两种神经髓鞘染色法的比
发表时间：2009-06-26 浏览次数：825次
作者:林华,唐瑞文 关键词: 髓鞘； 染色法
神经纤维分为有髓鞘纤维和无髓鞘纤维两大类。有髓鞘纤维有一层很厚管状节段性结构，含有60%脂质、40%蛋白质，脂质包括脂肪、卵磷脂、脑磷脂和胆固醇等。经HE染色，切片上髓磷脂常被有机溶剂溶解呈空白细丝状，因此需用特殊染色方法才能呈示。笔者采用Loyez苏木精染色法和固绿髓鞘染色法方法，比较髓鞘染色效果。
1 材料与方法
1.1 材料
尸体解剖脊髓组织。常规脱水、透明、浸蜡、包埋、切片，同一例标本做2种髓鞘染色。
1.2 方法
1.2.1 Loyez苏木精染色法(1)试剂配制。碳酸锂苏木精染液：苏木精1 g，纯乙醇10 mL，蒸馏水9 mL，碳酸锂饱和水溶液（约1.3%）2 mL。先将苏木精溶于乙醇，放入60 ℃温箱中30 min,充分溶解后，加入蒸馏水、碳酸锂，此液临用时配制。（2）染色方法。组织切片厚5～8 μm,脱蜡至水，加入4%铁明矾水溶液媒染24 h，多次蒸馏水洗。在新配的碳酸锂苏木精液中染12～24 h(加温后可缩短时间)，自来水冲洗数分钟。1%盐酸水溶液分化0.5～1 min，充分流动水洗，并使之返蓝黑色为止。乙醇脱水，二甲苯透明，中性树胶封固。
1.2.2固绿髓鞘染色方法(1)试剂配制。固绿乙醇液：固绿(FCF)0.5 g，95%乙醇100 mL，1%冰醋酸0.5 mL。核固红水溶液:核固红0.1 g，硫酸铝5 g，蒸馏水100 mL。先将硫酸铝溶解于蒸馏水中，再加入核固红煮沸，待冷却后过滤备用。染液可保存于室温。碳酸锂水溶液：碳酸锂0.3 g，蒸馏水100 mL。（2）染色方法。切片（8 μm）脱蜡至蒸馏水。切片经95%乙醇处理1 min，于FCF 37 ℃染色30 min，直接用95%乙醇洗2次（每次10 s）,蒸馏水洗3次（每次15 s），0.3%碳酸锂水溶液分色（镜下控制）。蒸馏水洗3次（每次15 s），核固红溶液复染核30 min，蒸馏水洗。常规梯度乙醇脱水，二甲苯透明，中性树胶封固。
1.3 结果
1.3.1 Loyez苏木精染色法有髓鞘神经纤维呈蓝黑色，底色带淡蓝色至无色(图1A)。
1.3.2 固绿髓鞘染色法神经髓鞘呈深绿色，细胞核呈红色，脱髓鞘纤维均不着色(图1B)。
2 讨论
髓鞘染色在疾病诊断和研究中有着一定的意义。神经纤维在许多疾病中都出现髓鞘变性、脱失或轴突变性，如多发性硬化症、亚急性脊髓联合变性、急性出血性白质脑炎、播散性脑脊髓炎、种痘后脑脊髓炎等。在病理检查中，常发现溃变神经纤维的原纤维发生肿胀、碎裂，继而呈颗粒状，通过髓鞘染色可显示其病变累及范围、区域及程度。
髓鞘染色通常为显示正常和变性髓鞘，可根据需要而选用染色方法。髓鞘是一种脂蛋白，在石蜡制片过程中会丢失一些，但还有足够的磷脂能够保存下来，其实髓鞘的染色也就是脂蛋白质的染色，传统的Weil、Loyez髓鞘染色法原理是：髓鞘的脂质＋媒染剂→结合物＋氧化后苏木精→“色沉”（蓝黑色）。使用的氧化后铁苏木精、碳酸锂苏木精，沉淀比较多，切片分色难、不好掌握，染色时间比较长，并且切片容易脱片，配制试剂又多又复杂，所用的化学试剂繁多。如果经验不足者，染色效果不好，并且容易污染，此染色切片不能太厚，一般是5 μm左右。
固绿髓鞘染色法的染色原理是，固绿被髓鞘还原并与髓鞘相结合，而使髓鞘呈深绿色。该染色方法具有试剂配制简单，染色时间短，初学者容易掌握。由于它是退行性染色法，所以固绿染色可适当偏深；但分色是关键性步骤，一定要掌握好。这种染色法对比鲜艳，效果比较理想，是一种显示正常髓鞘染色的好方法之一。此染色切片必须要8～10 μm,太薄了显示神经髓鞘就不清晰，红绿对比色就不鲜艳。
作者单位: 福建医科大学 附属第一医院病理科，福州 350005
