瘦素预处理对兔急性肺栓塞血清炎性因子的影响

　　瘦素具有多种生物学效应，随着目前研究发现，瘦素还具有增加机体免疫应答能力的作用。本研究通过制备白兔的自体血栓模型后，一组给予外源性瘦素预处理后观察两个时间点血清IL-6及IL-8的水平变化，以及相对应的症状，病理分析等从而研究瘦素预处理肺栓塞后肺损伤程度是否得到改善。　　材料与方法　　一、试验动物及分组　　选取健康新西兰大耳白兔24只，兔龄5个月左右，雄性，体重2.1一2.4kg(实验兔子由河北联合大学动物实验室提供)。造模后随机分为两组，模型组和瘦素预处理组，每组12只。　　二、模型的制备步骤及成功的判定　　1.动物模型的制备　　首先将实验兔子麻醉，经静脉缓慢推注戊巴比妥钠，(上海生荣药业公司)，剂量为30m剔kg，每半h检查一次麻醉深度，必要时可追加麻醉，麻醉成功后，颈部剪毛，先用碘酒、酒精局部消毒，再行一长约2cm的纵向切口。并分离右侧颈静脉，经右颈静脉插人一无活瓣静脉鞘，深度约4一5cm或直至右心房，经导管注人栓子后，快速推注生理盐水3一5ml。右股动脉固定留置套管针，用于采血。所有动物模型均按上述方法复制，麻醉意外或中途死亡2例兔均剔除本实验。模型组对照组同期以相同的方式输人等量NS。　　2.肺栓塞模型判定的标准注入栓子后10-20min，兔如出现呼吸急促、口唇紫给和肺内可闻及干湿暖音等肺栓塞体征，经数字64排螺旋CT证实模型建立成功比。　　三、实验方法　　两组于栓塞前Oh分别抽取静脉血2ml，之后瘦素预处理组经颈内静脉注人外源性重组瘦素(recombinantmouselep-tin，美国R&DSystem，公司，剂量为50,剔k:s7;模型组经行颈静脉管注人等量的生理盐水。之后于造模后4h两组分别再取静脉血2ml，此两次血样用4℃低温离心机以3000r/min离心(离心10min)，收集上清液送检。　　四、检测指标　　白介素(IL-6)和白介素(IL-8)，此两项指标均按照ELISA试剂盒说明书检测。　　五、统计学处理　　实验数据用%士s表示，组内资料经SPSS15.5统讨一软件行单因素方差分析，有显著差异后，两两比较采用q检验，组间数据比较采用t检验。对于症状用百分比进行描述。　　结果　　一、两组炎症因子的变化由实验数据显示:炎性因子IL-6的水平在模型制作前即Oh时，两组间几乎无差别，而在造模后4h两组间出现明显差别，瘦素预处理组检测的血清IL-6指标明显低于模型组，P<0.05具有统计学意义。同样得出炎性因子IL-8的水平在模型制作前即Oh时，两组间几乎无差别，而在造模后4h两组间出现明显差别，瘦素预处理组检测出的血清IL-8指标明显低于模型组，P<0.05具有统计学意义。　　二、症状所见瘦素预处理组1l例，4h时严重呼吸困难0个(所占比为0%)，呼吸急促2个(0.18%)，轻度喘息4个(0.36%)，呛咳5个(0.45%);模型组11例，4h时严重呼吸困难7个(所占比为0.63070)，呼吸急促2个(0.18%)，轻度喘息0个(0%)，呛咳2个(0.18%)。　　讨论　　在损伤疾病组织中，可检测到瘦素指标显著升高，目前一些体内及体外的实验亦证实，机体或组织在炎症状态下瘦素浓度明显增高，肺栓塞就是由于机械的栓子阻塞肺动脉主干或其分支后，其血管支配的肺组织因缺血缺氧发生了一系列病理生理变化，激活并趋化中性粒细胞，刺激了单核一巨噬系统、促进淋巴细胞的增殖同时诱导了外周血IL-6及TNF-a等炎性因子的表达。由于栓子的大小不同阻塞的部位和范围不同，所引起的临床症状亦不同，但其病理显示阻塞血管所支配的肺组织内有大量的炎性细胞浸润，我的前期研究显示造模成功后4h炎性反应最强烈，实验兔子症状表现呼吸困难最重，此次试验亦证实了这一点。前期研究还显示4h时血清炎性因子TNF-。及II}1p存在高表达，表明这两种炎性因子参与了肺组织损伤。此次实验瘦素预处理组在4h时实验兔子临床症状相对都较模型组减轻(结果二)，从此次研究结果一显示，IL-6及IL-8的水平在模型制作前即0h时，两组间几乎无差别，而在造模后4h两组间出现明显差别，瘦素预处理组检测出的血清IL-6及IL-8指标明显低于模型组，而且P<0.05具有统计学意义，说明瘦素对损伤的肺组织有保护作用，其机理可能瘦素从炎症反应的瀑布效应来分析，在徐彤彤等人的研究发现，瘦素在缺血所导致的组织炎性反应中，从多个环节抑制中性粒细胞激活、释放，并可抑制p56lyn酪氨酸的活性及其相应的一系列效应以及Ras的激活，从而抑制炎性细胞渗出。有学者在胰腺炎的动物实验中还发现，给予外源性瘦素组，胰腺的损伤明显减轻于模型组，可能与瘦素活化了一氧化氮氧化途径有关。本研究显示外源性瘦素干预组，血清IL-6及IL-8明显渗出减少，说明瘦素对血清IL-6及IL-8两种炎性因子产生了抑制作用，从而降低了白细胞的渗透，同时可能有促进组织修复的作用，从而抑制肺组织损伤，达到了肺组织的保护作用。　　参考文献　　TORBICKI A,PERRIER A,KONSTANTINIDESS. Guidelines on the diagnosis and management of acute pulmonary embolism:the task force for the diagnosis and management of acute pulmonary embolism of the European Society of Cardiology (ESC)[J].European Heart Journal,2008.2276-2315.　　Yan GT,Xu H,Lin J. After the thick poison the protection function of the influence of Leptin upon the bowel way function and the liver kidney function[J].Is Chinese pathologic physiology magazine,2007,(08):1566-1569.doi:10.3321/j.issn:1000-4718.2007.08.026.　　Bellmeyer A,Martino JM,Chandel NS. Leptin resistance protects mice from hyperoxia-induced acute lung injury[J].Am J Res Crit CareMed,2007,(06):587-594.　　刘连荣,范勇,赵新骞. 多层螺旋CT肺血管造影在肺动脉栓塞中的诊断价值[J].临床肺科杂志,2012,(03):441-443.doi:10.3969/j.issn.1009-6663.2012.03.026.　　徐彤彤,刘世平,王晓珊. 瘦素预处理和缺血预处理在小鼠心肌缺血/再灌注中的心肌保护机制[J].中国危重病急救医学,2010,(02):77-80.doi:10.3760/cma.j.issn.1003-0603.2010.02.017.　　Liu ZH. Lung artery clots[S].Beijing:Science technique publisher,2004.167-168.　　Xu Y,Chen SL. IL-4 and rightness IL-10 kidneyseses lack blood to infuse again to note to hurt the big rat serum TNF-α and Cr level changes of influence and meaning[J].Medical science in Zhejiang,2006,(10):1029-1037.　　刘温娟,张一梅,高羽飞. 肺栓塞大鼠肺动脉和右心室HIF-1α的表达[J].临床肺科杂志,2009,(06):734-736.doi:10.3969/j.issn.1009-6663.2009.06.013.　　姚艳敏,徐彤彤,武琦. 兔急性肺血栓栓塞症TNF-α,IL-1β和IL-4变化的实验观察[J].中国实验方剂学杂志,2012,(08):22-224.doi:10.3969/j.issn.1005-9903.2012.08.064.　　姚艳敏,徐彤彤,武琦. 瘦素对兔急性肺栓塞后TNF-α、IL-1β、Hs-CRP水平的影响[J].中国老年学杂志,2011,(10):3977-3978.doi:10.3969/j.issn.1005-9202.2011.20.047.