GCDFP-15在腋臭微创手术后残余大汗腺中的表达

作者                作者单位

余光银      北京大学深圳医院 病理科， 广东 深圳

李天石      北京大学深圳医院 病理科， 广东 深圳

蔡广玲      北京大学深圳医院 病理科， 广东 深圳

马雅　　    北京大学深圳医院 病理科， 广东 深圳

The Application of GCDFP15 in Detecting the Residual

Apocrine of Axillary Bromhidrosis in Microinvasive Surgery

YU Guangyin, LI Tianshi, CAI Guangling, MA Ya, CHEN Yaoli

(Department of Pathology, Shenzhen Hospital of Peking University, Shenzhen 518036, Guangdong, China)

[Abstract] Objective: To find out whether the operation is complete or excessive curetting exists in microinvasive surgery by observing the expression of GCDFP15 in the residual apocrine of axillary bromhidrosis. Methods: The apocrine sweat glaud(ASG) samples sucked out of axillary in 284 (bilateral) bromhidrosis microinvasive cases were collected and 0.2 cm×0.2 cm skin tissues were randomly taken from both sides after operation. GCDFP15 expression was detected with immunohistochemical staining method, and the postoperative residual ASG status was analyzed. Results: All of the extracted substance contained a large number of ASG.All of them expressed GCDFP15, and the expression rate was 100%. Eccrine sweat glands did not express GCDFP15; Extracted ASG duct could be seen in skin tissue of 143 cases by using HE staining method，and 128 cases of them expressed GCDFP15 (P>0.05); Uncertain residual ASG could be seen in skin tissue of 29 cases by HE staining，and 3 of them were proved GCDFP15 positive expression ( P<0.01). Conclusions: GCDFP15 has specific expression in axillary bromhidrosis ASG residual of microinvasive surgery,and it could be used as pathological basis for evaluation of operation results.

[Key words] bromhidrosis; surgical procedures, minimally invassive; gross cysitc disease fluid protein15; treatment outcome

用微创手术吸刮大汗腺是目前治疗腋臭的比较流行方法，如何掌握吸刮程度直接决定手术的效果。有经验的医生凭借自己的经验和手感往往可以达到较好效果，但选用一个简单可行的病理指标评价疗效未见确切报道。孙文涛等[1]曾撰文探讨雄激素受体(AR)和载脂蛋白D(ApoD)在腋臭患者腋区顶泌汗腺细胞中的表达情况及其临床意义，但未能探讨是否可以指示吸刮程度。2009年为了解微创吸刮大汗腺是否彻底，将刮出物及术后双侧腋窝随机提取0.2 cm×0.2 cm皮肤组织送病理检查，并用免疫组织化学方法检测大囊肿病液体蛋白15(gross cystic disease fluid protein15,GCDFP15)在大汗腺残留表达情况。

1 材料和方法

1.1 材料

收集284例(双侧)腋臭微创手术刮出物标本，同时术后双侧腋窝随机提取的0.2 cm×0.2 cm皮肤组织;福州迈新生物技术开发有限公司提供的GCDFP15即用型抗体(编号：MAB0230，克隆号：23A3)、Elivisionplus试剂盒、柠檬酸盐抗原修复缓冲液(粉剂，0.01 mol/L，pH6.0)及DAB试剂盒(DAB0031)由福州迈新公司提供。

1.2 方法

1.2.1 手术 2%利多卡因20 ml加400～500 ml生理盐水，每100 ml麻醉液中加入0.1%肾上腺素0.1 ml。术前将麻醉液注入皮下，范围在腋毛区及其外缘1.0 cm，每侧200～250 ml[2]。

1.2.2 实验方法 对手术刮出的284例标本做一般性(颜色、质地等)描述，称量容积(吸出物通常呈半流质状)，再随机取材做成蜡块，切厚3 μm的切片，常规脱蜡至蒸馏水洗;同时取两张乳腺小叶癌组织切片设为阳性对照和阴性对照。采用如下操作步骤可达满意染色：(1)石蜡切片脱蜡、水化后，用PBS(pH7.4)冲洗3次，每次3 min(×3);(2)微波抗原修复，取一定量柠檬酸盐缓冲液(pH=6.0)微波加热直至沸腾，将脱蜡水化后的组织切片放入已沸腾的缓冲液中，中档继续微波处理17 min，冷却至室温，蒸馏水冲洗两次，PBS(pH 7.2～7.4)冲洗两次，每次3 min(2次) [3，4];按照迈新公司提供的Elivisionplus试剂盒进行操作，DAB显色3 min，阳性显色为棕色;蒸馏水、自来水冲洗，苏木素复染2 min，1%盐酸酒精分化3 s，自来水冲洗15 min返蓝;用由低到高梯度酒精脱水，二甲苯透明，中性树胶封片[5]。

1.3 统计学方法

采用统计学软件SPSS 13.0，卡方检验。

2 结果

GCDFP15显色阳性部位在细胞胞浆。阳性对照片乳腺癌组织显示清晰阳性着色，阴性对照无任何DAB着色，提示操作正确。GCDFP15在大汗腺整个腺体都有表达，定位明确，背景清晰(图1)。284例(双侧)腋臭微创手术刮出物标本平均约30 ml，HE染色见部分腺体破碎，但均表达GCDFP15，证实含有大量大汗腺，表达率100%;小汗腺不表达GCDFP15。通过镜下毫微尺测量提取的皮肤组织，平均厚度0.2 cm，HE染色和GCDFP15表达结果见表1。143例HE染色可见大汗腺导管(图2)，其中128例表达GCDFP15(P>0.05，图3)，GCDFP15标记3例为阳性(P<0.01)，提示这3例可行二次手术。

指标大汗腺(例)导管(例)刮出物HE染色284284刮出物GCDFP15表达284284皮肤组织HE染色29143皮肤组织GCDFP15表达3128

3 讨论

腋窝区有两种汗腺，一是外泌汗腺(小汗腺)，分泌较多无色无味汗液及调节体温，过度分泌则导致多汗症;二是顶泌汗腺(大汗腺)，腋臭主要是由于腋区大汗腺的异常分泌所致。腋窝大汗腺水平分布在腋毛区及其边缘0.5 cm的范围内，垂直分布于真皮深层、真皮脂肪交界以及浅层脂肪区[6]，以上层次无神经存在[7]，麻醉范围及手术范围都根据此范围而定。

传统的腋臭切除手术通过切除腋毛区的皮肤、清除毛囊及汗腺，可获得确切效果，但切口创伤大、张力大，恢复时间长，术后瘢痕明显，影响美观，甚至影响上肢的活动。因传统手术存在诸多不足，现已逐渐被安全、高效的微创手术所代替。微创吸刮术结合肿胀麻醉将腋毛区的真皮下层及皮下浅层作为吸刮重点。肿胀麻醉在产生麻醉作用的同时，减少了药物的吸收及术区的出血[8]，同时增大了腋窝皮肤和皮下组织的距离，使腋窝皮肤绷紧变硬，增加了手术操作空间，降低了吸刮的难度。微创手术保留了真皮的大部分及表皮，不但可减少创伤，还解决了传统手术术后遗留较大创面的缺陷。在手术操作中，一般通过腋毛能否轻易拉脱来判断手术是否做到层次，腋毛拉脱后再行全面吸刮数次，腋窝皮肤呈淡青色或白色，如颜色过深，说明皮肤损伤较大，所以，要注意保护皮下毛细血管网，以免造成皮肤坏死[2]。GCDFP15在顶泌上皮、泪腺、耵聍腺、Moll's腺、下颌腺、气管支气管腺体、舌下腺和小唾液腺的胞浆中均有表达，可用于乳腺癌，唾液导管癌和顶泌上皮的判断。将284例腋臭微创手术刮出物送病理检查，尤其是进行GCDFP15标记后，可以比较清楚了解刮出物的性质，进而了解吸刮的层次。通常在少量脂肪组织中混有大量大汗腺腺体及导管(部分破碎)，间杂一些小汗腺组织。由于深层脂肪组织无大汗腺[7]，如果刮出物中含大量脂肪小叶和疏松结缔组织，则可能吸刮过度。往深层吸刮稍有过度并无明显影响，但往浅层吸刮时，因要考虑保护皮下毛细血管网，不应过度吸刮，反而容易出现吸刮不足，造成大汗腺残留。本组常规HE染色术后提取皮肤组织，可见破碎或不完整的腺体，用GCDFP15标记可以明确其是否为残留大汗腺。临床医生可以根据提取皮肤组织HE染色结果及GCDFP15表达的反馈信息，决定是否行二次手术，并指导手术的吸刮力度，减少大汗腺残留，提高手术成功率。GCDFP15在检测腋臭微创手术大汗腺残余中起到了很好的指示作用，可帮助临床轻松判断手术的效果。

【参考文献】

[1]孙文涛，陕声国，张端莲.雄激素受体和载脂蛋白D在腋(臭)区顶泌汗腺中的表达及临床意义[J].武汉大学学报：医学版,2008,(2):253-259

[2]李天石，胡华新，龙云，等.微创吸刮术结合肿胀麻醉治疗腋臭700例[J].中国美容整形外科杂志，2009(10)：636-638.

[3]倪灿荣，马大烈，戴益民.免疫组织化学实验技术及应用[M].北京：化学工业出版社，2006：23-28.

[4]周小鸽，王鹏，陆鸣，等.加热抗原修复对内源性抗生物素蛋白结合物的影响及其对策[J].中华病理学杂志，2002(6)：491

[5]王伯沄，李玉松，黄高昇，等.病理学技术[M].北京：人民卫生出版社,2000：369-371

[6]胡启翔，王惠英，张建，等.腋臭大汗腺分布范围的病理组织学观察分析[J].中国美容医学,2009(4)：555-557.

[7]Lindsay S L,Holmes S, Corbett A D,et al.Innervation and receplor profiles of the human aprocrine(epitrichial)sweat gland：routes for intervention in bromhidrosis[J]. Br J Dermato, 2008(3):653-660.

[8]周其光，何斌.局部肿胀麻醉技术在美容外科手术中的应用[J].中国美容医学，2007(11):1586-1587.