湿疹乳膏皮肤毒性实验研究

湿疹乳膏皮肤毒性实验研究作者：刘光斌，张玉叶，姜芳宁，宋京都，滕宝霞，刘玉玲 　［摘  要］ 目的:对湿疹乳膏进行了部分动物实验研究，包括皮肤急性毒性试验、皮肤刺激性试验及皮肤过敏性试验，以了解其安全性。方法：将不同剂量的湿疹乳膏用于大耳白兔背部完整或破损去毛区皮肤，观察其产生急性毒性和皮肤刺激性情况；采用致敏与激发接触湿疹乳膏,观察豚鼠过敏情况。结果：湿疹乳膏未产生急性毒性和皮肤刺激性；反复致敏后使用，也无皮肤与全身过敏反应。结论：湿疹乳膏是安全的新型外用药。　［关键词］ 湿疹乳膏；动物实验；皮肤急性毒性；皮肤刺激性；皮肤过敏反应　　Study on the Skin Toxicity of Eczema Creams　LIU Guangbin,ZHANG Yuye,JIANG Fangning,et al(1.Jiugang Hospital,Jiayuguan,Gansu 735100,China;2.Gansu Provincal Institute for Drug Control,Lanzhou Gansu 730000,China)　　Abstract:Objective The partial animal experiments on Eczema Creams have been done,including tests of acute cutaneous toxicity,skin irritation and skin allergy reaction for understanding safety.Methods Eczema Creams was spread on the integral and damaged skins that hairs were cut off in the back of rabbit.It was observed whether Eczema Creams could induce acute toxicity and skin irritation.The allergy reactions of guinea pigs were watched by sensitizing and challenge contact to Eczema Creams.Results The results indicate that Eczema Creams does not induce acute toxicity and skin irritation,and not cause skin and whole body allergy reaction by manytimes sensitization.Conclusion Eczema Creams was a newly creams which could be used safely and handily.　　Key words:Eczema Creams;Animal experiment;Acute cutaneous toxicity;Skin irritation;Skin allergy reaction    湿疹乳膏是酒钢医院根据临床需要而研制出的用于治疗皮炎湿疹的制剂，主要成分为普鲁卡因、乳酸依沙吖啶、氯霉素等。从2000年研制并应用于临床，取得了满意效果。为考察其安全性，笔者参照新药审批办法中有关毒理学实验技术要求［1］及有关文献［2，3］，进行了该药的皮肤急性毒性试验、皮肤刺激性试验、皮肤过敏试验研究。现报告如下。1  实验材料　　1.1  实验动物  　　日本大耳白兔，体重2.0 kg~3.0 kg，雄雌兼用；豚鼠，雄雌各半，体重250 g~300 g。以上动物均由兰州生物制品研究所提供，实验动物合格证：甘肃实验动物管委会001号。　　1.2  药物  　　湿疹乳膏：批号031020，由酒钢医院药学部制剂室研制；空白对照品：湿疹乳膏赋形剂；阳性致敏物：2、4二硝基氯苯(中国医药公司北京分公司提供，用70％乙醇将其配成1%的致敏浓度和0.1%激发浓度)。　　1.3  动物实验室合格证  　　甘肃省实验动物管委会，普005号。2  实验方法与结果　　2.1  湿疹乳膏的皮肤急性毒性实验　　2.1.1  实验方法  　　挑选健康日本大耳白兔12只，雄雌兼用，于给药前24 h将背部脊柱两侧用剪刀剪去兔毛，面积约30 cm2~50 cm2，分为3组，每组4只，为空白对照组、湿疹乳膏完整皮肤组、湿疹乳膏破损皮肤组。破损皮肤的制作采用16号针头，在脱毛且消毒的皮肤上划“#”字，以皮肤渗血为度。分别将赋型剂2 g/只涂在脊柱脱毛区域，为空白对照组；将湿疹乳膏2 g/只涂在脊柱脱毛区完整皮肤，为湿疹乳膏完整皮肤组；将湿疹乳膏2 g/只涂在脊柱脱毛区破损皮肤，为湿疹乳膏破损皮肤组。24 h后用温水去除受试物，观察，然后涂抹相同受试物，连续7 d。　　观察大耳白兔全身表现和中毒死亡情况，包括动物的体重、脱毛区皮肤红肿程度、毛发、眼睛和黏膜的变化，呼吸、循环、中枢神经系统、四肢活动等的变化。若遇动物死亡，应及时尸检和进行肉眼观察，必要时进行病理组织学检查。　　2.1.2  实验结果  　　空白对照组与湿疹乳膏组大耳白兔全部存活，涂药组大耳白兔采食、体重、脱毛区皮肤、眼睛结膜和口腔黏膜，呼吸、循环、中枢神经系统、四肢活动均未见明显异常。因此，湿疹乳膏对大耳白兔皮肤急性毒性很小，提示其临床用药安全。　　2.2  湿疹乳膏的皮肤刺激性试验　　2.2.1  方法  　　挑选健康日本大耳白兔20只，雄雌兼用，于给药前24 h将背部脊柱两侧用剪刀剪去兔毛约7 cm×7 cm，分为4组，即完整皮肤对照组、完整皮肤给药组、破损皮肤对照组、破损皮肤给药组。破损皮肤的制作采用16号针头，在脱毛且消毒的皮肤上划“#”字，以皮肤渗血为度。分别将赋型剂1 g/只涂在脊柱脱毛区域，为空白对照组；将湿疹乳膏1 g/只涂在脊柱脱毛区完整皮肤，为湿疹乳膏完整皮肤组；将湿疹乳膏1 g/只涂在脊柱脱毛区破损皮肤；为湿疹乳膏破损皮肤组。24 h后用温水去除受试物，观察，然后涂抹相同受试物，连续3 d。并于末次涂药后1 h、24 h、48 h、72 h观察大耳白兔脱毛区皮肤的刺激程度。试验结果按文献［1］皮肤刺激反应评分标准评分，计算平均分值进行刺激强度评价。　　2.2.2  实验结果  　　反应平均值的计算方法为红斑形成总分与水肿形成总分之和除以同组实验动物总数。湿疹乳膏对大耳白兔皮肤刺激反应的实验结果见表1。可见，湿疹乳膏完整皮肤组，破损皮肤组对皮肤刺激的总平均分值小于0.5分，属于无刺激性。表1  湿疹乳膏皮肤刺激试验（略）　　2.3.1  方法 　　取健康豚鼠30只，雌雄各半，随机分为3组，每组10只，试验前24 h两侧用剪刀剪去豚鼠毛3 cm×3 cm，分别为给药组(湿疹乳膏0.2 g/只)；空白对照组(0.2 g赋型剂/只)；阳性物对照组(1%2、4二硝基氯苯0.2 ml/只)。　　致敏接触：将受试药物0.2 g涂在动物左侧脱毛区，用胶带固定，持续6 h。第7天、第14天左侧脱毛区以同样方法重复1次。空白对照组与阳性物对照组方法同上。　　激发接触：于末次给药后第14天，将受试物0.2 g涂在动物右侧脱毛区，用胶带固定，持续6 h后，用温水去除受试物，立即观察，并在24 h、48 h及72 h，再次观察豚鼠脱毛区皮肤过敏反应情况［2］。空白对照组与阳性物对照组方法均同受试药物组。　　2.3.2  实验结果  　　试验结果按文献［1］皮肤过敏反应评分标准评分，计算平均分值。反应平均值的计算方法为红斑形成总分与水肿形成总分之和除以同组实验动物总数。湿疹乳膏对豚鼠皮肤过敏反应的实验结果见表2。可见，按皮肤过敏反应评分标准和致敏率分类来判断，阳性物致敏所用浓度的2、4二硝基氯苯使动物脱毛区的皮肤呈现中度红斑和重度水肿，属于高度过敏，空白对照组与受试药物组的豚鼠脱毛区皮肤6 h~72 h未见红斑、水肿。表明湿疹乳膏对豚鼠机体免疫系统影响很小。表2  湿疹乳膏对豚鼠皮肤过敏试验（略）3  讨论　　湿疹乳膏具有收敛、消炎作用，用于治疗皮炎湿疹等疗效显著，经皮肤急性毒性、皮肤过敏试验、皮肤刺激性试验。观察动物破损皮肤短期内接触受试药物所产生的毒性反应；动物皮肤重复接触受试药物后所产生的过敏反应；动物完整皮肤及破损皮肤接触受试药物所产生的刺激反应等证实，其无皮肤急性毒性、无皮肤过敏反应，对破损皮肤无不良刺激，说明湿疹乳膏用于治疗皮炎湿疹等是较安全的。参考文献：　［1］中华人民共和国卫生部药政管理局.新药(西药)临床前研究指导原则汇编［M］.北京：人民卫生出版社，1994：204208.　［2］孙敬方.动物实验方法学［M］.北京：人民卫生出版社，2002，191：374375.　［3］王北婴，李仪奎.中药新药研制开发技术与方法［M］.上海：上海科学技术出版社，2001：811813.