生化分析仪试剂间交叉污染对总胆汁酸测定的影响研究

　　总胆汁酸是一种胆固醇代谢物，可通过生化分析仪测定总胆汁酸，获取肝脏疾病诊疗信息。但在总胆汁酸检测过程中，存在许多干扰因素影响检测结果。本文主要探讨试剂间交叉污染对总胆汁酸测定所产生的影响作用，并针对干扰原因提出对策。　　1 资料与方法　　1.1仪器与试剂日立7600.020全自动生化分析仪及三酰甘油（TG）测定试剂盒（GPO.PAP法），总胆固醇（TC）测定试剂盒（COD.CE.PAP法），低密度脂蛋白胆固醇（LDL.C）测定试剂盒（直接法），高密度脂蛋白胆固醇（HDL.C）测定试剂盒（直接法），载脂蛋白A1（ApoA1）测定试剂盒（免疫比浊法），载脂蛋白B（ApoB）测定试剂盒（免疫比浊法），以及总胆汁酸测定试剂盒（循环酶法）。　　1.2测定方法　　1.2.1干扰项目筛选方法先将无黄疸、无乳浊、无溶血的新鲜血清标本进行混合，在生化仪上单独测定总胆汁酸项目，重复测定20次，以测定结果作为对照[1].采用相同的血清标本，在TG、TC、ApoA1、ApoB、HDL.C、LDL.C等生化项目检测后　　进行总胆汁酸测定，连续测定3次，若测定结果显示与对照相差幅度大于5%,则可判定为试剂交叉污染，按此种方法进行总胆汁酸交叉项目筛选[2].结果显示TC试剂对总胆汁酸测定结果具有正干扰作用，其他项目无明显干扰。　　1.2.2观察清洗吸样针能否改善交叉污染情况进行TC测定后，立即进行总胆汁酸测定，连续测定2次，记录结果。在TC测定之后，用碱性液体进行吸样针清洗，然后再进行总胆汁酸测定，连续测定2次，记录结果。对比两次测定结果。在TC测定之后，用对仪器进行特殊清洗，然后再进行总胆汁酸测定，连续测定2次，记录结果，将此结果与未进行清洗的总胆汁酸测定结果进行对比。　　1.2.3分析TC试剂对不同浓度的总胆汁酸的干扰TC测定结束后，分别对高浓度、中浓度、低浓度的总胆汁酸进行测定，连续进行2轮测定，每轮重复测定20次，分析TC对不同浓度的总胆汁酸测定结果所产生的影响。　　1.2.4确认交叉污染试剂生理盐水0.2mL与混合血清0.8mL进行混合，并以此作为对照管；采用TC检测R1试剂0.2mL与混合血清0.8mL进行混合，并以此作为实验管1;采用TC检测R2试剂0.2mL与混合血清0.8mL进行混合，并以此作为实验管2.每份检测样本进行20次总胆汁酸测定，对测定结果进行统计分析[3].　　1.3统计学处理采用SPSS13.0软件进行统计学分析，计量资料以狓±狊表示，组间比较采用单因素方差分析，以犘<0.05为差异有统计学意义。　　2 结果　　2.1清洗吸样针前后总胆汁酸测定结果对比未进行特殊清洗前，第1、2次总胆汁酸测定结果分别为（11.1±0.89）mol/L、（7.84±0.16）mol/L,差异有统计学意义（犘<0.05）。进行特殊清洗后，第1、2次总胆汁酸测定结果分别为（7.45±0.27）mol/L、（7.34±0.16）mol/L,对照管检测结果为（7.31±0.29）mol/L,两次测定结果与对照管比较，差异均无统计学意义（犘>0.05）。用碱性液体进行清洗后，第1、2次总胆汁酸测定结果分别为（7.45±0.27）mol/L、（7.34±0.16）mol/L,与对照管比较差异均无统计学意义（犘>0.05）。　　2.2TC试剂在不同浓度总胆汁酸测定中的影响对照管高浓度、中浓度与低浓度总胆汁酸测定结果分别为（84.5±0.51）mol/L、（36.15±0.14）mol/L、（7.35±0.24）mol/L.TC测定结束后，第1次测定的高浓度、中浓度与低浓度总胆汁酸结果分别为（86.63±0.53）mol/L、（37.24±0.48）mol/L、（11.1±0.89）mol/L,与对照管比较差异均有统计学意义（犘<0.05）。其中，检测结果相差最大为低浓度总胆汁酸，说明TC试剂对低浓度总胆汁酸检测干扰最大。TC测定结束后，第2次测定高浓度、中浓度与低浓度的总胆汁酸结果分别为（84.67±0.25）mol/L、（36.2±0.24）mol/L、（7.84±0.16）mol/L,与对照管比较差异均无统计学意义（犘>0.05）。　　2.3交叉污染确认结果在对照管中加入生理盐水后再进行总胆汁酸测定，结果为（7.06±1.35）mol/L,实验管1中加入试剂R1后再进行总胆汁酸测定，结果为（686.35±11.64）mol/L,在实验管2加入试剂R2后再进行总胆汁酸测定，结果为（7.64±0.93）mol/L.试验管1与对照管比较差异有统计学意义（犘<0.05）；试验管2与对照管比较差异无统计学意义（犘>0.05）。说明R1试剂对总胆汁酸测定影响最大。　　3 讨论　　酶循环法是实验室及医院常采用的血清总胆汁酸测定方法，在试剂测定中，容易出现试剂间交叉污染现象，采用自动生化分析仪进行加样时，由于需要接触的试剂较多，因此容易导致试剂间交叉污染情况[4].若试剂中含有某种可与下次测定的底物相互作用的物质，或含有下次测定底物时，则会对测定结果产生干扰[5].本研究结果显示，总胆汁酸测定主要交叉污染试剂为R1试剂。对试剂成分进行分析，发现R1试剂含有胆酸钠，且浓度较高，在其他试剂中均未发现该成分[6].胆酸钠对胆固醇酯酶和脂蛋白酯酶的对应底物具有促进作用，对酯酶水解也具有一定的促进作用，可以推断胆酸钠反应特性与胆汁酸相似[7].当胆酸钠浓度较高时，则会导致试剂间交叉污染，从而影响总胆汁酸测定结果[8].三酰甘油试剂也含有一定浓度的胆酸钠，进行干扰项目筛查时，总胆汁酸测定并未受到影响和，这主要与试剂成分和厂家不同有关[9].本研究表明，总胆固醇试剂在总胆汁酸测定中的影响作用可延续到第2次测定中，因此，在进行分析仪参数设定时，应将胆固醇项目设定在总胆汁酸项目后，也可在两次测定之间，加入其他测定项目，在测定时注意合理安排两个项目测定顺序。也可以采用特殊清洗方法，对吸样针进行清洗，尽量避免试剂间出现交叉感染的情况[10].综上所述，在进行总胆汁酸测定时，应尽量避免试剂间的交叉污染，降低测定结果的干扰性，加强仪器维护，通过试剂针特殊清洗，减少测定结果影响因素。　　参考文献　　[1]余书武，王霞。生化试剂污染对全自动生化分析仪检测结果的影响和分析[J].国际检验医学杂志，2013,34（24）：3403.3404.　　[2]易向民，郑敏。生化分析仪试剂间交叉污染对总胆汁酸测定的影响及分析[J].临床医学工程，2010,12（3）：218.219.　　[3]吕伟标，黄倩婷，贾璋林。常用生化试剂间交叉污染调查及测试顺序的研究[J].海南医学，2011,10（6）：124.125.　　[4]崔军。三酰甘油和总胆固醇试剂对总胆汁酸检测结果的影响[J].华西医学，2010,18（7）：236.237.　　[5]朱武军，邰飞，邵燕丽。循环酶法测定总胆汁酸试剂交叉污染及预防措施[J].国际检验医学杂志，2011,6（9）：368.369.　　[6]李光富，胡孝彬，陈江。全自动生化分析仪测定高密度脂蛋白胆固醇后对镁检测的交叉污染[J].检验医学，2010,14（8）：234.235.　　[7]易向民，黄建迎。糖化血清蛋白酶法试剂对总胆汁酸测定的影响[J].实验与检验医学，2009,24（3）：106.107.　　[8]韩应成。乙型肝炎患者血清总胆汁酸、胆碱酯酶联合测定的临床意义[J].临床肝胆病杂志，2010,18（2）：312.313.　　[9]刘亚萍，陈新军。前清蛋白、总胆汁酸、总胆红素测定在肝脏疾病中的应用[J].中国民族民间医药，2010,8（5）：196.197.　　[10]刘质彬。总胆固醇测定试剂对总胆汁酸测定的影响[J].基层医学论坛，2009,16（4）：246.247.　　（收稿日期：2013.12.15）