IFNγ基因+874位点单核苷酸多态性与乳腺癌的相关性

　　作者：武广恒,张家颖,陆培信　　作者单位：长春，吉林大学白求恩医学院

　　【摘要】 目的 探讨IFNγ基因+874位点单核苷酸多态性与乳腺癌的相关性。方法 采用PCR技术对94例乳腺癌患者及96例正常女性IFNγ基因+874位点A/T单核苷酸多态性(SNP)进行分析，将PCR产物进行克隆、测序。结果 乳腺癌患者IFNγ基因+874位点TT基因型频率为18.1%，显著高于正常人的8.3%，两者之间比较具有显著性差异(χ2 =3.95，P=0.047);乳腺癌病例组T等位基因频率显著高于对照组(χ2=4.984，P=0.026)。进一步分析显示，乳腺癌病例组中不同年龄段基因型频率和等位基因频率相比，均无显著性差异。结论 IFNγ基因+874位点TT基因型可能与乳腺癌的发生相关，T等位基因可能为乳腺癌发生的遗传危险因素。

　　【关键词】 乳腺癌;干扰素γ;单核苷酸;多态性;基因型

　　Association of Single Nucleotide Polymorphism of Interferongamma Gene +874 Site and Breast Cancer

　　WU Guangheng，ZHANG Jiaying，LU Peixin

　　School of Norman Bethune Medical Sciences of Jilin University，Changchun 130021，China

　　Corresponding Author：ZHANG Jiaying，Email：jiaying@jlu.edu.cnAbstract：Objective To explore the relationship between the single nucleotide polymorphism of interferongamma gene +874 site and breast cancer. Methods Using PCR technique to analyze the single nucleotide polymorphism (SNP)of Interferongamma Gene +874 site A/T of 96 normal women and 94 female breast cancer patients, the PCR products were cloned and sequenced. Results The frequency of interferongamma gene +874 site TT genotype was significantly higher in patients with breast cancer than that in the healthy individuals (18.1% vs 8.3%，P<0.05); T allele frequency was higher in breast cancer group than in normal group. But the TT genotype had no significant correlation with the age in breast cancer patients. Conclusion TT genotype of IFNγ+874 site might have a relationship with generation of breast cancer.

　　Key words：Breast cancer;IFNγ;Single nucleotide;Polymorphism;Genotype

　　干扰素是一类多功能细胞因子，对治疗包括肿瘤在内的许多疾病都具有一定的疗效。研究表明[1]，IFNγ基因有6个多态性位点。IFNγ基因第一内含子+874位点A/T单核苷酸多态性(SNP)可以通过改变转录因子的结合位点，影响其表达[2]。目前，该位点多态性与某类疾病的相关性已见报道，但与乳腺癌发生是否相关国内尚未见报道。作者提取外周血DNA，采用特异性引物进行PCR扩增，探讨IFNγ基因+874位点的单核苷酸多态性分布分析其与乳腺癌的相关性。

　　1 资料与方法

　　1.1 资料

　　实验分为病例组和对照组。病例组：病理诊断乳腺癌并排除其他癌症的患者血样94例，来自吉林省肿瘤医院住院患者;对照组：正常体检女性血样96例。病例组与对照组年龄在30～67岁之间。

　　1.2 方法

　　采用酚仿抽提法提取基因组DNA。根据IFNγ序列(NC000012)，采用primer 5.0设计引物，产物长度527bp。正向引物1：5′cgcgcaacacaaaatcaaatca3′，正向引物2：5′cgcgcaacacaaaatcaaatct3′，反向通用引物：5′gctacatctgaatgacctgc3′。人GAPDH内参对照正向引物：5′tattgggcgcctggtcacca3′，反向引物：5′ccaccttcttgatgtcatca3′，产物长

　　度：746bp，用以鉴定PCR体系。引物由赛百盛公司合成。PCR 反应条件：94℃ 预变性2min、94℃变性50s、56℃退火50s、72℃延伸1min、30个循环后72℃延伸10min。PCR产物经1%的琼脂糖凝胶电泳分离，凝胶成像分析。将AA、TT基因型片段回收、纯化、测序分析;将TT基因型片段连接至pGEMT载体，将重组质粒测序。

　　1.3 统计学方法

　　基因型和等位基因频率在各组中的分布差异采用χ2 检验。

　　2 结果

　　PCR产物电泳后，按照其单核苷酸的多态性(SNP)分为AA、AT和TT等三种不同基因型，见图1，同一样本用正向引物1、2及反向通用引物两次扩增后均出现527bp片段为AT基因型;只出现一次527bp扩增产物为AA或TT基因型。所有样品均可扩增出内参对照的746bp。病例组和对照组均符合HardyWeinberg遗传平衡定律。TT基因型频率在病例组和对照组之间比较差异具有统计学意义(χ2 =3.95，P=0.047，OR=2.429，95%CI：1.013～5.827);病例组T等位基因频率显著高于对照组(χ2=4.984，P=0.026，OR=1.640，95%CI：1.062～2.532)。病例组中不同年龄基因型频率和等位基因频率相比差异均无统计学意义(P>0.05)，见表1。IFNγ基因+874位点AA基因型及TT基因型测序结果见图2、3。表1 乳腺癌病例组与正常对照组之间基因型频率和等位基因频率分布

　　3 讨论

　　IFNγ作为宿主体内重要的细胞因子，具有广泛的抗病毒、抗肿瘤和免疫调节作用，是人体防御体系中重要的组成部分。研究表明[3] IFNγ 基因内含子1 区存在CA 重复序列，其中CA 重复为12 次的个体外周血单个核细胞IFNγ表达量最高。

　　由于+874位点恰好位于转录因子NFkappaB的结合位点，此处出现SNP 直接影响与转录因子的结合能力，从而影响IFNγ的mRNA 转录[4] 。

　　实验结果显示乳腺癌患者中的IFNγ+874位点TT基因型频率显著高于正常人, 提示TT基因型可能为乳腺癌易感基因型, 对于乳腺癌的发生具有一定作用，IFNγ+874位点SNP可能通过影响IFNγ的分泌而参与乳腺癌的发病。乳腺癌病例组T等位基因频率显著高于对照组,可能预示着T等位基因为乳腺癌发生的遗传危险因素。另外，乳腺癌病例组中不同年龄段基因型频率和等位基因频率相比，均无显著性差异，有可能与病例数量不够大，而分解到各年龄段的病例数量较少有关。

　　KamaliSarvestani等[5]在一伊朗妇女人群中发现乳腺癌患者中的IFNγ基因+874位点TT基因型频率显著高于正常人群，这与本实验的结果互相印证，但TT基因型的构成比却远高于本实验中的数据，这可能与种族的差异有关。有学者研究表明[6]，大肠癌患者中的IFNγ+874位点AA基因型频率显著高于正常人。乳腺癌是由遗传、机体免疫和环境等因素共同作用引起的，本研究为乳腺癌的病因学研究提供了新的参考，为临床治疗和预防提供了研究资料。

　　【参考文献】

　　[1] Chevillard C , Henri S , Stefani F , et al . Two new polymer phisms in the human interferon gamma ( IFNgamma) promoter[J]. Eur J Immunogenet, 2002, 29(1): 5356.

　　[2] Henri S, Stefani F, Parzy D, et al . Description of three new polymorphisms in the intronic and 3' UTR regions of the human interferon gamma gene[J]. Genes Immun，2002, 3(1): 124125.

　　[3] 张平安, 吴健民, 李艳. IFNγ基因+ 874 位点单核苷酸多态性与乙型肝炎病毒感染关系的研究[J]. 医学临床研究，2005, 22(9) :11911192.

　　[4] Pravica V, Perrey C, Stevens A, et al . A single nucleotide polyorphism in the first intron of the human IFNγ gene: absolute correlation with a polymorphic CA microsatellite marker of high IFNγ gene[J]. Hum Immunol, 2000, 61(9): 863866.

　　[5] KamaliSarvestani E, Merat A, Talei AR. Polymorphism in the genes of alpha and beta tumor necrosis factors(TNFalpha and TNFbeta) and gamma interferon (IFNγ) among Iranian women with breast cancer[J]. Cancer Lett，2005, 223(1): 113119.

　　[6] 费保莹, 吕火祥, 陈永伟. 大肠癌IFNγ基因+874位点的单核苷酸多态性[J]. 世界华人消化杂志，2006, 14(20): 20222025.