人血浆中全麻药丙泊酚的定量分析

　　作者：李忠 王学军 李向阳 作者单位：1.青海红十字医院;2.青海大学医学院

　　【摘要】 目的 建立人血浆中丙泊酚的检测方法。方法 采用RP-HPLC法测定人脑脊液中药物浓度，色谱柱为Lichrospher C18(4.6×250 mm，5 μm)，流动相为甲醇-水 (72∶28)，流速1 mL·min-1，荧光检测λex为276 nm、 λem为312 nm。结果 在0.02～10 mg·L-1范围内丙泊酚峰面积与内标峰面积之比与浓度线性关系良好, 最低检测浓度为0.02 μg·L-1，平均方法回收率为90.55%～97.45%，日内、日间RSD均小于10%。结论 本测定方法操作简便、灵敏度高、专一性强、结果准确，适合于丙泊酚的临床治疗药物监测及药代动力学研究。 李忠(1975～)，女，汉族，河南籍

　　【关键词】 丙泊酚 血浆

　　RP-HPLCQUANTITATIVE ANALYSIS OF PROPOFOL IN HUMAN LASMA

　　Li Zhong1 ，Wang Xuejun1 , Li Xiangyang2

　　(1. Qinghai Red Cross Hospital;2.Qinghai University Medical College)

　　Abstract Objective To develop a simple, sensitive and rapid method for the determination of propofol in human plasma. Methods The concentration of propofol was determined by RP-HPLC method. The analysis involved a 250 mm × 4.6mm column packed with C18(5 um) ; the mobile phase consisted of methyl alcohol-water (72∶28) ; The fluorescence detective wave-lengths were:λex=276 nm,λem=312 nm. Results A good linearity was obtained in the range of 0.02～10 mg·L-1, the average recovery of propofol was between 90.55～97.45%; the relative stand deviations of within-day and between day were less than 10%; the minimal detectable concentration in plasma was 0.02 μg·L-1. Conclusion The result demonstrated that the method was simple, sensitive, accurate and reliable for the determination of propofol in human plasma, it was suitable for the pharmacokinetics study and clinical monitoring of propofol.

　　Key words Propofol Plasma RP-HPLC

　　丙泊酚(propofol, 异丙酚) 化学名为2,6- 二异丙基苯酚，是一种烷基酚类短效静脉麻醉药[1]，具有静脉注射后全身麻醉迅速、起效快、作用时间短、平稳和恢复快等优点而被广泛应用于临床。丙泊酚主要用于全身麻醉的诱导和维持，与硫喷妥钠联合使用可以减轻不良反应[2]，也可用于局部麻醉病人的清醒性镇静，能有效缓解病人术中听到手术器械声响或内脏牵拉引起的紧张、焦虑和不适。为保证丙泊酚的临床合理应用，有必要建立一种准确、灵敏、简便的丙泊酚血药浓度动态检测方法，目前文献报道的丙泊酚血药浓度检测方法主要有荧光光谱法[3]、HPLC- 紫外检测法[4]、HPLC-荧光检测法[5]和气相色谱- 质谱联用法(GC- MS) [6]。

　　脑脊液中丙泊酚的检测，文献报道较少，血浆中丙泊酚的检测文献报道方法大多采用荧光法、气质联用法等，干扰因素多，操作烦琐。本文在他人工作的基础上，经过系统试验，建立了人血浆中丙泊酚的RP-HPLC测定方法，该方法简单、灵敏、准确，可广泛用于丙泊酚的临床药物监测和药代动力学研究。

　　1 材料与方法

　　1.1 试药与仪器

　　丙泊酚对照品(纯度99.9%，青海省医药有限公司提供)，内标麝香草酚(北京恒业中远化工有限公司提供)，甲醇(色谱纯，山东禹王试剂公司提供)。

　　高效液相色谱仪：M510型泵和477型荧光检测器(美国Waters公司)，N2000型色谱工作站(浙江大学智能信息工程研究所)，TGL-16B高速离心机(上海安亭科学仪器厂)，XW-80A旋涡混合器(上海精科有限公司)。

　　1.2 色谱条件

　　色谱柱：Lichrospher C18(4.6×250 mm，5 μm)，流动相为甲醇-水 (72∶28)，流速1 mL·min-1，荧光检测λex为276 nm、λem为312 nm，进样量为20 μL。

　　1.3 溶液配制方法

　　精密称取丙泊酚对照品10 mg置10 mL容量瓶中，加入甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得1 mg.mL-1丙泊酚的储备液。以此标准储备液稀释配制成各种浓度的对照品溶液。另取内标麝香草酚约 10 mg, 精密称定,置10 mL容量瓶中，加入甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得1 mg.mL-1麝香草酚储备液。

　　1.4 给药方案和血样采集方法

　　采用“Diprifusor”TCI系统 (含1 %异丙酚50mL)，选择内置的TCI模式,输入病人的年龄、体重和靶浓度。待锥管内麻醉起效后,开始行丙泊酚TCI镇静至手术结束前5～10 min。其间予病人鼻吸氧,氧流量3 L·min-1。丙泊酚TCI镇静初始靶浓度为0.4 mg·L-1,此后根据病人反应及所要求的镇静水平调整靶浓度,每次追加或减少的剂量为0.1 mg·L-1,时间间隙不少于3 min。在病人的镇静评分(5分评分法)达到2、3、4或5分不少于10 min后抽取静脉血3 mL,抗凝处理后,离心10 min,取上层血浆于-20℃保存待测。

　　1.5 样品处理方法

　　精密吸取血浆样品 200 μL置 0.5 mL 的塑料离心管中, 加入100 μL的麝香草酚内标溶液 (10 μg.mL-1)，旋涡混匀后，加100 μL30%高氯酸，旋涡混匀1 min，离心(16000 r/min)10 min, 精确吸取20 μL上清液进行分析。

　　2 结果

　　2.1 色谱行为

　　在本实验条件下，丙泊酚和内标与杂质分离良好，基线平稳，内标、丙泊酚出峰时间分别为5.1、10.0 min，色谱图见图1。

　　2.2 标准曲线制备及最低检测浓度测定

　　取离心管数支，分别加入不同量的丙泊酚对照品溶液后以氮气流吹干，加入空白血浆0.5 mL，涡旋1 min，配成含丙泊酚分别为0.02、 0.05、 0.1、 0.2、 1、 2、 5和10 mg·L-1的标准血浆，按“血浆处理”项操作，每种浓度做5份样品，记录色谱图，计算丙泊酚峰面积As和内标峰面积Ai的比值f。以平均比值f(f=As/Ai)对血药浓度(C)作回归计算，得回归方程：f= 0.012C +0.0013 (r = 0.9986)，按上述条件测得丙泊酚在血浆中的定量限为0.02 μg·L-1。

　　2.3 精密度试验

　　按“标准曲线制备”项下操作，配制浓度为0.02、1、10 mg·L-1的标准血浆样品，按“样品处理”项下操作, 以样品峰面积与内标峰面积之比f计算日内与日间精密度，结果测得低、中、高三种浓度的日内精密度分别为8.44%、5.12%和2.03%，日间精密度分别为10.1%、8.7%和4.8%。

　　2.4 回收率试验

　　取离心管数支，分别加入对照品溶液适量，以甲醇配成含丙泊酚浓度为0.02、1、10 mg·L-1的溶液后，加入0.1 mL 10mg·L-1的麝香草酚，涡漩混匀后以氮气吹干，用100 μL流动相溶解残渣，精密吸取20 μL进样分析，得样品与内标峰面积之比fs。另取离心管数支，分别精密加入不同量的对照品溶液及0.5 mL空白血浆，配成含丙泊酚为0.02、1、10 mg·L-1的血浆样品，每种浓度各做5份样品，按“样品处理”项下操作，精密吸取20 μL进样分析，得样品与内标峰面积之比fx。丙泊酚在血浆中的回收率按公式R%=fx/fs×100%计算，结果测得低、中、高三种浓度的平均回收率分别为90.55%，96.51%和97.45%。

　　2.5 样品测定

　　采用“Diprifusor”TCI系统给予异丙酚镇静的病人按“给药方案和血样采集”项下的方法给药并采血后,其血样按“血样预处理”项下的方法进行处理,然后作HPLC分析。结果测得嗜睡期和麻醉期异丙酚的血药浓度分别为1.02和3.58 mg·L-1。

　　3 讨论

　　用沉淀法处理血浆样品，沉淀试剂为高氯酸，根据文献报道，当6%高氯酸与血浆的体积比为1.5∶1时，高氯酸沉淀蛋白的能力最强 [7]，但加入的沉淀试剂过多会稀释血浆中的药物，这将对测定方法的灵敏度提出更高的要求，故本文采用30%的高氯酸，与血浆的体积比为1∶3。

　　对比了高氯酸、乙腈和乙醇三种常用沉淀试剂，结果表明乙醇沉淀蛋白不完全，且灵敏度偏低，乙腈沉淀蛋白的能力较强，但所需量较多，故最终选择高氯酸为沉淀试剂。

　　【参考文献】

　　[1]戴良图,刘志方,李光明,等. 丙泊酚在人工流产中镇痛的疗效[J]. 中国新药与临床杂志,2000,19(6):517

　　[2]Naguib M,Sari-Kouzal A. Thiopentone-propofol hypnotic synergism in patient[J]. Br J Anaesth,1991,67(1):2

　　[3] 路丽华，张惠，高蓉，等. 荧光检测异丙酚血药浓度[J]. 第四军医大学学报, 2005, 26(11):86

　　[4] 夏东亚，许霁虹，王彦，等. 高效液相色谱法测定丙泊酚血药浓度[J]. 解放军药学学报，2005，31(1):72

　　[5] 蔡美华，朱玲，王珊娟，等. 反相高效液相色谱- 荧光法测定血浆中丙泊酚的浓度[J]. 中国药房，2003，14(12): 734

　　[6] 郑宏，曹兴华，王江，等. 气相色谱- 质谱法测定异丙酚的血药浓度[J]. 中华麻醉学杂志，2004，24(1): 71

　　[7] 曾经泽.生物药物分析. 北京：北京医科大学中国协和医科大学联合出版社，1998.28