内折香茶菜素D抗肿瘤作用的研究

　　内折香茶菜素D 抗肿瘤作用的研究

　　李继成1, 张启堂3, 杨丽嘉2, 苏金玲4, 常爱武2, 付春景3

　　(11郑州大学药学院 　河南郑州 　 450052 ; 21郑州大学医学实验中心 　河南郑州 　450052 ; 31郑州大学基础医学院 　河南郑州 　 450052 ; 41郑州大学第一附属医院　河南郑州 　 450052)

　　摘要: 目的: 研究内折香茶菜素D(以下简称内折素D)对动物移植性肿瘤的作用以及对机体免疫状态的影响。方法: 以动物移植性肿瘤艾氏腹水癌(ECA) ,肉瘤 S180 ,肝癌(HCA) ,Lewis肺癌为模型 ,以 5- Fu为阳性对照组 ,以生理盐水为阴性对照组 ,观察1215 mg/ kg和25 mg/ kg内折素D的抗肿瘤作用 ,并采用小鼠溶血素实验和小鼠迟发性变态反应实验观察内折素D对机体免疫状态的影响。结果: 内折素 D与阴性对照组相比在体外对 ECA肿瘤细胞有较强的杀伤力 ,在体内对 S180实体型和腹水型肿瘤 ,HCA实体型和腹水型肿瘤以及Lewis肺癌实体型肿瘤均有较强的抑制作用 ,与阳性对照组相比 ,对机体免疫状态无明显影响。结论: 内折素D具有较强的抗肿瘤作用 ,且对机体免疫状态无明显影响。

　　关键词: 内折香茶菜素D; 艾氏腹水癌; 肉瘤 S180 ; 肝肿瘤; Lewis肺癌; 抗肿瘤作用

　　Abstract : Objective : To study the effects of rabdosia inflexusin D on transplanted tumors and the immunological influence in mice. Methods : The antitumor effects of Inflexusin D in 1215 mg/ kg and 25mg/ kg dosage on Ehrlich ascites carcinoma (ECA) ,sarcoma 180 (S180) ,Hepatoma carcinoma (HCA) ,and lewis lung carcinoma (Lewis) were investigated by using the inplanted tumor animal models ,The immunological affects were observed by using hemolysin and delayed hypersensitive tests in mice. The 5-Fu was Used as positive control and the normal soline as bland control . Results : It showed that Inflexusin D had significant cytotoxicity against ECA cell in vitro and had high antitumor activity against S180 solid and ascites , HCA solid and ascites and lewis solid in vivo when compared with the blank control , Its effects were dose dependent ,There was no prominent influence of Inflexusin D to immunologicalstate of the animals when compared with 5- Fu. Conclusion : Inflexusin D has relative high potent antitumor effects and no obvious influence to immunological state of the animals.

　　Keywords : inflexusin D ; ehrlich awcites carcinoma ; sarcoma 180 ; hepatoma carcinoma ; lewis lungcarcinoma ; antiumor activity

　　内折香茶菜是冬凌草同科(唇形科Labiatae) ,同属(香茶菜属 Rabdosia)植物。拉丁名为 Rabdosia inflexus(Thunb) ,为多年生草本植物 ,资源很广 ,河南山区及江苏、山东、四川、安徽等地山区都有生长。本课题组对内折香菜粗制剂进行了药理作用的前期研究 ,结果表明 ,其对体内和体外的 ECA肿瘤细胞有明显的抑制作用。前文已报告了内折香茶菜乙素抗肿瘤作用的研究4。为探求内折素D为其黄酮苷。为了解内折素D与其抗肿瘤作用 ,作者采用多种动物移植性肿瘤模型 ,观察内折素D对动物肿瘤的抑制作用 ,并对动物溶血素水平和迟发性超敏反应进行了检测 ,观察内折素 D对机体免疫功能的影响。

　　1 　材料与方法

　　111　材料 　内折素 D 经薄层法鉴定其纯度为 99 % ,含量内折素D为315 %(按生药计算) 。郑州大学实验中心新药研究室提供 ,内折素 D 为针状结晶 ,溶解于水 ,实验时用生理盐水稀释到所需浓度备用。由郑州大学实验动物中心提供的昆明种小白鼠和 C57纯种小鼠 ,体重均为20 ± 2 g雌雄兼用 ,实验室室温为 22 ℃～25 ℃,常规饲料喂养 ,饮水量不限。瘤株艾氏腹水癌(ECA) ,肉瘤(S180)实体型及腹水型 ,肝癌(HCA)实体型及腹水型 ,肺癌(Lewis)实体型 ,各瘤株均由河南省医学科学研究所药理室保种 ,按常规方法传代接种。

　　112 　方法

　　11211　对体外培养的 ECA 癌细胞生长的影响: 无菌条件下 ,抽取荷 ECA 肿瘤小鼠腹水混悬于 RPMI1640培养液中 ,调细胞浓度为 5 ×105/ ml- 1,接种于培养瓶中 ,每瓶接种细胞悬液 119 ml 按拟定剂量加入药液011 ml ,总体积 2 ml ,置体积分数为 5 %CO2 培养箱中37 ℃ 培养24 h后取出 ,采用台盼兰拒染法测定细胞杀伤率。

　　11212　体内抗肿瘤作用实验: 方法同4的方法。腹水型肿瘤以生命延长率为疗效指标 ,停药后继续观察60 d死亡的动物以实际存活时间为生存时间 ,长期存活动物以 60 d 为生存时间计算。实体型肿瘤以瘤重抑制率作为疗效指标 ,于停药次日将肿瘤剖出精确称重。实验结果的统计学方法用 t 检验。

　　11213 　对机体免疫功能的影响: 采用小鼠溶血素实验 ,测定本品对小鼠体液免疫状态的影响 ,本实验分组同11212 ,用昆明种小鼠进行实验。实验方法同4的方法 ,24 h处死动物 ,剪下小鼠左右两耳壳 ,用打孔器打下直径为 8 mm的耳片精确称重 ,以左右两耳重量之差为肿胀度 ,同时取其胸腺、脾脏精确称重。计算其脾指数和胸腺指数 ,实验结果用 x ±s 表示,组间比较用 t 检验。

　　2 　结果

　　211 　对体外培养的 ECA瘤细胞生长的影响　见表1。　　由表1可以看出 ,内折素 D 剂量为 2 mg/ L 时 ,细胞杀伤率为100 % ,当减小到 0125 mg/ L 时则为 69 % ,作用明显减弱 ,表明单体化合物在体外对 ECA 肿瘤细胞有较强的细胞毒作用 ,且随剂量增大而作用增强。

　　212 　体内抗肿瘤作用实验　见表2～7。

　　由表2～7可以看出 ,内折素D在剂量为1215 mg/kg/ d× 10时 ,对实体型及腹水型肿瘤表现有一定抑制作用 ,而剂量为 25 mg/ kg/ d ×10 时 ,疗效提高 ,表现出明显抗肿瘤作用 ,与对照组相比 , P < 0101。

　　212 　内折素D对小鼠溶血素的影响 　 见表8。

　　结果表明 ,对照组的最大溶血稀释度为 1∶ 512 ,内折素D两剂量的最大稀释度分别为1∶ 512、 1∶ 256 ,表明内折素D在 25 mg/ kg/ d ×5 剂量时 ,对以溶血素反应为指标的体液免疫可能有轻度抑制作用。213　对 DNCB 诱导的小鼠迟发性超敏反应的影响 　见表9。

　　由表9可能性可以看出 ,内折素D与正常组相比 ,两剂量组的耳肿胀度、脾指数和胸腺指数均无差异( P> 0105) ,表明内折素 D 对小鼠体细胞免疫无明显作用。

　　3 　讨论

　　小鼠肝癌(HCA) 、肉瘤(S180) 、 Lewis 肺癌、艾氏腹水癌(ECA)均为抗肿瘤药物筛选实验中常用的动物移植性肿瘤模型 ,作者采用瘤株进行了内折素 D 的抗肿瘤作用实验。用小鼠溶血素实验和DNCB 诱导的小鼠迟发性超敏反应实验观察内折素 D 对小鼠的机体免疫状态的影响。其抗肿瘤作用从体内、外实验结果来看 ,内折素D具有较强的抗肿瘤作用 ,且抗瘤谱较广 ,能抑制Lewis肺癌、实体瘤 S180实体型 ,以及肝癌 HCA实体型等实体瘤的增长 ,也能明显延长荷肉瘤 S180腹水型和荷肝癌(HCA)腹水型 ,艾氏腹水癌( ECA)小鼠的生命延长率 ,其抗肿瘤作用的强弱呈现剂量依赖性 ,本实验设有1215 mg/ kg和25 mg/ kg两剂量组 ,其中以25 mg/ kg为最好。内折素D小剂量表现有一定的抑瘤作用 ,与对照组相比 P < 0105 有明显差异 ,而与 5- Fu组相比则无明显差异。从对机体免疫机能影响的实验结果来看 ,内折素 D 对小鼠细胞免疫无影响 ,在 25mg/ kg剂量时 ,对小鼠溶血素水平有较轻微抑制 ,表明在该剂量时 ,本品对小鼠的体液免疫有较轻微的影响 ,但与阳性对照药 5- Fu 相比 ,则表现出明显差异 ,5- Fu的实验结果表明其对机体体液免疫有很强的抑制作用 ,5- Fu作为本实验阳性对照药 ,显示出对小鼠各瘤株有明显的抑制作用 ,其抑瘤率与阴性对照组相比 ,均有明显差异 ,但免疫实验结果又表明 ,5- Fu 对机体免疫亦呈现明显抑制作用 ,这样就限制了本品在临床上的应用。

　　从内折素D 体内和体外实验结果来看 ,显示出较强的抗肿瘤作用 ,而免疫结果又表明 ,对机体免疫机能没有明显影响 ,而由于内折素 D 是由内折香茶菜中提出 ,内折香茶菜资源丰富 ,表明内折素 D 具有较好的临床应用价值 ,可作为一种有前途的抗肿瘤药物 ,进一步深入研究与开发。

　　参考文献

　　1 　李继成,袁宝梅,沈晓羽,等.云南植物研究J . 内折香茶菜素的化学结构,1993 ,15(3) :2911

　　2 　李继成,苏金玲,方桂运,等.内折香茶菜素D的结构. 21届国际天然产物化学 论文集 199811-201

　　3 　李继成,袁宝梅,苏金玲,等.中草药J . 内折香茶菜素抗癌成份的研究,1996 ,27(6) :323-3251

　　4 　李继成,叶启霞,杨丽嘉,等.中草药J . 内折香茶菜乙素抗肿瘤作用的研,2000 ,31(9) :681-6831

　　5 　王庆端,王绵英,刘海君,等.鲁山冬凌草甲素的抗肿瘤作用的研究J . 河南医科大学学报,1987 ,22(4) :372-3761

　　6 　徐叔云. 药理实验方法学 M. 第 2 版. 北京:人民卫生出版社,1992111-13