经反射等。AR血清组胺含量增高，并与临床表现的程度一致。检测AR豚鼠激发后血清组胺含量的变化，可以反映机体组胺的释放情况，反映AR的病理生理。本研究通过建立豚鼠AR动物模型，检测了血清组胺的含量。

　　1 材料与方法

　　1.1 实验动物 由中山大学医学动物实验中心提供。豚鼠16只，雌雄各半，体重(400±50)g，分为对照组和模型组，每组8只。清洁级。

　　1.2 实验试剂 甲苯2，4二异氰酸酯(Toluene 2,4diisocyanate，2，4TDI)由Sigma公司下属Fluka提供。橄榄油由中国医药集团上海试剂公司生产。豚鼠组胺测试专用试剂盒购自美国California州RapidBio实验室。

　　1.3 建立AR动物模型[1]17 ① 用橄榄油将2，4TDI配成浓度为10%溶液作为致敏剂滴鼻，每侧5?μL，每日1次，连续7?d。此后每2日1次，共4次，致敏时间共15?d。从第1次给药开始记录鼻部症状如鼻痒(致敏动物用前爪抓鼻)、喷嚏、清涕，评分，叠加分数，记总分。总分超过5分者模型成功; ② 激发：致敏结束、模型成功后每2天用10%2，4TDI溶液滴鼻，激发1次，维持。

　　鼻部症状评分标准[1]17：① 鼻痒：轻度，轻擦鼻几次，1分;重度，抓挠鼻、面不止，到处擦磨，2分;② 喷嚏： 1～3个1分，4～10个2分，11个以上3分;③ 流清涕：流至前鼻孔1分，超过前鼻孔2分，流涕满面3分。

　　1.4 对照组给药方法 用单纯橄榄油滴鼻，每侧5?μL，每日1次，治疗30?d。

　　1.5 组胺的测定 用1%戊巴比妥钠行全麻，消毒腹部，沿腹正中线切开，暴露腹腔静脉，于此处取血，提取血清。用检测豚鼠组胺的专用试剂盒，按照双抗夹心ELASA方法测定，酶标仪波长450?nm处读OD值，绘制标准曲线。根据样品的OD值、标准曲线计算样品组胺的含量。

　　1.6 统计学处理 行t检验，用美国哈佛大学公共卫生学院制作的STATA3.1软件统计。

　　2 结 果

　　对照组鼻部症状评分为(1.38±0.92)分，模型组为(5.88±0.99)分(P<0.001)。对照组血清组胺含量为(7.62±0.96)ng/mL，模型组为(9.59±1.11)ng/mL(P<0.01)。

　　3 讨 论

　　3.1 组胺的释放 组胺作为预先形成的介质存在于肥大细胞、嗜碱性粒细胞的颗粒内，与酸性蛋白及肝素以离子键结合成大分子复合物，释放组胺时伴随脱颗粒。组胺的释放是通过免疫性、非免疫性反应两类作用产生的，AR主要通过免疫性反应释放组胺，通过组胺释放剂作用于IgE致敏的肥大细胞、嗜碱性粒细胞，与细胞上的IgE和/或IgE高亲和力受体(FcεRI)结合，主要依赖细胞外Ca2+诱发组胺分泌。磷脂酰丝氨酸可促进这种分泌，色苷酸盐则抑制这种分泌。组胺的释放过程分非选择性释放和选择性释放两种。前者是细胞释放组胺的同时也释放乳酸脱氢酶等内容物，细胞膜非选择性改变，其完整性受到损害，又称细胞毒性释放。后者是细胞通过分泌作用释放组胺，细胞膜完整，不影响细胞的存活，是能量依赖性过程，又称非细胞毒性释放[2]。

　　具体机制有5种：①抗原抗体在肥大细胞、嗜碱性粒细胞等表面发生反应，引起脱颗粒释放组胺;②抗原抗体复合物激活补体，形成过敏毒素，释放趋化因子吸引嗜中性粒细胞释放溶酶体酶，刺激肥大细胞释放组胺引起血中组胺增高;③某些组胺释放剂直接作用，使肥大细胞膜cAMP降低，释放组胺;④AR中体内可能存在循环性组胺释放因子，使血液中组胺释放增加;⑤IL1、IL3、IL8和GMCSF也能使肥大细胞、嗜碱性粒细胞释放少量组胺。

　　3.2 组胺对其受体的作用 鼻内有H1～H4型受体参加AR的过程。有报告称，有学者认为组胺受体的数量、亲和力明显增加，但也有学者认为组胺受体没有改变，只是对组胺的反应性增高[3]80。AR主要由细胞膜成份的H1受体起作用。组胺作用于H1受体,激活磷酯酰肌醇通路,Ca2+流入细胞内并动员细胞内储存钙,使胞内Ca2+浓度升高，促使GTP催化成cGMP，引起多种效应。组胺作用于存在于血管平滑肌表面的H1受体影响小血管的收缩反应，作用于鼻黏膜上皮感觉神经末梢H1受体产生动作电位，将组胺刺激传到中枢，整合，经副交感神经传出至鼻黏膜，使鼻分泌亢进，毛细血管扩张[4]。组胺作用于细胞膜成份H2受体，激活腺苷酸环化酶，使细胞内cAMP水平增高, 起动第二信使发挥作用。H2受体存在于交感神经末梢和血管平滑肌细胞膜上，组胺通过H2受体抑制交感神经末梢释放去甲肾上腺素，使副交感神经在鼻黏膜中呈现优势现象，增加平滑肌细胞cGMP的浓度，引起血管扩张、血管通透性增加和血浆渗出，进而引起鼻黏膜水肿、鼻阻塞。H3受体作用相反，可能通过调控细胞Ca2+流入细胞内,影响兴奋分泌偶联过程，进而影响组胺的释放[4]。

　　Dinh等[5]认为，ARH1受体mRNA基因表达水平明显增高，尤其在上皮、黏膜、炎症细胞、血管壁表达更高。炎症介质破坏神经末梢使其暴露，使鼻黏膜对组胺刺激的敏感性显著增强，并通过炎症介质对血管、神经的作用放大组胺的效应。Nakaya等[6]1782在鼠鼻黏膜中发现，H3受体mRNA也参与AR的调节。

　　3.3 组胺的生物效应 组胺结合受体发挥作用：①引起鼻痒、鼻漏和喷嚏，程度与组胺的释放量呈正比。在AR速发、迟发相起作用;②组胺生物活性很强，局部作用时使血管扩张、通透性增加、血浆蛋白向血管外渗出,引起局部皮肤充血、水肿、搔痒感和荨麻疹。本研究中AR动物模型均出现这些鼻部症状。组胺大剂量时使全身血管广泛扩张、通透性增加,甚至有效血容量减少发生休克;③引起平滑肌尤其呼吸道平滑肌收缩，发生哮喘;④组胺具有前炎症介质的作用，可增加P选择素介导的滚动的白细胞数目，延长黏附内皮的时间，增加TNFΑ诱导的血管内皮细胞E选择素、ICAM1及LFA1的表达，增加血管内皮细胞IL6、IL8等细胞因子的分泌，诱导鼻上皮细胞ICAM1的表达。

　　3.4 AR治疗与组胺的关系 目前临床上常用H1受体拮抗剂，H3受体兴奋剂可作为另一种治疗AR的新途径。Nakaya等[6]17781784用H3受体兴奋剂抑制了OVA致敏的鼠鼻AR症状，联合用H3受体兴奋剂和H1受体拮抗剂比单用一种能更强力抑制鼠这些症状。切断翼管神经治疗AR的机制在于阻断组胺诱发的神经反射弧。组球蛋白和色苷酸钠能抑制肥大细胞释放组胺。茶硷、前列腺素E1和钙通道阻断剂可提高肥大细胞中cAMP浓度，抑制组胺释放[3]81。

　　【参考文献】

　　[1] 赵秀杰，董震，杨占泉，等. 鼻超敏反应实验模型的建立[J]. 中华耳鼻咽喉科杂志，1993，28(1).

　　[2] 林宇红，徐建华.组胺释放剂及其作用机制的研究进展[J]. 生理科学进展，1994，25(1)：4247.

　　[3] 杨平常，陶正德. 组胺与变应性鼻炎关系的研究进展[J]. 国外医学耳鼻咽喉科学分册, 1991，15(2).

　　[4] 匡荣，安宁飞，刘玉兰. 组胺研究进展. 中国药理学通报，2000，16(5)：501503.

　　[5] Dinh Q T, Cryer A, Dinh S, et al. Transcriptional upregulation of histamine receptor1 in epithelial, mucus and inflammatory cells in perennial allergic rhinitis[J]. Clin Exp Allergy, 2005, 35(11):14431448.

　　[6] Nakaya M, Fukushima Y, Takeuchi N, et al. Nasal allergic response mediated by histamine H3 receptors in murine allergic rhinitis[J]. Laryngoscope, 2005,115(10).