复方中药复明片对兔视网膜脱离后视网膜组织形态的影响
发表时间：2010-07-05 浏览次数：441次
作者：彭清华，刘娉，彭俊，姚小磊，谭涵宇 作者单位：(410007)中国湖南省长沙市，湖南中医药大学第一附属医院中医眼科学重点学科;(410016)中国湖南省长沙市，湖南旺旺医院眼科中心;(421001)中国湖南省衡阳市，南华大学医学院
【摘要】目的：研究复方中药复明片对兔实验性视网膜脱离后视网膜组织形态结构的影响。方法：用有色家兔72只，设正常对照A组、模型B组、西药对照C组、复明片D组，每组9只。B，C，D组制作视网膜脱离模型。造模后第1d下午开始给药，A组与B组均予温开水灌胃，C组予西药混合溶液灌胃，D组予复明片混悬液灌胃，皆5mL/kg，1次/d。造模后7，14，21d观察各组视网膜复位情况，取材后光镜下观察视网膜组织形态学结构变化。结果：复明片能促进脱离视网膜复位,减轻视网膜组织及细胞的形态学损伤，改善视功能。结论：复明片有保护视网膜组织结构的作用。
【关键词】 复明片;益气养阴活血利水法;视网膜脱离模型;组织结构;兔
Effects of fuming tablets on morphology of retinal tissue after retinal detachment of rabbits
QingHua Peng，Ping Liu，Jun Peng，XiaoLei Yao，HanYu Tan
Foundation items：Natural Science Foundation of Hunan Province,China (No.06JJ50056);Scientific Research Fund of Hunan Provincial Education Department, China (No.98B078,06A052);Scientific Research Fund of Hunan Provincial Health Department, China(No.204084)
Department of Traditional Chinese Ophthalmology，the First Affiliated Hospital of Hunan University of Traditional Chinese Medicine, Changsha 410007, Hunan Province, China;Department of Ophthalmology, Hunan Want Want Hospital, Changsha 410016, Hunan Province, China;Medical School of Nanhua University, Hengyang 421001, Hunan Province, China
Astract AIM: To investigate effects of fuming tablets(FMT) on morphology of retinal tissue after retinal detachment(RD) of rabbits. METHODS: Seventytwo rabbits were divided into normal group (group A), model group (group B), western medicine group(group C), FMT group(group D). Each group had 9 rabbits.Group B,C,D were made RD model. After models were made one day they were given medicine. Group A and B were administrated intragastrically with warm water. Group C was administrated intragastrically with western medicine solution. Group D was administrated intragastrically with FMT suspension, once a day. After models were made, the retina recovery and the changes of morphology of retinal tissue on the 7th, 14th, and 21st day, were observed with microscope. RESULTS: FMT can promote the retinal reattachment, reduce the morphology damage of retina cells and tissue and improve sight. CONCLUSIONS: FMT has effects of protecting retinal tissue structure
KEYWORDS: fuming tablets; method of qibenefitting, yinfostering, and blood invigorating and diuresisactivating; retinal detachment model; tissue structure; rabbit
0 引言
益气养阴活血利水法能促进视网膜脱离(retinal detachment, RD)术后患者视网膜的复位，提高其术后视功能[1]。为了探讨其作用机制，我们观察具有益气养阴活血利水作用的复明片对兔实验性视网膜脱离后视网膜组织形态结构的影响如下。
1 材料和方法
1.1 材料
成年健康有色家兔72只，雌雄各半，由湖南中医药大学实验动物中心提供。复明片由黄芪、生地、茯苓、车前仁、地龙等益气养阴活血利水中药按现代制剂制备工艺制成，由湖南中医药大学第一附属医院药剂科提供。使用时研成粉末，温开水混合成浓度为100g/L的混悬液。温开水混合成每升水含VitB 1276mg，ATP 1102mg，维脑路通734mg的溶液。
1.2 方法
造模[2]后1d下午开始给药，A正常对照组与B模型对照组均予温开水灌胃，C西药对照组予西药混合溶液灌胃，D复明片治疗组予复明片混悬液灌胃，皆5mL/kg，1次/d。造模后7，14，21d，各小组取对应兔6眼，用30g/L戊巴比妥1mL/kg耳缘静脉注射麻醉兔，摘除眼球，生理盐水冲洗干净。在冰生理盐水中，沿角巩缘剪开眼球达360°，弃角膜、晶状体、玻璃体，保留视网膜连同脉络膜巩膜组织。取各组对应编号中的3眼置于40g/L多聚甲醛固定，12h后修片，切取颞侧脱离部位视网膜(正常对照组切取相应部位)，再置于新的40g/L多聚甲醛固定液，石蜡切片，HE染色。光镜下观察视网膜组织病理形态学改变。
2 结果
2.1 术后7d病理形态学
正常对照组视网膜组织各层结构清晰、完整，排列整齐。光感受器细胞(photoreceptor cells, PRC)与视网膜色素上皮细胞(retinal pigment epithelial cells, RPE cell)连接紧密，形态正常，无变性。内、外核层及神经节细胞(retinal ganglion cell, RGC)数量和排列正常，无空泡样变性，神经纤维层清晰。Müller细胞框架纤维结构完整(图1)。模型对照组局部有浆液性扁平RD 3眼，裂孔处出现视网膜下纤维增生2眼。所有眼PRC与RPE cell结合疏松，视网膜不同层间均可见空泡样变性，其内可见少量有色素的吞噬细胞，PRC层结构排列紊乱，缺失变薄，细胞数目明显减少，大量空泡样变性，外节几乎全部变性脱落;内外核层、网状层结构紊乱，细胞变大、水肿、空泡样变，有核周空泡和核固缩;RGC部分水肿，神经纤维层出现空泡;部分Müller细胞纤维支架消失。PRC层和RPE cell层间有浆液性渗出液，其中RPE cell肥大、增生、游离，少量淋巴样细胞浸润。裂孔处出现视网膜下纤维增生眼脉络膜组织水肿2眼，纤维增生，原裂孔周围感光细胞(receptor cell, RC)外节脱落(图2A)。西药对照组视网膜已复位1眼，局部有浆液性扁平RD 2眼，裂孔处出现视网膜下纤维增生2眼。本组总体改变较模型对照组轻，视锥、视杆细胞层外节变性脱落，空泡样变性，细胞数较正常减少，排列紊乱(图2B)。复明片治疗组视网膜已复位2眼，局部有浆液性扁平RD 1眼，裂孔处出现视网膜下纤维增生1眼。外节变性较模型对照组和西药对照组轻，小量空泡样变性;视细胞数目较多、排列欠整齐(图2C)。
2.2 术后14d病理形态学
正常对照组无变化。模型对照组视网膜已复位2眼，局部有浆液性扁平RD 1眼，裂孔处出现视网膜下纤维增生3眼。PRC与RPE cell结合较7d紧密，RPE cell色素中度紊乱增生，视网膜不同层间仍有空泡样变性，同样可见少量有色素吞噬细胞，PRC层排列紊乱，缺失变薄，空泡样变性，偶见核固缩现象，其中3眼有明显的内外核层变薄;内外核层、网状层细胞变大、水肿，结构紊乱，囊变;部分RGC水肿，神经纤维层空泡出现。部分Müller细胞支架纤维消失。裂孔处出现视网膜下纤维增生眼视网膜结构不清，脉络膜纤维细胞长入，纤维组织增殖，原裂孔周围RC外节脱落(图2D)。西药对照组视网膜已复位2眼，局部有浆液性扁平RD 1眼，裂孔处出现视网膜下纤维增生2眼。PRC层结构紊乱，空泡样变，外节有所恢复;内外核层、网状层结构紊乱，核固缩，内外核层缺失、变薄;RGC部分水肿，神经纤维有空泡样变性;部分视网膜有Müller细胞支架纤维断裂(图2E)。复明片治疗组视网膜均已复位3眼，裂孔处出现视网膜下纤维增生1眼。视网膜结构欠清晰，RPE cell层外观正常，PRC基本正常，局部有空泡样变性;内外核层、网状层结构少许紊乱;RGC和神经纤维层形态趋于正常，少量RGC囊变;Müller细胞纤维支架结构欠清晰(图2F)。
2.3 术后21d病理形态学
正常对照组无变化。模型对照组视网膜均已复位3眼，裂孔处出现视网膜下纤维增生3眼。PRC与RPE cells结合较第2wk紧密。视网膜结构基本清晰，偶可见吞噬色素的单核细胞;RPE cells层外观基本正常，色素轻度紊乱增生，PRC形态基本正常，局部空泡样变性;内外核层、网状层结构仍有少许紊乱，外网状层有少量囊变;RGC和神经纤维层形态正常，少量RGC囊变;部分视网膜有Müller细胞支架纤维断裂。裂孔处出现视网膜下纤维增生眼增生处视网膜结构不清，脉络膜纤维细胞长入，纤维组织增殖，切口周围RC外节脱落(图2G)。西药对照组视网膜均已复位3眼，裂孔处出现视网膜下纤维增生2眼。PRC层结构有所恢复，仍有空泡样变;内外核层、网状层趋于清晰，细胞数目增多;RGC轻度水肿，部分空泡样变性;部分视网膜有Müller细胞支架纤维断裂(图2H)。复明片治疗组视网膜已复位3眼，裂孔处出现视网膜下纤维增生1眼。视网膜结构基本清晰，RPE cells层外观正常。PRC基本正常，局部有空泡样变性;内外核层、网状层结构欠清晰。RGC和神经纤维层形态基本正常，少量RGC囊变;Müller细胞纤维支架结构清晰(图2I)。
3 讨论
根据其临床表现，“视网膜脱离”可归属于“外不见证，从内而蔽”的内障眼病中“暴盲”“神光自现”等范畴。视网膜脱离产生之原因，多为患者气虚不固致视网膜不能紧贴球壁而脱落;而视网膜脱离手术是一种人为的眼外伤，术后多有瘀血病理存在，有时术中还可致视网膜出血;本病术中无论放水与不放水，其术后多有视网膜下积液存留;而术中不可避免之出血又可使眼部阴血亏虚。中医眼科历来重视围手术期的药物治疗，尤注重手术后用药。在RD的治疗上，目前一般主张中西结合，在RD围手术期应用中医中药，如术前应用补肺生津兼以利水方，术后应用滋养肝肾、益气养阴兼以活血化瘀方[3];或服用具有调理补益、活血化瘀渗湿功用的中药;或配合散结通络，活血明目中药RD 2号方口服;或采用和营清热、温阳利水法中药治疗;或应用中药RD 1号方(利水方剂)联合皮质内固醇治疗，或针刺疗法改善实验性RD视网膜组织中PKC的活性、及提高兔眼环扎术后房水氧含量，均可以促进术眼的恢复，防治手术并发症[4]。正常情况下RPE cell顶端表面的指状突起包裹视杆和视锥外节部分处于“接触抑制”状态。当神经视网膜与RPE cell分离后，二者失去联系，正常的“接触抑制”状态被破坏，包括RPE cell在内的多种视网膜细胞发生分化、迁移和增殖反应，启动RD后的细胞增殖过程，导致整个视网膜结构紊乱，最终丧失视功能;同时RD后脉络膜对外层视网膜营养供应发生障碍，RC迅速发生变性、凋亡，首先是RC外节段丢失，久之则整个RC层出现萎缩。而视网膜复位“接触抑制”状态恢复，则可抑制细胞的凋亡与增殖，故RD复位术后视功能恢复情况和RD病程长短密切相关。RD后RPE cell在急性期[5]缺失并进入刺激性DNA合成阶段，亚急性期细胞变大、迁移和增殖，使缺失的区域得以闭合[6];RGC则在RD后2h开始丢失，早期复位(RD后10d)可使丢失停止，晚期复位(RD后90d)则可进一步损伤RGC;Müller细胞则对损伤呈高反应性，其增生和肥大不仅填充了视网膜中死亡的PRC留下的空缺，并在视网膜下空间生长形成巨大瘢痕倾向，从而完全阻碍了外节的再生，视网膜神经细胞的修复亦导致视网膜自身纤维化形成PVR，最终不可避免地对视功能的恢复产生不利影响。在临床上我们也注意到RD如果长期得不到复位，或迟或早会发生PVR;视网膜一旦成功复位，PVR发生率将大大降低。总之增生与瘢痕形成是一个连续的渐进过程，旺盛的增生随时会导致瘢痕形成，而在瘢痕形成的过程中离不开细胞的异常增生。本实验结果显示复明片能促进视网膜脱离后视网膜的复位，恢复RPE cell的“接触抑制”状态，抑制其迁移及增殖，促进视功能的恢复。
【参考文献】
1 彭清华,范艳华,段国平,等.益气养阴活血利水法治疗视网膜脱离术后的临床研究.湖南中医药大学学报2009;29(1):4749
2 刘娉,彭清华. 复明片对兔实验性视网膜脱离后玻璃体腔液IL6表达的影响.国际眼科杂志2009;9(6):10631065
3 高翔,吴红斌.中药在孔源性视网膜脱离手术前后的应用.中国中医眼科杂志 2003;11(4):225226
4 Grierson I, Hiscott P, Hogg P, et al. Development, repair and regeneration of the retinal pigment epithelium. Eye 1994;8(Pt 2):255262
5 王永淑,白彩霞.实验性视网膜脱离后视网膜色素上皮细胞增殖的动态研究.兰州医学院学报2003;29(2):69
6 卢华,马志中,曹利群,等.大鼠视网膜脱离及复位状态下存活的视网膜神经节细胞计数.中华眼底病杂志2004;20(4):233236
