促愈瘢痕消皮肤局部用药对动物毒性作用的实验研究

促愈瘢痕消皮肤局部用药对动物毒性作用的实验研究作者：闫宏山 崔光怀 刘振中 赵建平 杨加峰 蔡景龙    作者单位：1 滨州医学院附属医院烧伤美容整形外科 滨州市 256603；2 山东大学第二医院美容整形烧伤外科   【摘要】  目的 探讨促愈瘢痕消（70%）促愈瘢痕消对动物皮肤的毒理作用。 方法 40只新西兰大白兔，随机分为3组。①组12只兔子随机分为A、B、C 3组，每组4只，分别为赋形剂组、促愈瘢痕消临床用药剂量组（44％）、促愈瘢痕消大剂量组（70％）。进行双侧背部脱毛，左侧刀片搔刮至均匀出血，右侧用药7 d观察药物经完整皮肤的急性毒性作用；左侧用药7 d观察药物经损伤皮肤急性毒性作用。②组4只兔子每只背部对称脱毛各2块，药物分组同上，左侧均涂赋形剂，右侧头侧脱毛区涂促愈瘢痕消（44%），右侧尾侧区涂促愈瘢痕消（70%）。观察用药7 d后对完整与损伤皮肤刺激性。③组24只兔子随机分为A、B、C 3组，每组8只，分别为赋形剂组、促愈瘢痕消（44％）组、阳性对照组（1％2，4-二硝基氯代苯）组，进行左侧背部脱毛，各组外用药物进行初次接触及激发试验，观察药物对动物皮肤的过敏反应。结果 促愈瘢痕消经皮肤对动物完整皮肤及损伤皮肤无急性毒性、刺激性；药物对完整皮肤亦无激发过敏反应。 结论 促愈瘢痕消短期应用对动物皮肤是安全的。   【关键词】  促愈瘢痕消；经皮肤急性毒性；皮肤刺激性；皮肤过敏反应Animal skin toxic effect experimental study of Cuyubanhenxiao after skin topical administration    YAN Hongshan1  CUI Guanghuai1  LIU Zhenzhong2  et al    1 Department of Plastic Surgery,Affiliated Hospital of Binzhou Medical University,Binzhou 256603;    2 Department of Plastic Surgery,Second Hospital of Shandong University   【Abstract】  Objective  To study the acute toxicity, irritation and sensitivity effect of Cuyubanhenxiao to New Zealand big white rabbit's nomal skin and impaired skin.Methods  Fourty  New Zealand big white rabbits were dividesed into 3 groups.①12 rabbits were randomized into 3 groups, each group is 4 rabbits. The medicine is Vaseline,Cuyubanhenxiao(44％),Cuyubanhenxiao(70％).They were separately applied to A,B,C 3 groups. Each rabbit with 50 cm2 was molted on both sides of backbone to take the acute skin toxicity test. The right sides every group were used medicine(A,B,C) at 7 days, the nomal skin acute toxic effect was observed. The left sides were scratched to even hemorrhage and spreaded medicine on every group rabbit. At 7 days, the damaged skin toxic effect was observed.②4 rabbits were molted on both sides of backbone of every rabbit and there were 2 molted areas on each side of every rabbit.The medicine group was completely same with the first group.The left side of every molted area was spreaded by Vaseline. The right molted areas of near to the head were spreaded by B and the oher areas were spreaded by C 7 days later, the nomal and damaged skin irritation effect was observed.③24 rabbits were randomized into A, B,and C 3 groups, the number of each group was 8. The medicine was Vaseline, Cuyubanhenxiao(44％), 1％2，4Dinitrochlorobenzol. Each rabbit with 50 cm2 was molted on the left sides of backbone to take the the initial contact and the stimulation test. The sensitivity effect of medicine was observed.Results  There were no  acute toxicity, irritation effect, when Cuyubanhenxiao was spreaded on the rabbits' normal and damaged skin and no sensitivity effect phenomenon to  rabbits' nomal skin.Conclusion  It's safe to appl  to the skin of animals  for shortterm.   【Key words】  Cuyubanhenxiao,acute skin toxicity,skin irritation,skin sensitivity effect    创伤、烧伤、外科手术等常引起不可避免的创面，然而创面的晚期愈合常常导致瘢痕的增生。创面的晚期愈合增加了感染机会，瘢痕增生给患者美观甚至功能造成严重影响。目前，国内外用于促进创面愈合及治疗瘢痕的药物种类繁多， 但经临床使用后，疗效好者甚少。本课题组研制的中药制剂促愈瘢痕消，经动物实验证明能促进创面愈合、预防瘢痕增生且无明显的毒性反应。本文仅就其动物毒理实验进行论述。1  材料与方法    1.1  试剂  实验用促愈瘢痕消由山东大学第二医院美容整形烧伤外科研制。此中药制剂主要成分由土元、水蛭、莪术、蜈蚣、全蝎和五倍子（均由山东大学齐鲁医院中药房提供），采用超细微粉化新工艺精制而成。实验药物分临床用药剂量（药物浓度为44%）及大剂量（药物浓度为70%）。    对照用赋形剂为凡士林软膏（山东大学第二医院药剂室提供）、硫化钠、2，4二硝基氯代苯（济南泰瑞达药化有限公司提供）。    1.2  动物  实验动物为新西兰大白兔，雌雄不限，体质量2.5～3.0 kg，由山东省农科院提供（合格证号：scxk齿20040013）。    1.3  实验方法    1.3.1  促愈瘢痕消经皮肤急性毒性试验:将12只新西兰大白兔随机分为3组，每组4只，A组：赋形剂组；B组：促愈瘢痕消临床用药剂量组（44％）；C组：促愈瘢痕消大剂量组（70％），用8％的硫化钠给白兔右侧背部脱毛50 cm2，用清水洗掉化学试剂，立即给脱毛区涂药，每日涂药使药膏保持浓度1周，期间观察动物的活动、皮毛光泽、饮食、体重、死亡情况。随后对白兔左侧脱毛50 cm2，并用手术无菌刀片在脱毛区进行搔刮至均匀出血，立即在擦伤部位涂药，用药7 d，观察指标同上，并与对照组比较。    1.3.2  促愈瘢痕消的皮肤刺激性试验：将4只新西兰大白兔背部对称脱毛4块，每块50 cm2。A：赋形剂，B：促愈瘢痕消（临床用药剂量组44％），C：促愈瘢痕消大剂量（70％）。脱毛后清水清洗脱毛区，左侧均涂赋形剂（A），右侧头侧脱毛区涂B，右侧尾侧区涂C。涂药后24 h温水清洗药物及赋形剂，观察局部皮肤红斑和水肿反应。连续用药7 d后，清洗掉药物观察24 h、72 h后的皮肤反应。随后脱毛区用手术无菌刀片搔刮至均匀出血，立即涂药物及赋形剂，观察指标同上。    1.3.3  促愈瘢痕消的皮肤过敏试验：将24只新西兰大白兔对称脱毛，每块50 cm2。随机分为三组，每组8只。A组：赋形剂，B组：促愈瘢痕消（44％），C组：阳性对照组（1％2，4二硝基氯代苯）。将药物分别涂于各组动物左侧脱毛区，持续6 h，在第7 d和第14 d以同样方法各重复一次。激发接触：B组于末次给受试物致敏后14 d，将促愈瘢痕消涂在动物右侧脱毛区，持续6 h后，用温水去除受试物。C组同样方法外用0.1％2，4二硝基氯代苯立即观察，并在24 h、48 h及72  h再次观察白兔脱毛区皮肤变态反应情况。2  结果    2.1  ①组试验结果：3组在试验期间无1例死亡，“促愈瘢痕消”临床用药剂量和大剂量组对完整皮肤及损伤皮肤新西兰白兔活动、皮毛光泽、饮食、体重（见表1）无任何影响，未出现任何急性毒性反应。 表1  促愈瘢痕消外用于完整和损伤皮肤时对新西兰大白兔体重的影响    2.2  ②组试验结果：3组兔子无1例死亡，促愈瘢痕消临床用药剂量和大剂量组外涂于完整皮肤及损伤皮肤新西兰白兔，未见红斑与水肿。停药后1周观察，未见色素沉着、出血点、皮肤粗糙及皮肤菲薄等情况（见表2）。通过试验表明促愈瘢痕消对皮肤无刺激性。表2  促愈瘢痕消对动物完整及损伤皮肤刺激性作用观察药物完整皮肤（用药7 d后） 注：评分标准均按《中药新药研究指南》［１］统计，结果示皮肤刺激性强度平均分值均为0    2.3  ③组试验过程中，没有实验动物死亡。在初次致敏接触中，A、B组未见红斑及水肿，C组有明显红斑及水肿，随时间红肿与水肿减轻（见表3）。再次过敏激发试验中，A、B组未见红斑及水肿，实验动物无哮喘、站立不稳及休克现象。C组动物动物红斑及水肿比初次接触加剧并伴部分皮肤破溃。通过试验表明，促愈瘢痕消对皮肤无致敏及过敏反应。表3  促愈瘢痕消与阳性对照组对动物皮肤的过敏激发试验观察时间3  讨论    促愈瘢痕消是在《赵炳南临床经验集》所介绍的治疗瘢痕验方——黑布药膏组成的基础上，从常用的200多种中药前12位微量元素锌含量高的中药中挑选出6种理血熄风，采用全微粉化技术精制而成。其方剂组成为土元、水蛭、莪术、蜈蚣、全蝎、五倍子、醋、冰片、蜂蜜及皮肤助渗剂丙二醇，用粉碎机将中药原料达到细胞级微粉化粉碎（10～20 μm），加入辅剂调合成膏剂，外用于皮肤。利用其锌含量高的特点，以促进创面的愈合；课题组相关研究亦已证明，促愈瘢痕消能够促进细胞的凋亡，明显抑制瘢痕的增生［2］。    处方中各种中药均符合《中国药典》标准，无毒性、刺激性材料，药物虽然外加皮肤助渗剂属化学试剂，但未见其对皮肤有毒性作用的报道［3,4］。然而，不能确定药物在制备过程中是否会产生毒性和致敏物质。所以药物在应用于临床前，按照国家食品药品监督管理局的规定，必须进行皮肤毒性试验研究。    通过毒理实验研究发现，促愈瘢痕消对实验动物完整皮肤及损伤皮肤无急性毒性及刺激性。实验期间无动物死亡，动物活动、饮食及其他身体状况未见异常。在药物过敏接触及激发接触实验中，动物皮肤无水肿及红斑，亦未出现哮喘、站立不稳及休克现象。通过一系列的皮肤毒性试验研究，可以初步证明促愈瘢痕消短期应用于动物皮肤是安全的，可以进行初步的临床试验。【参考文献】［1］ 中华人民共和国卫生部药政管理局.中药新药研究指南（药学、药理学、毒理学）［Ｍ］.1992：209212.［2］ 闫宏山，吕润华，王吉昌，等.“促愈瘢痕消”对兔耳增生性瘢痕作用的实验研究［Ｊ］.山东大学学报（医学版），2007，45（9）：914918.［3］ 李海鹰，杨文智，米海涛,等.不同渗透剂对水杨酸透皮吸收的影响［Ｊ］.河北大学学报（自然科学版），2007，27（3）：279282.［4］ 黄齐慧，成明建.改善美洛昔康体外经皮渗透的研究 ［Ｊ］.黑龙江医药，2007，20（6）：584585.