鼻用糖皮质激素对鼻息肉组织中Bcl-2和Bax蛋白表达的影响

　　作者：黄加云,刘国钧,倪丽艳,杨继红　　作者单位：温州医学院附属第二医院耳鼻咽喉科

　　【摘要】目的 探讨局部糖皮质激素对鼻息肉组织中抑制凋亡基因Bcl-2和促进凋亡基因Bax蛋白表达的影响及意义。方法 应用免疫组织化学方法检测Bcl-2 蛋白和Bax蛋白在15 例鼻息肉组织中的表达，并在鼻腔局部糖皮质激素治疗2周后观察其表达的变化。结果 鼻息肉组织Bcl -2在使用激素后，表达明显减低，Bax蛋白在使用激素后，表达明显增加。结论 鼻息肉细胞凋亡相关基因表达异常与鼻息肉的发生发展有一定关系，鼻腔局部糖皮质激素调节鼻息肉上皮细胞的相关凋亡基因，达到治疗鼻息肉和抑制鼻息肉复发的效果。

　　【关键词】 鼻息肉 糖皮质激素 凋亡 Bcl-2 Bax

　　【Abstract】 Objectives To study the effect of intranasal glucosteroid on the proteins expression of Bcl-2 and Bax in nasal polyps. Methods Expression of Bcl-2 protein and Bax were detected with immunohistochemistry in nasal polyps from the patients(n=15) pre and post treated with intranasal glucosteroid. Results The Bcl -2 protein expressed significantly higher in the pretreated patients (P<0. 01). The expression of Bax protein was significantly higher in the post treated patients (P<0.05). Conclusions These findings indicated that abnormal expression of apoptosis related gene in nasal polyps may playan important role in the occurrence and progression of nasal polyps. Intranasal glucosteroid treatment may regulate the expression of apoptosis related gene.

　　【Key words】 Nasal polyps Glucosteroid Apoptosis Bcl-2 Bax

　　鼻息肉(nasal polyps , NP) 是鼻部常见病，由于其发病机制尚不明确，目前的治疗方案是手术加鼻内局部糖皮质激素的综合治疗。但有部分患者仍易复发。可能与鼻息肉的多因素病因有关。部分学者研究表明鼻息肉的发生，发展与鼻粘膜上皮细胞凋亡基因异常表达有关，导致正常的上皮细胞的生理性凋亡抑制、异常增殖。作者以往研究表明抑制凋亡基因

　　B细胞淋巴瘤/白血病-2(B cell lymphoma/lewkmia-2，Bcl-2)蛋白和增殖细胞核抗原(Proliferating cell nuclear antigen ,PCNA) 在鼻息肉组织中明显比下鼻甲粘膜要高[1]。作者进一步用局部鼻腔激素治疗2周后动态观测和抑制凋亡基因Bcl-2和促凋亡基因Bax(Bcl-2-associated X protein，Bax)蛋白的变化。深入了解鼻息肉组织中凋亡相关基因Bcl-2和Bax的作用。

　　1 临床资料

　　1.1 一般资料

　　2005年7月至2006年1月门诊就诊15例患者中男9例，女6例;年龄18～65岁，平均35.8岁，所有患者未伴有变应性鼻炎，支气管哮喘及其他系统疾病。术前均未使用抗组胺、抗生素类药物。门诊就诊时取鼻腔息肉标本一块，给予鼻内雷诺考特喷鼻，2次/d，1揿/次，2周后入院行鼻内窥镜术，取同侧相同部位的息肉。所有鼻息肉标本均经10%福尔马林固定，石蜡包埋，5μm 厚连续切片，HE 染色。

　　1.2 试剂及方法

　　鼠抗人Bcl-2和Bax单克隆抗体，链霉菌抗生素蛋白-过氧化酶连接法(streptavidin peroxidase ，SP)免疫试剂盒，阳性对照空白片均购自福建迈新生物制品有限公司。由0.01mol/L PBS缓冲液代替一抗作空白对照。按试剂盒说明书常规进行免疫组化染色。

　　1.3 结果判定

　　以阳性对照片结果为阳性和PBS替代一抗作为阴性对照。以鼻息肉上皮和腺上皮细胞胞浆中出现棕黄色为阳性标准。应用江苏省捷达科技发展有限公司JD 801 图像分析软件行图像分析，观察鼻息肉上皮、皮下组织和腺体，每张切片选5 个阳性区域的高倍视野( ×400 倍)，计算该视野内阳性细胞面积占该视野内面积的百分比。

　　1.4 统计学处

　　用SPSS 统计软件分析,根据数据类型采用配对t检验，P<0.05为有显著性差异。

　　2 结果

　　Bcl-2在鼻息肉中主要表达于上皮细胞、腺上皮细胞、血管内皮细胞和浸润的炎性细胞等(0.67±0.06)。但在激素治疗后，阳性细胞的面积明显小于激素治疗前(0.23±0.07)，

　　P <0.01。而Bax则与Bcl-2相反，激素治疗前表达较低，只有3例弱阳性表达。激素治疗后，则15例中大部分(13例)见Bax阳性表达，比治疗前明显提高(P<0.05)。

　　3 讨论

　　细胞凋亡是机体细胞的表面分子受到诱导因子刺激并将信号传入细胞，启动级联式信号传递，通过启动其自身内部的基因表达，最终导致细胞程序性死亡的过程。一种生理性的调节机制。Bcl-2 基因家族在细胞凋亡中发挥重要的调节作用,包含抑制与促进细胞凋亡两类功能相反的基因。抑制细胞凋亡的基因包括Bcl-2, Bcl-xl, Bcl-w等，另一类促进细胞凋亡的基因包括Bax，Bak, Bad 等，其中Bcl-2 是阻遏细胞凋亡的核心分子。Bcl-2的过度表达能延长细胞的生存，阻止细胞凋亡的诱导[2]。Bax是Bcl-2家族中促进细胞凋亡的重要代表，二者的比例决定细胞接受凋亡信号后的存活与否。如果Bcl-2表达水平下降将使细胞无法平衡促凋亡基因Bax的作用，从而使细胞走向凋亡。反之，细胞凋亡将受到抑制。鼻息肉是耳鼻喉科常见病，其发病机制尚不十分清楚。病理学表现为鼻息肉组织中较多的嗜酸性粒细胞的浸润。较多的研究表明鼻息肉组织中嗜酸性粒细胞存在着凋亡的抑制[3]。作者以往的实验研究还发现抑制凋亡Bcl-2 蛋白和增值细胞核抗原PCNA在鼻息肉上皮层和部分炎性细胞中比下鼻甲有更高的表达，说明鼻息肉组织也存在较高的抗凋亡的微环境使鼻息肉上皮细胞凋亡延迟，上皮增殖增强。增殖的鼻息肉上皮基底细胞具有上皮分化和腺体分化双向分化潜能，在鼻息肉体积不断增大和新腺体形成过程中起着重要作用。 Larsen[4]等通过中耳黏膜息肉形成动物模型研究发现息肉形成的最初阶段是上皮破裂，造成上皮破损处的纤维组织的增殖，然后上皮通过增殖和从周边迁移的形式覆盖脱垂的纤维组织，重新上皮化，完全覆盖息肉。上皮细胞增殖的意义不只是在于修复，更重要的是在于通过主动合成和分泌多种细胞因子，参与对黏膜炎症反应的调节。鼻腔局部应用糖皮质激素是目前治疗鼻息肉的有效手段之一，但其作用途径尚未明了。本研究通过鼻内局部使用糖皮质激素，进一步观察抑制凋亡基因Bcl-2和促凋亡基因Bax的变化。结果显示，通过局部激素治疗后，息肉上皮、上皮下组织和腺体上皮中，Bcl-2蛋白表达明显减低，Bax蛋白则出现增强的趋势。进一步表明鼻息肉组织中由于凋亡基因蛋白的高表达，促凋亡基因蛋白的低表达导致了息肉上皮和腺上皮细胞等凋亡抑制，促成息肉的形成和发展的。鼻腔局部应用糖皮质激素可通过这一途径发挥作用。但具体的信号转导机制还有待于更深一步研究。

　　【参考文献】

　　1 杨继红，黄加云，谢丽薇，等. 鼻息肉组织中Bcl-2 蛋白表达的初步研究. 宁夏医学，2002，24(7)：395～396.

　　2 Reed J C. Bcl-2 and regulation of programmed cell death. J Cell Biol, 1994,124:1～6.

　　3 Simon HL, Yonsefi S, Schranz C, et al. Directed demonstration of delayed eosinophil apoptosis as a mechanism causing tissue eosinophilia.J Immunol, 1997, 158:3902～3908.

　　4 Larsen PL, Tos M, Kuijpers W, et al. The early stages of polyp formation. Laryngoscope， 1992， 102(6):670～677.