EMMPRIN和MMP2表达与胰腺癌生物学行为关系

　　作者：战明侨,李玉军　　作者单位：青岛大学医学院附属医院病理科

　　【摘要】 目的探讨基质金属蛋白酶诱导因子(EMMPRIN)和基质金属蛋白酶2(MMP2)在胰腺癌组织表达及其临床意义。方法 采用免疫组织化学PV 6000法检测47例胰腺癌组织中EMMPRIN和MMP2的表达。结果 47例胰腺癌组织中EMMPRIN及MMP2的阳性表达率分别为61.7%、66.0%，二者均与胰腺癌的转移、临床分期和预后有关(χ2=6.61～9.91，P<0.05)。EMMPRIN和MMP2阳性表达率与胰腺癌大小、病人性别、病人年龄和组织学分级无关(P>0.05)。胰腺癌组织中EMMPRIN的表达与MMP2的表达呈正相关(r=0.516，P<0.01)。结论 EMMPRIN和MMP2可能共同参与胰腺癌的浸润和转移过程，可作为判断胰腺癌生物学行为的参考指标。

　　【关键词】 胰腺肿瘤;基质金属蛋白酶类;明胶酶A;肿瘤转移;预后;免疫组织化学

　　EXPRESSIONS OF EMMPRIN AND MMP2 AND THEIR ASSOCIATION WITH BIOLOGICAL BEHAVIOUR IN PANCREATIC CANCER

　　ZHAN MINGQIAO, LI YUJUN

　　(Department of Pathology, The Affiliated Hospital of Qingdao University Medical College, Qingdao 266003, China);

　　[ABSTRACT] Objective To investigate the significance of EMMPRIN and MMP2 expressions in pancreatic carcinoma. Methods Immunohistochemical PV 6000 technique was used to detect the expressions of EMMPRIN and MMP2 in tissue of 47 cases of pancreatic carcinoma. Results The positive rates of EMMPRIN and MMP2 were 61.7% and 66.0%, respectively, both were related with metastasis, clinical staging and prognosis (χ2=6.61-9.91,P<0.05). The expressions of EMMPRIN and MMP2 were not correlated with sex and age of patients and tumor size or histologic grading (P>0.05). There was a positive correlation between the expressions of EMMPRIN and MMP2 in the tissue of pancreatic cancer (r=0.516,P<0.01). ConclusionBoth EMMPRIN and MMP2 may be involved in the process of infiltration and metastasis of cancer of pancreas. Detection of EMMPRIN and MMP2 can be used as parameters for the diagnosis of this malignant tumor.

　　[KEY WORDS] pancreatic neoplasms; matrix metalloproteinases; gelatinase A; tumor metastasis; prognosis; immunohistochemistry

　　侵袭和转移是宿主细胞和肿瘤细胞之间相互作用的一个复杂的多步骤的过程，该步骤与肿瘤细胞的黏附能力、运动能力、增殖能力、对周围间质的蛋白水解能力以及肿瘤组织内肿瘤性血管生成能力有关。其中肿瘤细胞对细胞外基质成分及基底膜的降解是肿瘤浸润转移的关键步骤。细胞外基质金属蛋白酶诱导因子(EMMPRIN)是新近发现的细胞表面黏附因子，具有刺激基质金属蛋白酶产生的作用， 影响肿瘤的侵袭和转移[1]。本研究采用免疫组织化学方法检测胰腺癌组织中EMMPRIN和基质金属蛋白酶2(MMP2)的表达，以探讨二者与胰腺癌生物学行为的关系。

　　1 材料与方法

　　1.1 材料

　　收集我院2001年1月—2005年1月手术切除胰腺癌标本47例，其中男29例，女18例;病人年龄27～75岁，平均56.7岁。每例均有详细的临床资料、手术记录及1年以上的随访结果。术前均未接受化疗和放疗。CT显示包块直径<2 cm者5例，2～4 cm者14例，>4 cm者28例。病理学类型均为浸润型导管癌。按BLOOMRICHARDSON评分标准进行组织学分级：Ⅰ级(高分化)10例，Ⅱ级(中分化)16例，Ⅲ级(低分化)21例。根据国际抗癌协会1997年UICC分期法，Ⅰ期6例，Ⅱ期9例，Ⅲ期21例，Ⅳ期11例。有淋巴结及远处脏器转移者26例。生存期>1年者13例，≤1年者34例。所有标本均经40 g/L的甲醛溶液固定，常规石蜡包埋，4 μm厚连续切片。

　　1.2 试剂

　　鼠抗人EMMPRIN、 MMP2单克隆抗体(均为工作液)和PV 6000试剂盒均购自北京中杉金桥生物技术有限公司。

　　1.3 检测方法

　　采用免疫组化PV 6000法，具体操作步骤按说明书进行。每次染色均设阳性和阴性对照。

　　1.4 免疫组化结果判断

　　EMMPRIN蛋白阳性表达为细胞膜出现棕黄色颗粒，MMP2阳性表达为在细胞质出现棕褐色颗粒。根据显色强度和范围分为：阴性(-)，阳性细胞数<5%;弱阳性(+)，阳性细胞数5%～25%;中等阳性()，阳性细胞数26%～50%;强阳性()，阳性细胞数>50%[23]。

　　1.5 统计学处理

　　采用χ2检验及Spearman相关分析。所有数据均在SPSS 10.0及PPMS 1.5[4]统计软件包上进行处理。

　　2 结果

　　2.1 胰腺癌组织EMMPRIN及MMP2的表达

　　以细胞膜上出现清晰的棕黄色颗粒为EMMPRIN阳性表达，47例胰腺癌组织中EMMPRIN阳性表达率为61.7%(29/47)。MMP2表达主要位于癌细胞胞质，呈棕黄色颗粒，在部分间质的成纤维细胞或血管内皮细胞中也可见阳性表达，47例胰腺癌组织中MMP2阳性表达率为66.0%(31/47)。

　　2.2 EMMPRIN及MMP2表达与胰腺癌临床病理学特征和预后的关系

　　有淋巴结和远隔脏器转移、临床分期Ⅲ～Ⅳ期和1年内死亡病人的胰腺癌组织中EMMPRIN和MMP2的阳性表达率明显高于无转移者、临床分期Ⅰ～Ⅱ期和生存超过1年者，其差异有显著性(χ2=6.61～9.91,P<0.05)。EMMPRIN和MMP2阳性表达率与胰腺癌的大小、病人性别、年龄和胰腺癌组织学分级无关(P>0.05)。见表1。表1 EMMPRIN和MMP2表达与胰腺癌临床病理学特征的关系(略)

　　2.3 EMMPRIN和MMP2在胰腺癌组织中表达的相关性

　　47例胰腺癌组织中，EMMPRIN和MMP2同时表达阳性者27例(57.4%)，同时表达阴性者14例(29.8%)。EMMPRIN和MMP2在胰腺癌组织中的表达呈正相关(r=0.516，P<0.05)。

　　3 讨论

　　人类的EMMPRIN基因位于19q13.3染色体上，其mRNA的长度为117 kb，编码产生由248个氨基酸组成的蛋白质。EMMPRIN表达于人类多种肿瘤细胞，并且与肿瘤的浸润和转移相关。SIER等[5]的研究结果显示，在头颈部鳞状细胞癌中，EMMPRIN诱导MMP2级联反应的激活，促使MMP2发挥蛋白水解的作用，从而使肿瘤更易于转移。KANEKURA等[6]研究28例黑色素瘤中EMMPRIN和MMP2的表达时发现，EMMPRIN表达于黑色素瘤细胞而不是成纤维细胞，有转移的黑素瘤细胞EMMPRIN表达比无转移的黑色素瘤细胞明显增高，MMP2表达也同样存在着显著的差异。李晓莉等[7]的研究显示，结肠癌组织EMMPRIN和MMP2蛋白的阳性表达率均与肿瘤分化程度、DUKES分期、淋巴结转移密切相关，并且两者在结肠癌组织中的表达呈正相关。目前普遍认为，EMMPRIN能够诱导肿瘤细胞本身和成纤维细胞、内皮细胞合成分泌MMP1～MMP3、MMP9、MT1MMP，而不诱导基质金属蛋白酶抑制因子1(TIMP1)的表达，从而导致MMPsTIMPs间失衡，基底膜和细胞外基质降解，从而促进肿瘤的浸润和转移。

　　本文研究结果显示，47例胰腺癌组织中EMMPRIN阳性表达率为61.7%，主要表达于癌细胞膜，间质成纤维细胞未见表达;MMP2阳性表达率为66.0%，主要位于癌细胞的胞质，而且间质的成纤维细胞或血管内皮细胞也可见阳性表达。结果提示，胰腺癌组织中的MMP2可能来源于两个途径：一是癌细胞膜表面EMMPRIN游走至间质组织刺激纤维母细胞分泌MMP2;二是癌细胞本身内在的EMMPRIN激活自身分泌MMP2。本研究结果还显示，EMMPRIN和MMP2 阳性表达率在有淋巴结和远隔脏器转移、临床分期Ⅲ～Ⅳ期和1年内死亡的胰腺癌组织中的表达明显高于无转移者、临床分期Ⅰ～Ⅱ期和生存超过1年者，并且二者在胰腺癌组织的表达呈正相关性。说明EMMPRIN能刺激肿瘤细胞和周围间质的成纤维母细胞产生和激活MMP2，降解细胞外基质和血管基底膜的主要成分Ⅳ型胶原，使肿瘤细胞易于脱离癌细胞巢，侵入血管、淋巴管，从而促进胰腺癌的侵袭、转移。齐鲁医学杂志2010年8月第25卷第4期 Med J Qilu, August 2010, Vol.25, No.4

　　【参考文献】

　　[1]　SUN J, HEMLER M E. Regulation of MMP1 and MMP2 production through CD147/extracellular matrix metalloprotease inducer interactions [J]. Cancer Res, 2001,61(5):22762281.

　　[2]　JIN J S, HSIEH D S, LIN Y F, et al. Increasing expression of extracellular matrix metalloprotease inducer in renal cell carcinoma: tissue microarray analysis of immunostaining score with clinicopathological parameters[J]. Int J Urol, 2006,13(5):573580.

　　[3]　ZHANG W, ERKAN M, ABIATARI I, et al. Expression of matrix metalloprotease inducer(EMMPRIN/CD147) in panceratic neoplasm and pancreatic stellate cells[J]. Cancer Biol Ther, 2007,6(2):218227.

　　[4]　周晓彬,纪新强,徐莉. PPMS 1.5统计软件的功能及其应用[J]. 青岛大学医学院学报, 2009,45(1):9193.

　　[5]　SIER C F, ZUIDWIJK K, ZIJLMANS H J, et al. EMMPRIN induced MMP2 activation cascade in human cervical squamous cell carcinoma[J]. Int J Cancer, 2006,118(12):29912998.

　　[6]　KANEKURA T, CHEN X, KANZAKI T, et al. Basigin (CD147) is expressed on melanoma cells and induces tumor cell invasion by stimulating production of matrix metallopreteinases by fibreblasts[J]. Int J Cancer, 2002,99(4):520528.

　　[7]　李晓莉,何剪太,葛杰,等. EMMPRIMMP2的表达与大肠癌临床病理学的关系及意义[J]. 第四军医大学学报, 2008,29(14)：13191321.

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