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《肿瘤学》

MAL基因在原发食管癌组织表达及临床意义

发表时间:2012-06-29  浏览次数:607次

  作者:陈皓  作者单位:泰安市中心医院肿瘤外科,山东 泰安 271000

  【摘要】目的 探讨MAL基因表达下调与食管癌病理分期、组织学分级的相关性。方法 采用RT-PCR和半定量RT-PCR方法检测45例食管癌组织和癌旁食管黏膜组织中MAL基因的表达。结果 40例食管癌组织中MAL mRNA表达明显低于相应的癌旁食管黏膜组织(χ2=30.59,P<0.01);Ⅰ~Ⅱ期病人的MAL基因表达水平显著高于Ⅲ期病人(t=5.952,P<0.001),淋巴结转移阳性病人MAL mRNA表达水平显著低于淋巴结转移阴性病人(t=6.743,P<0.001)。结论 MAL mRNA在食管癌组织中的表达与临床分期、组织学分级等临床病理因素有一定相关性,可作为判断食管癌恶性程度、转移潜能及预后的实验室指标。

  【关键词】 食管肿瘤;MAL基因;逆转录聚合酶链反应

  THE EXPRESSION AND CLINICAL SIGNIFICANCE OF MAL GENE IN PRIMARY ESOPHAGUS CANCER CHEN HAO (Department of Oncology, Taian Central Hospital, Taian 271000, China)

  [ABSTRACT] Objective To explore the relevance between MAL gene expression, clinical stage and histologic grade of esophagus cancer. Methods The MAL gene expression in 45 cancer patients was detected with RT-PCR and semi-quantitative RT-PCR technique. Results The mRNA expression of MAL in 40 cancer tissue samples was lower than that in the surrounding esophagus mucous membrane (χ2=30.59,P<0.01). The gene expression in stages Ⅰ and Ⅱ patients was higher than that in stage Ⅲ patients (t=5.952,P<0.001). Those with lymph node metastasis showed lower gene expression than patients without (t=6.743,P<0.001). Conclusion In esophagus cancer, the MAL gene expression was associated with histologic grade and clinical stage, which can be used for determining tumor malignancy and predicting its prognosis.

  [KEY WORDS] Esophageal neoplasms; MAL gene; Reverse transcriptase polymerase chain reaction

  MAL基因是由ALONSO等[1]于1987年分离得到的抑制肿瘤生长的新基因,MAL基因失活及异常与细胞信号转导、肿瘤的发生发展和临床预后等有一定关系。近年来,MAL基因与食管癌的关系已成为研究的热点。本研究利用定性和半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测食管癌组织及其癌旁组织中MAL基因的表达情况,旨在探讨MAL基因在食管癌发生发展过程中的作用,及其与临床病理因素的关系,为食管癌发病机制的研究提供新思路。

  1 材料与方法

  1.1 标本来源

  1.1.1 病例选择 2004年6月~2006年3月,泰安市中心医院住院的食管癌病人45例,男25例,女20例;年龄36~79岁,平均57.5岁。术前均未发现远处转移,未行放、化疗治疗。手术方式均为经左胸行食管癌次全切除胃-食管弓上或弓下吻合术,术中无肉眼可见肿瘤残留。术后病理检查均证实为鳞癌。按UICC食管癌分期标准(1997)进行分期。

  1.1.2 标本取材和保存 食管癌组织及癌旁组织取自食管癌病人手术标本,组织离体后立即无菌取材,从肿瘤生长活跃无坏死的部位取下约1 cm3癌组织及5 cm外癌旁组织,标本30 min内送实验室,新鲜提取总RNA;不能保证30 min内制备样品的,在取材后放-80 ℃冰箱保存备测。

  1.2 检测方法

  采用半定量RT-PCR法检测MAL mRNA的相对表达水平。①总RNA提取:采用Trizol提取总RNA,并进行纯度和浓度测定。②RT反应:于DEPC处理的Eppendorf管中,加入1 μg总RNA、MMLV及随机引物等,快速离心混匀后,37 ℃ 1 h,95 ℃ 10 min灭活MMLV,快速离心使蒸气沉于管底。③PCR反应:于0.5 mL Eppendorf管中加入RT反应产物、PCR反应体系、MAL上游引物(5′-AAGATCCTCTGCTGACCCCT-3′)、MAL下游引物(5′-ACCATGGACCTCTGGAAAGA-3′)、β-actin上游引物(5′-GTGGGGCGCCCCAGGCACCA-3′),以及β-actin下游引物(5′-CTCCTTAATGTCACGCACGATTTC-3′),扩增片段长度为500 bp;95 ℃ 5 min,离心使蒸气沉于管底,加Taq DNA聚合酶,快速离心混匀。循环条件:94 ℃ 1 min,58 ℃1 min,72 ℃ 1 min,循环35次,末次延伸7 min。电泳鉴定,观察目的基因,实验中仅出现一条500 bp β-actin条带为MAL mRNA阴性;同时出现166 bp条带为MAL mRNA阳性。采用数字图像分析仪2200系统观察拍照并进行半定量分析,以MAL/β-actin比值作为MAL mRNA相对表达量,若比值小于25%为表达缺失,若比值小于50%则为低表达,低表达与表达缺失均为异常表达。

  1.3 统计学分析

  应用SPSS 10.0统计软件,对定性RT-PCR结果进行χ2检验及确切概率法;对半定量RT-PCR结果进行t检验。

  2 结 果

  2.1 食管癌组织和癌旁组织中MAL mRNA的定性检查结果比较

  45例食管癌组织中未见MAL表达者28例,弱表达者12例;癌旁组织食管黏膜组织MAL mRNA全部呈阳性表达。食管癌组织中MAL mRNA表达明显低于相应的癌旁食管黏膜组织,差异有显著性(χ2=30.59,P<0.01)。见图1。

  图1 RT-PCR检测食管癌组织MAL mRNA的表达

  ①、②为食管癌组织MAL mRNA表达阳性;③、④为食管癌组织MAL mRNA表达阴性;⑤为X174/HaeⅢ分子质量标志物

  2.2 MAL mRNA的半定量RT-PCR检测

  2.2.1 食管癌组织和癌旁组织中MAL mRNA表达水平比较 本文45例食管癌组织MAL mRNA相对表达水平为0.90±0.11,而癌旁组织中MAL mRNA的表达水平为1.51±0.27,两者比较差异有统计学意义(t=2.329,P<0.05)。

  2.2.2 食管癌组织MAL mRNA表达水平与临床病理分期的关系 MAL mRNA表达水平与食管癌病人性别、年龄无关,但随临床分期的增高,其表达水平明显降低(P<0.001),且淋巴结转移阳性者MAL mRNA表达水平显著低于淋巴结转移阴性者(P<0.001)。见表1。表1 食管癌组织MAL mRNA表达水平与临床病理特征的关系

  3 讨 论

  MAL基因定位于2q13,共含有4个外显子,其cDNA长为1 051 bp。MAL是T淋巴细胞成熟相关蛋白,它强烈表达于正常食管上皮细胞,1987年ALONSO等[1]报道具有特征性的MAL cDNA克隆呈现在成熟T淋巴细胞上。现已证实,MAL是组成向顶端运输的细胞膜和分泌性蛋白的必不可少的组成部分[2~6]。基于MAL的功能是诱发广泛的大量囊泡形成,有作者提出,MAL在顶端传送体的形成中扮演着重要角色[7,8]。现在已有许多研究证明,MAL表达和人类食管恶性肿瘤相关。有学者报道,MAL基因在食管癌发生的不同阶段均表达下调,且从不同角度分析和探讨MAL基因表达下调的可能机制,MAL的不表达或表达下调在食管癌发生中可能起决定性作用[9,10]。

  TUGORES等[11]报道,MAL启动子区设计缺失影响转录子失活,没有观察到MAL基因组区有遗传性的修改,而且在13例食管癌细胞株中有3例MAL启动子发生甲基化,9例细胞株中MAL表达正调节。其机制可能为MAL启动子DNA甲基化和组蛋白脱乙酰基协同作用于MAL基因导致肿瘤发生。然而,现在仍没有明确MAL基因在癌组织中表达是否被其他机制调节,如染色体缺失、突变或其他畸变。功能性测定表明,在癌细胞中外源性MAL的表达可引起细胞运动性降低,在活体内致瘤性下降。本研究采用定性和半定量两种方法研究了食管癌MAL mRNA的表达与性别、年龄、临床分期及组织学分级等因素的关系。结果显示,MAL mRNA的表达缺失在不同性别、年龄中无明显差异,从而推测食管癌MAL mRNA的表达缺失与性别、年龄无关,而MAL基因的表达与食管癌的组织学分级、临床分期也无相关性,与文献[12,13]报道不符,可能与病例数较少有关。本文研究结果显示,食管癌组织 MAL mRNA相对表达量与癌旁组织比较差异有显著性,且随临床分期和组织学分级的增高,其表达水平明显降低,即MAL基因在食管癌组织中表达显著下调。表明MAL基因表达下调是食管癌发生、发展过程中的一个频发事件。国内许智雄等[14]通过PCR分析显示,在食管癌细胞系EC109、EC8712和EC9706中都存在被分析的MAL基因片段。

  本文在研究食管癌组织MAL基因的表达同时,也探讨了MAL基因与食管癌淋巴结转移的关系。结果显示,淋巴结转移阳性组MAL的表达显著低于淋巴结转移阴性组(P<0.05),提示食管癌组织MAL的低表达与淋巴结转移存在显著的相关性,关于MAL基因如何调节食管癌淋巴转移的机制仍不十分清楚。淋巴结转移是食管癌的独立危险因素,MAL的低表达与淋巴结转移存在显著的相关性,因此,MAL基因的表达与食管癌的预后有一定的相关性。目前,关于食管癌MAL基因与淋巴结转移的关系的同类研究尚未见报道,要得到更加准确和客观的结果还需要更大样本量的研究。

  【参考文献】

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