脾虚湿盛型异位性皮炎和支气管哮喘患者的细胞因子IFN-γ和IL-4的mRNA的表达

　　作者：张玉环 陈保疆 焦振山 　作者单位:300021天津市长征医院

　　【摘要】 目的 探讨脾虚湿盛型异位性皮炎(AD)和支气管哮喘(AS)患者外周血细胞因子IFN-γ和IL-4的mRNA表达的临床意义。 方法 对102例(AD61例，AS41例)患者的外周血5ml应用反转录系统试剂盒及核酸测定仪进行吸光度测定。 结果 两组患者IFN-γmRNA阳性表达显著低于对照组(P<0.01)，但IL-4mRNA与正常对照组比较差异无显著性(P>0.05)。AD和AS IFN-γmRNA阳性表达率，IL-4mRNA阳性表达率比较两组之间差异无显著性(P>0.05)。 结论 异病同证指几种不同疾病，在疾病过程中出现了大致相同的病理，大致相同的证，脾虚湿盛型的AD与AS均显示免疫失衡状态。

　　关键词 异位性皮炎 支气管哮喘 干扰素γ 白细胞介素4

　　mRNA expression of IFN-γand IL-4in patients withatopic dermatitis and asthma

　　Zhang Yuhuan，Chen Baojiang，Jiao Zhenshan Tianjin Changzheng Hospital，Tianjin300021

　　【Abstract】 Objective To investigate the significance of the mRNA expression of IFN-γand IL-4in the atopic dermatitis(AD)and asthma(AS)patients who were diagnosed deffciency of spleen with overabundance of damp ac-cording to the traditional Chinese medicine theory.Methods The peripheral blood was collected in102cases(AD61cases，AS41cases)，analyzed the mRNA expression of these cytokine using RT-PCR system kit.Results Compared with the control group，the mRNA expression of IFN-γin AD and AS patients were both significantly decreased(P<0.01)，and IL-4had no statistical significance(P>0.05).However，the expression of IL-4and IFN-γhad no sig-nificant difference between AD and AS(P>0.05).Conclusion There are both immune imbalance in AD and AS，the abnormal mRNA expression of IL-4and IFN-γare part of immune profile in AD and AS patients who were diagnosed deficiency of spleen with overabundance of damp.

　　Key words atopic dermatitis asthma IFN-γ IL-4

　　异位性皮炎(atopic dermatitis，AD)和支气管哮喘(asthma，AS)均属于Ⅰ型变态反应性疾病，脾虚湿盛是两种疾病临床常见的中医证型，临床表现的“证候”大多相同，中医病机一致。本文对102例(AD61例，AS41例)患者的外周血细胞因子IFN-γ和IL-4的mRNA表达进行检测，探讨中医脾虚湿盛型AD与AS mRNA在细胞因子表达的临床意义。

　　1 资料与方法

　　1.1 临床资料 102例患者来自2002年1月～2004年2月天津市长征医院变态反应科门诊，AD患者61例，其中男35例，女26例，年龄4～24岁，平均(13.6±9.8)岁，病程(1.5～11.5)年，平均(5.4±3.7)年;AS患者41例，其中男24例，女17例，年龄12～38岁，平均(16.4±8.3)岁，病程1～10.5年，平均(6.5±3.6)年。对照组20例，为志愿献血者，其中男12例，女8例，年龄18～23岁，平均(20.7±4.3)岁。

　　1.2 诊断标准 AD诊断标准参照1994年美国Williams等提出的AD诊断标准 [1] 。AS诊断标准参照中华医学会呼吸病学分会1997年《支气管哮喘防治指南》 [2] 。脾虚湿盛证参照中医诊断学标准 [3] 。

　　1.3 主要仪器与试剂

　　1.3.1 主要仪器 PCR仪(PTC-200型MJ Re-search公司，美国);超净工作台(苏净公司，苏州);台式高速离心机(Eppendorf公司，德国);核酸自动测定仪(Eppendorf公司，德国);电泳仪(北京六一仪器厂);凝胶自动成像系统(UVP，美国)。

　　1.3.2 主要试剂 反转录系统试剂盒(美国PROMEGA公司);DEPC液(Sigma公司);氯仿，异丙醇(天津化学试剂厂);引物序列来源于文献 [3] 。

　　1.4 实验方法 单个核细胞总RNA提取:取患者和正常对照组空腹静脉血5ml，肝素抗凝，在5ml淋巴细胞分离液面上加入等量处理后的血液样本，离心，分离单个核细胞。采用核酸测定仪在260nm和280nm波长下对样品进行吸光度测定，以确定RNA提取的质量，OD260/280在1.8～2.0视为提取的RNA纯度较高。

　　2 结果

　　2.1 外周血单个核细胞总RNA提取结果 琼脂糖凝胶电泳后可以清楚地看到所提取的总RNA的28S和18S两条清晰的rRNA条带，这说明提取的总RNA完整，无明显降解，见图1。

　　图1 提取RNA电泳图

　　2.2 RT-PCR结果 用图像分析仪对胶片上每一泳带进行光密度扫描，结果用各细胞因子检出阳性率表示。见图2，图3。

　　图2 IL-4mRNA RT-PCR产物电泳图电泳从左到右依次为DNA-Marker、β-actin和IL-4

　　图3 IFN-γmRNA表达电泳图电泳从左到右依次是DNA-Marker、β-actin和IFN-γ

　　2.3 3组人群IFN-γ和IL-4mRNA RT-PCR产物检出情况 见表1。

　　表1 3组人群IFN-γ和IL-4mRNA RT-PCR产物检出情况 例(略)注:3组人群IFN-γ和IL-4mRNA阳性表达率间比较，* P<0.01 两组患者IFN-γmRNA阳性表达率均显著低于对照组(P<0.01)，3组IL-4mRNA阳性表达率间比较差异无显著性(P>0.05)。AD组与AS组IFN-γmRNA阳性表达率之间比较差异无显著性(P>0.05);并且AD组与AS组IL-4mRNA阳性表达率比较差异无显著性(P>0.05)，结果提示AD、AS患者IL-4mRNA表达水平低于正常人。

　　2.4 统计学方法 数据经SPSS10.0统计软件处理，各组间进行率的χ 2 检验。

　　3 讨论

　　异病同证是指几种不同的疾病，在疾病过程出现了大致相同的病机，大致相同的证，疾病在其自身发展过程中出现了病因同源，病机吻合，它以一组相关的症状和体征，不同程度地揭示病因、病机、病位、病性、病势。AD与AS同属Ⅰ型变态反应性疾病，免疫功能的失衡是AD和AS发生的主要原因，均属TH 2 优势疾病，两病均存在着T细胞亚群，体液免疫血清总IgE值升高，CD4 + T细胞分泌的IL-4和IFN-γ的表现异常。本文对脾虚湿盛证的102例AD和AS患者进行了IFN-γ和IL-4mRNA表达的检测，检测结果显示:61例AD患者外周血单一核细胞IFN-γ17例(27.9%)，IL-437例(60.6%);41例AS患者外周血单一核细胞IFN-γ11例(26.8%)，IL-424例(58.5%);而20例对照组IFN-γ18例(90.0%)，IL-410例(50.0%)，AD和AS的IFN-γ均低于正常对照组(P<0.05)，差异有显著性;而IL-4AD与AS组均高于正常对照组，但差异无显著性(P均>0.05)。本文AD和AS两组患者外周血IFN-γCD4 + 细胞比率均低于正常组，而外周血IL-4CD4 + 细胞比率明显高于正常组。IFN-γ是一种由TH 1 产生的重要的CD4 + /CD8 + 平衡调节因子，可抑制IL-4和IL-4介导的IgE生成。TH 1 细胞和TH 2 细胞在体内通过分泌不同的细胞因子促进自身的发展，抑制对方的发展。TH 1 细胞分泌IFN-γ可抑制TH 2的增殖 [4] ，促进自身的增殖，TH 2 细胞分泌IL-4，称为TH 2 型细胞因子，介导体液免疫，如激活β细胞和嗜酸粒细胞 [5] 。这些细胞因子积极参与各种生理及病理过程，在正常情况下TH 1 /TH 2 网络维护着动态平衡。目前判断TH 1 /TH 2 细胞水平主要是通过分别测定IFN-γ和IL-4来间接反映其体内水平和功能。本文对102例AD与AS分别测定后发现，IFN-γ低于正常对照组，经比较差异有显著性(P<0.05)，而IL-4高于正常对照组，经比较差异无显著性(P>0.05)。本文研究进一步证明了脾虚湿盛型的AD和AS细胞因子表达的一致性，从分子生物学基础进一步证实两病异病同证的理论依据。

　　参考文献

　　1 顾恒，陈祥生，陈.特应性皮炎诊断标准的评价中.华皮肤科杂志，2000，33(4):222-226.

　　2 第二届全国支气管哮喘学术会议纪要.中华结核和呼吸杂志，1997，20(5):265.

　　3 朱文锋.中医诊断学.北京:中国中医药出版社，1997，167.

　　4 GajewSkit，Fitch F.Anti Protiferative effect of IFN-C in immune regula-tion，IFN-gama inhibits the proliferation of TH

　　but anti TH1 murine helper T lymphocyte clones.J Immunol，1998，140:4245-4252.

　　5 Coffman RL，Carty J A.T-cell activity that enhances polyclonal IgE pro-duction and its inhibition by interferon gama.J Immunol，1986，136:949.