免疫组化技术在肺神经内分泌肿瘤病理诊断中的应用

　　作者：李海,邓志勇,徐松,陈金珍,张阳　　作者单位：江苏，昆山市第一人民医院病理科

　　【摘要】目的探讨肺神经内分泌癌临床特点和免疫病理分型。方法总结我院肺神经内分泌癌14例的病理资料与临床资料进行分析。结果肺神经内分泌癌占同期检出肺癌的12%(14/117)，其中男性10例，占71.4%(10/14)。神经内分泌癌免疫标记NSE Syn CgA阳性率分别为92.9%，71.4%，64.3%。结论肺神经内分泌癌具有恶性程度高，发展迅猛，早期就伴有局部或远处转移。存在上皮及神经内分泌等多项分化，联合多项免疫标记可极大提高肺神经内分泌肿瘤检出率。

　　【关键词】 肺肿瘤;神经内分泌;免疫组化;预后

　　目前最新版WHO肺癌分类将肺神经内分泌癌分为类癌、不典型类癌、小细胞癌和大细胞神经内分泌癌，而其中的肺小细胞癌(SCLC)占所有肺癌的15%~20%。与非小细胞癌相比，尽管有资料显示SCLC的发病率似乎有稳定下降趋势，但由于该类型肿瘤特有的生物学行为、与非小细胞癌治疗与预后的差别，使得对SCLC的发生、诊断及治疗的研究在整个肺癌研究中仍占有相当的比重。为了深入了解肺神经内分泌癌的临床病理特征及免疫表型，探讨免疫组化技术在其病理诊断中的应用价值，现对我院病理科经光镜及免疫组化证实的肺神经内分泌癌进行回顾性分析如下。

　　1资料与方法

　　1.1一般资料14例患者中男性10例，女性4例;年龄38~77岁，平均年龄62岁。7例患者吸烟量>400支/年，5例患者没有吸烟史。症状主要以咳嗽57.1%(8/14)和痰血(6/14)为主，其他为胸痛、咳嗽和发热等。

　　1.2方法组织标本经4%的中性甲醛固定，常规脱水，浸蜡，包埋，切片厚3~4um，HE染色，光镜诊断，免疫组化采用SP法，所用一抗NSE Syn CgA CD56 CK-Pan LCA均购自福州迈新公司。

　　1.3结果判断NSE Syn CgA CD56 CK-Pan着色部位均在细胞质， LCA着色部位在细胞膜。综合分析整张切片的阳性细胞率及染色强度：阳性细胞率<10%，着色淡定者定为(-);阳性细胞率≥10%，可见棕黄色颗粒者定为(+)。

　　2结果

　　2.1光镜诊断组织学上示肿瘤细胞小，呈圆形、卵圆形、梭形、雀麦形，但较淋巴细胞大，核染色质呈细颗粒状，深染，核仁不明显或无，胞浆少，境界不清，核分裂像多见;癌细胞常弥漫分布，或呈实性片状，也可呈条索状或小梁状，但无器官样结构，间质甚少。在14例病理切片中，5例(35.7%)伴组织有机械性挤压现象，其中1例因严重挤压而使组织无法确诊，最后经再次活检而确诊。

　　2.2免疫表型所有病理切片光镜诊断后均行免疫标记，14例肺神经内分泌癌免疫组化结果。肺神经内分泌癌免疫组化标记结果

　　3讨论

　　肺神经内分泌癌(neuroendoerine carcinoma)是一类能够将胺的前体摄取，通过脱羧作用，从而合成和分泌胺及多肽激素的恶性肿瘤，其共同的特征是：(1)分化好和中分化的瘤组织，常呈器官样结构(Organoid Pattem)，可见菊形团或菊形团样结构;(2)瘤细胞可表达多种神经内分泌标记，如NSE、CsA、Sy.、S-100蛋白、Leu-7等;(3)电镜下，瘤细胞内可见多少不等的神经内分泌颗粒。而肺小细胞癌占所有肺神经内分泌癌的10%~20%[1]，患者多为中老年，平均60岁(32~79岁)，80%以上为男性，其发生与吸烟密切相关。85%以上的患者为吸烟者。本组病例肺神经内分泌癌占同期检出肺癌的12%(14/117)，其中男性10例，占71.4%。平均年龄62岁，64.3%(9/14)患者有吸烟史，均低于文献报道[2]。需要进行大样本进一步研究。肺神经内分泌癌常发生于大支气管，多表现为中央型肺癌，治疗原则多采用以放.化疗为主手术为辅的综合治疗方法。由于其组织形态学上具有细胞分化差等特性，多数病人发现时已伴有局部或远处转移。预后常常与病理类型相关，典型类癌预后较好，5年生存率可达70%，不典型类癌次之，但仍优于低分化腺癌，小细胞癌预后最差，中位生存时间为6个月，其2年生存率<20%。

　　肺神经内分泌癌具有上皮及神经内分泌标记阳性的特点，这两类标记物的免疫组化表型对确定神经内分泌癌的诊断具有十分重要的的作用。首先在临床外检工作中，我们常常采用上皮标记CK-Pan和EMA做出非上皮标记的鉴别诊断，本组发现前者免疫表型阳性率为100%(14/14)。足以支持肺神经内分泌癌来源于支气管粘膜干细胞。常用的神经内分泌标记物有NSE Syn CgA，对于这些标记物，典型的肺神经内分泌癌一般均呈弥漫性表达，少数为局灶性，表达形式为细胞质型，NSE敏感性强但特异性不及Syn CgA.,故在临床外检工作中，常常将NSE Syn CgA联合应用，本组资料显示NSE Syn CgA阳性率分别为92.9%，71.4%，64.3%。与文献报道一致，尽管国内外有文献报道CgA、Syn和NSE是一组特异性和敏感性较好的神经内分泌分化共同标记，并且本研究结果也证明了这一点，但是它们的表达并非完全一致。本组中仅2例患者同时3种标记均表达，竟然有4例仅表达1种标记，其中CgA 2例、Syn1例和NSE 1例，说明任何一种标记都不是神经内分泌分化诊断的完美标记，不能以某一种标记的表达与否作出神经内分泌分化标准。而且，细胞分化是细胞特异性基因组共同协调表达的结果，因此，肿瘤的神经内分泌分化特点应有多种分化标记同时联合检测，并结合表达水平综合评价癌细胞是否具有神经内分泌特点。

　　CD56是神经细胞粘连分子的一种糖蛋白，位于中枢和外周神经细胞及纤维膜表面，在神经生长和发育中发挥重要作用。其高表达性是近年来运用于肺神经内分泌癌免疫病理诊断中的热点问题。云经平等[3]的研究表明其阳性表达为86%，与近期文献表达大多一致。值得注意的是，神经内分泌标记阴性不能否定肺小细胞癌的诊断。本组资料显示25%的病例神经内分泌标记阴性。与文献报道一致[4]。对于神经内分泌标记阴性的病例，可结合镜下特点和CK-Pan阳性做出肺神经内分泌癌的病理诊断;对于神经内分泌标记阴性同时组织挤压严重的病例，需要与淋巴瘤鉴别，可通过标记LCA和CK-Pan的明确诊断。肺神经内分泌癌LCA标记阴性，而淋巴瘤标记阳性。

　　综上所述，在正常细胞向肿瘤细胞转化的过程中，存在着巨大的源动力以决定分子和细胞的异常，出现肿瘤细胞分化方向和分化程度的不同，构成了肿瘤异质性和多样性，从而导致免疫表型的表现不一致。神经内分泌肿瘤的上皮样分化告诉我们它们之间存在着共同抗原，因此预示多项免疫标记同时运用于常规病理诊断的重要性。能极大的提高肺神经内分泌肿瘤的检出率。

　　【参考文献】

　　[1]Singh S,Panulekar W,Murray N,et al,Influence of sex on toxicity and treatment outcome in smell-cell lung cancer[J],J Clin Oncol,2005,23(4):850-856.

　　[2]赵焕芬,何春年.肺小细胞癌53例临床病理分析[J]，诊断病理学杂志，2007，14(6):437-440.

　　[3]云经平,向锦.CD56在小细胞癌组织中的表达及其对诊断的作用[J]，癌症，2005，24(9)1140-1143.

　　[4]Guince DG,Jr Fisback NF,Koss MN, et al.The spectrum of immunohistochemical staining of small-cell lung carcinoma in specimens form transbronchial and opan-lung biopsies[J].Am J Clin Pathol 1994，102(4)：406-414.