胃癌细胞HGC-27与SGC-7901体外增殖和黏附能力的比较

　　作者：王婷婷,王玉巧,马佰菁,韩梅,林佳静　　作者单位：宁夏医科大学基础医学院病原生物学与免疫学系，银川

　　【摘要】 目的 比较两株胃癌细胞HGC-27与SGC-7901的体外增殖和黏附能力。方法 分别培养胃癌细胞HGC-27、SGC-7901，用噻唑蓝(MTT)比色实验和流式细胞术(FCM)比较两种细胞的体外增殖能力;用同质黏附和异质黏附实验比较两种细胞的体外黏附能力。结果 MTT比色实验绘制生长曲线显示SGC-7901生长较HCC-27慢;流式细胞术结果表明SGC-7901的增殖活性低于HGC-27(P<0.05);黏附实验中SGC-7901同质黏附强于HGC-27，异质黏附弱于HGC-27(P<0.05)。结论 胃癌细胞SGC-7901的体外增殖能力和异质黏附能力低于HGC-27，同质黏附能力高于HGC-27，提示胃癌细胞HGC-27的转移能力可能强于SGC-7901。

　　【关键词】 胃癌细胞;HGC-27;SGC-7901;增殖;黏附

　　Comparison of Proliferation and Adherence between Two Human Gastric Cancer Cell Lines in Vitro(Dept.of Pathogenic Biology and Immunology,Ningxia Med.Univ.,Yinchuan 750004)

　　Abstract: Objective To compare the proliferation and adhesion between two gastric cancer cell lines in vitro.Methods Human gastric cancer cell lines HGC-27 and SGC-7901 were cultured.The abilities of proliferation were measured with MTT colorimetric assay and flow cytometry (FCM) ; The ability of adhesion was detected using homogeneous array and heterogeneous array.Results The result of MTT colorimetric assay showed that the cellular growth of SGC-7901 was significantly slower than that of HGC-27( P<0.05).The SPF of HGC-27 showed significantly higher than that of SGC-7901(P<0.05).Homogeneity adhesion experiment suggested homogeneity adhesion of HGC-27 was significantly weaker than that of SGC-7901.Alloplasm adhesion experiments indicated that the adhesive activity of HGC-27 was significantly stronger than that of SGC-7901.Conclusion For SGC-7901,the ability of proliferation and homogeneous adhesion were lower than that for HGC-27,and the ability of heterogeneous adhesion in SGC-7901 was stronger than that in HGC-27.

　　Key words:gastric cancer cell; HGC-27;SGC-7901;proliferation;

　　胃癌是消化道高发的恶性肿瘤，发病率和死亡率均位于恶性肿瘤的前列[1]。虽然临床上对胃癌可采取手术、放疗、化疗等综合治疗措施，但很多患者仍死于肿瘤的侵袭及转移。侵袭性与转移能力是癌细胞区别于正常细胞的最基本的特征，也是导致患者肿瘤复发、病情恶化而最终死亡的病理基础，因此侵袭转移是影响胃癌预后的最重要的因素[2-3]。胃癌的转移机制尚不清楚，可能与缺氧、微环境变化等多种因素有关[4-6]。本文选取两株胃癌细胞比较其体外生长和黏附特性，为下一步研究胃癌的转移机制奠定基础。

　　1 材料与方法

　　1.1 试剂与材料

　　胃癌细胞HGC-27、SGC-7901均购自中科院上海细胞库。RPMI-1640培养基购自GIBICO公司,标准胎牛血清购自杭州四季青公司,胰蛋白酶购自Amresco公司，96孔板及24孔培养板均购自COSTAR公司。

　　1.2 方法

　　1.2.1 细胞培养

　　SGC-7901培养于含 10% 胎牛血清、50μL•100 mL-1青霉素、125μL•100 mL-1庆大霉素的RPMI-1640培养液中; HGC-27 培养于含 10% 胎牛血清、50μL•100 mL-1青霉素、125μL•100 mL-1庆大霉素的MEM培养液中,细胞均置于37℃,5% CO2 的孵箱中生长。

　　1.2.2 MTT比色法检测两种细胞的体外增殖能力

　　两株细胞生长于对数生长期后，分别用0.25%胰酶消化后制成单细胞悬液，以1.0×103个•孔-1接种于96孔板中，200μL•孔-1，设4个复孔，37℃,5% CO2 培养。分别培养1、2、3、4、5、6d和7d计数细胞。结束培养前4h，每孔加入MTT，孵育4h后终止培养，弃去上清液，每孔加入150μL DMSO，充分震荡混匀10min。在490nm波长的酶联免疫检测仪上测定各孔吸光度值，以时间为横轴，吸光度值(OD)为纵轴，绘制细胞生长曲线。

　　1.2.3 流式细胞术检测两种细胞的DNA倍体和细胞周期

　　对数生长期细胞，分别用0.25%胰酶消化，调整细胞密度为1×106个•mL-1。以正常人外周血单个核细胞做对照，用流式细胞仪在488nm激发光检测DNA含量，MCYCLE软件分析细胞周期，以S期细胞所占百分比(SPF)表示细胞的增殖活性:SPF=SG0+G1+S+G2+M×100%。

　　1.2.4 同质黏附实验

　　细胞以12.5×104个•mL-1接种于24孔培养板中，1mL•孔-1，每株细胞设3个复孔，待生长至铺满孔底不留空隙，再在其上加入1.0×105个•mL-1的相应细胞，200μL•孔-1，分别于培养60min和90min后，吸上清，并以生理盐水洗涤未充分黏附的细胞，计数上清和洗涤液中的细胞数，即未黏附的细胞。黏附细胞百分比(%)=(细胞总数-未黏附的细胞)/细胞总数×100%。

　　1.2.5 异质黏附实验

　　以1.0×105个•mL-1接种于24孔培养板中，200μL•孔-1，每株细胞设3个复孔，培养3h后，吸上清，并以生理盐水洗涤未充分黏附的细胞，计数上清和洗涤液中的细胞数，即未黏附的细胞。黏附的细胞百分比(%)=(细胞总数-未黏附的细胞)/细胞总数×100%。

　　1.3 统计学方法

　　采用SPSS 13.0软件进行统计分析，数据以均数±标准差(±s)表示，计量资料两两比较采用两样本对数t检验，检验水平为0.05。

　　2 结果

　　2.1 MTT比色法检测两株细胞的体外增殖能力

　　用两株细胞连续培养7d的吸光度值绘制生长曲线。结果显示，SGC-7901的增殖速度较HGC-27慢，二者差异有统计学意义。

　　2.2 流式细胞术检测细胞DNA倍体和细胞周期 经流式细胞术检测，两株均为异倍体细胞。SGC-7901的SPF低于HGC-27，且G0/G1比例高于HGC-27,P<0.05。流式细胞术测定两株胃癌细胞的周期分布

　　2.3 两株胃癌细胞的同质黏附能力及异质黏附能力比较

　　两株胃癌细胞在同质黏附介质上分别生长60和90min时，SGC-7901比HGC-27黏附细胞数高，差异有统计学意义(P<0.05)。两株胃癌细胞在24孔板上生长3h后，SGC-7901比HGC-27的异质黏附能力弱(P<0.05)。HGC-27和SGC-7901的黏附细胞数。两株胃癌细胞黏附能力的比较

　　细胞种类同质黏附实验细胞数/×103个60min90min异质黏附实验细胞数/×103个HGC-276.97±0.077.71±0.198.98±0.15SGC-79017.67±0.12*8.05±0.05*8.32±0.09* 与胃癌细胞HGC-27株比较*P<0.05

　　3 讨论

　　肿瘤的恶性程度与其细胞的生物学特性密切相关[7]，恶性程度越高的肿瘤细胞体外生长增殖和迁徙转移能力越强;反之，恶性程度低的肿瘤细胞的体外生长增殖和迁徙转移能力越弱。机体肿瘤转移的过程中，肿瘤细胞需脱落并侵入基质，这时同质黏附能力下降，运动能力增加;肿瘤细胞到达特定的继发组织或器官时，通过异质黏附作用锚定在血管和周围组织，最终形成转移。

　　本实验采用了两株胃癌细胞：HGC-27来源于未分化胃黏液腺癌，SGC-7901来源于淋巴结转移的胃腺癌[8]。在MTT比色法检测两种细胞的体外增殖能力的实验中，在连续培养的7d内，两株细胞的数量均逐渐增多，但从第2天开始，HGC-27的增殖速度快于SGC-7901。用流式细胞术检测两株细胞的DNA倍体和细胞周期以比较增殖活性的高低，结果表明两株均为异倍体细胞;SGC-7901的SPF低于HGC-27，且G0/G1比例高于HGC-27，表明SGC-7901的增殖活性低于HGC-27。在同质黏附实验中，不论生长60min还是90min，SGC-7901的同质黏附力高于HGC-27，由于同质黏附能力高低在一定程度上反映了肿瘤细胞脱离肿瘤能力的强弱，故HGC-27比SGC-7901更易从肿瘤细胞团中脱离，从而发生转移。在异质黏附实验中，SGC-7901的异质黏附力低于HGC-27，由于异质黏附能力高低在一定程度上反映了癌症细胞与其他组织、细胞黏附能力的强弱，因此SGC-7901比HGC-27更不易与其他组织、细胞黏附，可能不易发生转移。

　　本实验从增殖和黏附能力检测了SGC-7901和HGC-27的差异，显示胃癌细胞SGC-7901的体外增殖能力和异质黏附能力低于HGC-27，同质黏附能力高于HGC-27,为下一步研究影响胃癌细胞转移的相关分子机制打下基础。

　　【参考文献】

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　　[2]齐菲菲,贺福初,姜颖. 肿瘤转移研究的现状与趋势[J]. 生物化学与生物物理进展,2009,36(10):1244-1251.

　　[3]Zeng ZR,Hu PJ,Hu S,et al. Association of interleukin 1B gene polymorphism and gastric cancers in high and low prevalence regions in China [J].Gut,2003,52(12):1684-1689.

　　[4]Cecilia Sahlgren,Maria V,Gustafsson,Shaobo Jin,et al. Notch signaling mediates hypoxia-induced tumor cell migration and invasion[J]. PNAS,2008,105(17):692-697.

　　[5]Shipitsin M,Polyak K. The cancer stem cell hypothesis: in search of definitions,markers,and relevance[J]. Lab Invest,2008,88(5): 459-463.

　　[6]张磊,王效民. 基质细胞与肿瘤发生发展之间的关系[J]. 中国癌症杂志,2009,19(10): 788-792.

　　[7]Song IH. Cancer metastasis and metastasis suppressors[J]. Korean J Gastroenterol,2004,43:1-7.

　　[8]林超鸿,富志民,刘亚伦,等. 人体胃癌细胞株SGC-7901的建立[J].肿瘤,1981,2(1) :1-3.