细胞间黏附分子1基因K469E多态性与冠心病的关系

　　作者：李英杰,韩梅,郑斌,刘彬　　作者单位：河北医科大学，河北 石家庄 050017

　　【摘要】目的探讨中国河北地区人群中细胞间黏附分子1(ICAM1)基因第六外显子K469E多态性与冠心病(CHD)的关系。方法 CHD患者93例，同时选取心电图检查无异常或冠状动脉造影正常的101例健康体检者为对照组。所有CHD患者均经冠状动脉造影证实。采用聚合酶链反应序列特异性引物(PCRSSP)方法分析CHD患者和对照组的ICAM1基因型是否有差别。结果 两组基因型频率均符合HardyWeinberg遗传平衡。CHD组与对照组ICAM1基因K469E编码处等位基因频率及基因型频率的差异均无统计学意义。结论 中国河北地区人群中细胞间黏附分子1(ICAM1)基因K469E多态性与冠心病无相关。

　　【关键词】 冠心病;细胞间黏附分子;基因多态性;基因型

　　近年来炎症在冠状动脉粥样硬化性心脏病(CHD)发病早期就有炎症细胞黏附内皮细胞并穿过内皮进入血管壁。细胞间黏附分子1(ICAM1)在介导白细胞与血管内皮细胞的黏附、进入血管壁的过程中起着关键的作用。现已发现ICAM1基因上有多个多态位点，其中第六外显子上的469编码处碱基G突变为A，引起谷氨酸到赖氨酸的改变。关于ICAM1基因这一多态位点与CHD的关系，国内外研究较为普遍。本研究的主要目的是检测中国河北地区人群中ICAM1基因K469E多态性是否与CHD的危险性相关。

　　1 对象与方法

　　1.1 对象

　　来自河北地区无血缘关系人群。CHD组93例，男72例，女21例，年龄38～72岁，平均(58.6±9.8)岁，均符合WHO诊断标准，同时行冠状动脉造影术，证实冠状动脉病变的存在。非冠心病患者为对照组101例，男51例，女50例，年龄26～60岁，平均(42.8±14.8)岁，均为健康体检者。

　　1.2 方法

　　1.2.1 标本收集

　　CHD患者在冠状动脉造影前空腹采血，对照组清晨空腹采静脉血，抗凝，-70℃保存，待提取人基因组DNA。

　　1.2.2 模板DNA的制备

　　依照Genomic DNA Rapid Isolation Kit for blood(北京博大泰克生物公司)试剂盒操作步骤进行。

　　1.2.3 序列特异引物PCR(PCRSSP法)及产物分析

　　①引物设计与合成：ICAM1基因K469E的多态性位点设计在引物序列的最后一个碱基上，两对引物中，上游引物序列完全相同，两个下游引物只有最后一个碱基的差别。上游引物序列为：5′GTGGTCTGTTCCCTGGACG3′，下游引物1的序列为：5′GCACATTCACGGTCACCTC 3′(469E);下游引物2的序列为：5′GCACATTCACGGTCACCTT3′(469K)。引物均由上海生工生物工程公司合成。按说明进行PCR反应。然后1%琼脂糖凝胶电泳分离PCR产物。紫外灯下观察照相。用DNA Marker作对照，可观察到长度为927 bp的扩增片段。

　　1.3 统计学处理

　　采用SPSS13.0统计软件包进行。运用HardyWeinberg遗传平衡定律检验样本的群体代表性，两组率的比较行χ2检验。

　　2 结 果

　　2.1 电泳结果分析

　　由于引物序列的特异性，所用的两对引物中，上游引物序列完全相同，两个下游引物只有最后一个碱基的差异，且此位置为ICAM1基因K469E多态位点。只在含有下游引物1的反应体系中显示有927 bp扩增片段的标本表明K469E位点为EE基因型，只在含有下游引物2的反应体系中显示有927 bp扩增片段的标本表明K469E位点为KK基因型，而在含有下游引物1、2的反应体系中均显示有927 bp扩增片段的标本，则表明K469E位点为KE基因型。见图1。　M为 DNA Marker，1、2道为阳性对照，3、4为阴性对照，5、6为KK基因型，7、8为EE基因型，9、10为KE基因型。相邻两道模板相同图1 电泳结果分析

　　2.2 HardyWeinberg检验

　　CHD组与对照组经HardyWeinberg检验均为遗传平衡群体(P>0.05)，见表1。

　　2.3 ICAM1基因K469E多态位点基因型和等位基因频率在两组中的分布情况

　　ICAM1基因K469E多态位点在CHD组中的基因型分布频率分别为：KK型47例(50.6%)，KE型39例(41.9%)，EE型7例(7.5%);在正常对照组中基因型的分布频率分别为：KK型52例(51.5%)，KE型36例(35.6%)，EE型13例(12.9%)。对照组与CHD组相比，基因型频率分布差异无统计学意义(P=0.397)。CHD组K、E等位基因频率分布为71.5%和28.5%，对照组分别为69.3%和30.7%，两组间等位基因频率分布，差异无统计学意义(P=0.636)。提示ICAM1基因K469E多态性与CHD无相关性。

　　2.4 ICAM1基因KK基因型与KE+EE基因型在两组人群中的分布情况

　　CHD组KK基因型和KE+EE基因型分布频率分别为：47例(50.5%)和46例(49.5%)，对照组KK基因型和KE+EE基因型分布频率分别为：52例(51.5%)和49例(48.5%)，两组间分布差异无统计学意义(P=0.895)。表1 HardyWeinberg遗传平衡检验

　　3 讨 论

　　人类ICAM1基因定位在19 p13.3～p13.2，包含7个外显子。ICAM1基因上有多个单核苷酸多态位点(SNP)，其中G241R和K469E是目前研究最多的两个位点〔1〕。已报道，ICAM1基因K469E多态性与多种疾病有关，如糖尿病视网膜病变〔2〕、炎性肠病〔3〕、缺血性脑梗死〔4〕、结肠癌〔5〕、冠脉再狭窄〔6〕、白塞氏病(BD)〔7〕、血管性痴呆〔8〕、乳腺癌〔9〕、前列腺癌〔10〕以及Gave′s病〔11〕等。国内外亦有ICAM1基因K469E多态性与CHD的相关性研究〔12～14〕，但研究结果不完全一致。本研究结果显示，ICAM1基因K469E多态性与CHD无相关性，认为其原因如下：①研究对象的种族、地域不同而造成其遗传背景和周围环境的不同。多项研究已表明，ICAM1基因G241R和K469E多态性是普遍存在于欧美白种人群中的遗传学变异，但在中日韩等亚裔人群中则普遍不存在G241R多态性，只有K469E多态性;②可能存在其他基因，如IL6、MTHFR等与ICAM1基因相互作用或连锁不平衡，而影响CHD的发生〔15，16〕;③CHD的发生可能与ICAM1基因上的其他单核苷酸多态位点有关;④研究对象的性别、年龄、高血脂、高血压、糖尿病、吸烟、饮酒等因素可能成为研究的混杂因素，而增加CHD的发病风险。

　　ICAM1基因K469E多态性是否与CHD的发病有明显关联，是否可作为我国人群CHD发生的遗传学标志，还有待更多的大样本病例对照实验和前瞻性实验加以验证。

　　【参考文献】

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