肺癌患者血清单核细胞趋化蛋白1含量和活性的变化及其意义

　　作者：王达安,程少冰,卢康荣　　作者单位：暨南大学医学院病理生理教研室，广东 广州

　　【摘要】目的探讨肺癌患者血清单核细胞趋化蛋白1(MCP1)含量和单核细胞趋化活性(MCA)的变化规律。方法采用ELISA测定肺癌组和健康对照组血清MCP1的含量,并以Boyden小室趋化实验测定两组血清MCA。结果 肺癌组血清MCP1含量明显高于健康对照组(P<0.01),但肺癌组血清MCA却明显低于健康对照组(P<0.01)。肺癌组血清MCP1含量与MCA的相关系数(r=0.39)明显低于健康对照组(r=0.87)。结论 肺癌患者存在单核细胞趋化活性不足。

　　【关键词】 肺肿瘤;单核细胞趋化蛋白1;单核细胞趋化活性

　　单核细胞趋化蛋白1(MCP1)是具有广泛作用的多功能细胞因子，在抗肿瘤免疫这一多细胞参与的反应中的作用日益受到重视〔1，2〕。但肺癌患者MCP1含量、活性的变化，尚未见文献报道。本实验拟通过比较肺癌患者与健康者血清MCP1的含量及单核细胞趋化活性(MCA)的差异,探讨MCP1和MCA变化在肺癌发病中的作用。

　　1 资料与方法

　　1.1 一般资料

　　随机选择住院或门诊肺癌病人60例，依据其病史、症状体征、辅助检查和支气管镜活检病理结果诊断,年龄36～62〔平均(48.2±11.6)〕岁，男32例，女28例。另选择参加日常体检的健康者(非吸烟者)58例作为健康对照组，年龄38～59〔平均(46.7±9.4)〕岁，男31例，女27例。

　　1.2 方法

　　1.2.1 标本采集

　　肺癌组及健康对照组均于清晨空腹抽取静脉血4 ml,离心分离出血清，置-70℃保存，备作MCP1及MCA测定。

　　1.2.2 MCP1含量测定

　　用ELISA法测定，试剂盒由美国Genzyme公司提供;操作按试剂盒说明书进行。

　　1.2.3 MCA测定

　　用Boyden小室法测定〔3〕：用1 mmol/L 82溴cAMP (Sigma，美国) 诱导培养U937 人前单核细胞株(中科院上海细胞所);48 h 后用4 μm 孔径的Boyden 小室迁移系统进行趋化实验。上室加0.2 ml U937 细胞悬液,细胞量为1×105，下室放有0.6 ml测试样品(肺癌组及健康对照组血清)。37℃、5% CO2孵育90 min。固定、苏木素染色，光镜下单核细胞计数。趋化单位(U)= 下室单核细胞数/上室单核细胞数(100%)。

　　1.3 统计学处理

　　采用SAS8.0软件包进行统计学分析，数据以x±s表示，两组样本均数比较采用t检验;两指标相关关系采用直线相关分析。

　　2 结 果

　　2.1 两组血清MCP1含量及MCA比较 肺癌组患者血清MCP1及MCA水平较健康对照组增高(P<0.01)，两组血清MCP1含量及MCA比较

　　2.2 两组血清MCP1含量与MCA的关系

　　健康对照组和肺癌组血清MCP1含量与MCA之间均呈正相关(r分别为0.87、0.39，均P<0.01)。

　　3 讨 论

　　研究表明MCP1是体内炎性浸润模型中引起单核细胞聚集的唯一因素〔2〕。MCP1可调节黏附分子β2、α4整合素及白细胞黏附分子 1的细胞表面表达,以膜结合形式调节多种黏附分子的活性,促使各种炎症细胞，尤其是单核细胞向病变部位聚集。因此MCP1能诱导血液中的单核细胞发生迁移并聚集在病变部位发挥生物效应，从而在机体防御、炎症反应及抗肿瘤方面起重要作用。MCP1对T细胞也具有趋化作用，实验证明MCP1可刺激T细胞克隆增殖并分泌IL2,Ca2+和IL2的协同作用可增加可溶性CD25表达,促进T细胞生长〔4〕。MCP1能诱导细胞毒性T细胞(CTL)脱颗粒和释放酯酶,促使辅助性T细胞(TH1和TH2)克隆化,释放多种淋巴因子,上调T细胞功能,增强机体免疫反应。MCP1是对自然杀伤细胞(NK细胞)作用最强的β亚族趋化因子,与细胞表面G蛋白受体结合后，能诱导NK细胞趋化移动。MCP1促使NK细胞脱颗粒及释放溶菌酶,介导对靶细胞的杀伤作用,并剂量依赖性地增强其细胞溶解活性。

　　目前认为MCP1在抗肿瘤免疫中起重要作用。虽然MCP1本身对肿瘤细胞并不直接引起细胞毒反应,但肿瘤产生的MCP1被认为是肿瘤相关巨噬细胞聚集的重要原因。实验证明产生高水平MCP1的肿瘤组织中，巨噬细胞瘤内浸润总数量增多，且肿瘤接种指数较低，肿瘤侵袭速度较缓慢。MCP1还通过激活T细胞、NK细胞等免疫细胞，促进多种细胞因子和介质的分泌，直接和间接识别和攻击肿瘤，抑制肿瘤生长、转移。Huang等〔5〕将表达MCP1的纤维母细胞和肾癌细胞共同接种动物,发现混合接种能抑制肿瘤生长和转移。MCP1表达细胞的培养上清在脂多糖(LPS)作用下,能协同性的增强巨噬细胞对小鼠肾癌细胞的免疫原性(RENCA)的杀伤活性,MCP1单抗则可阻断这一效应。

　　Iantorno等〔6〕检测了膀胱癌患者卡介苗(BCG)治疗后多种细胞因子表达,发现MCP1表达水平的升高与患者无瘤状态维持相关。但肺癌患者MCP1变化及与肺癌的发病关系目前仍未清楚。本研究表明，虽然肺癌患者的MCP1浓度增加，但其活性并无同步提高，反而是下降的;这可能是造成肺癌患者不足以产生有效的抗肿瘤免疫力的重要因素之一。至于肺癌患者为什么会出现MCA不足，这可能是因为肺癌患者体内存在某种抑制物抑制了MCP1的活性，或者是MCP1的基因表达发生了变异后而致其活性下降，使肺癌得以发生发展。本研究初步显示肺癌患者MCP1含量及其活性的变化规律;推测通过改变患者体内的MCP1，尤其是提高其活性，可能有助于机体对肺癌的抗肿瘤免疫功能的提高。

　　【参考文献】

　　1 Zhang L,Kayat A,Cheng H,et al. The pattern of monocyte recruitment in tumors is modulated by MCP1 expression and influences the rate of tumor growth〔J〕.Lab Invest,1997;76(4):57990.

　　2 Lu B,Rutledge BJ,Gu L,et al. Abnormalities in monocyte recruitment and cytokine expression in monocyte chemoattractant protein 1deficient mice〔J〕. J Exp Med,1998;187(4):6018.

　　3 吴雄文,梁智辉.实用免疫学实验技术〔M〕.武汉:湖北科学技术出版社,2002：2140.

　　4 Taub DD,TurcovskiCorrales SM,Key ML,et al.Chemokines and T lymphocyte activation:I.Beta chemokines costimulate human T lymphocyte activation in vitro〔J〕. J Immunol， 1996;156(6):2095103.

　　5 Huang S,Xie K,BarEli M,et al.Suppression of tumor growth and metastasis of murine renal adenocarcinoma by syngeneic fibroblasts genetically engineered to secrete the JE/MCP1 cytokine〔J〕.J Inter Cytokine Res， 1995;15(7):65565.

　　6 Iantorno R,Nicolai M,Tenaglia R,et al.Role of MCP1 chemokine in the response of monocytes of patients with superficial tumors of the bladder treated with BCG immunotherapy〔J〕. Arch Itol Urol Androl,1997;69(S1):712.