原发性肺癌组织中p16基因的表达及其临床意义
发表时间：2011-03-28 浏览次数：389次
作者：方艳,吴宏培,王小平 作者单位：1.陕西中医学院分子病理研究室，陕西 咸阳 712046;2.核工业部215医院，陕西 咸阳 712000
【摘要】目的：研究原发性肺癌组织中抑癌基因p16的表达及其临床意义。方法：采用SABC免疫组织化学技术检测72例肺癌组织中p16的表达。结果：随着肺癌组织学分级越高、临床分期越高，p16蛋白表达缺失率越高，而与肺癌的发病年龄、性别及组织学分型无相关性。结论：p16蛋白表达与肺癌的组织学分级及临床分期呈负相关，故抑癌基因p16的检测将有助于临床医师评估肺癌的生物学行为和预后,对指导治疗和提高疗效有重要的意义。
【关键词】 肺癌;p16;免疫组化
抑癌基因的缺失和功能丧失在肿瘤发生、发展中起十分重要的作用，p16基因也称多肿瘤抑制基因,是人们发现的第1个直接作用于细胞周期,抑制细胞分裂的抑癌基因，p16基因的任何变异都会导致细胞过度增殖,使G1期未充分发育的细胞提前进入S期,导致癌症发生[1]。研究发现，当其功能丧失时,细胞生长失控导致肿瘤形成,与多种肿瘤的发生发展有密切关系[2]。我们采用SABC免疫组织化学技术检测了72例肺癌组织中p16的表达,并就其意义进行了初步探讨。
1 材料与方法
1.1 材料
来自于5 a内陕西中医学院附属医院及核工业部215医院手术切除原发性肺癌标本72例，年龄42岁～79岁(平均58.2岁)，所有组织标本无溃烂、坏死，均经组织学检查确诊，其中腺癌17例、鳞癌46例、小细胞癌9例;所有病例手术前均未行放疗、化疗。标本经40 ml/L甲醛固定，常规石蜡包埋，5 μm连续切片。鼠抗人p16Ab购自福建迈新生物工程有限公司，生物素化羊抗鼠IgG及SABC试剂盒购自华美生物工程公司。
1.2 方法
p16免疫组织化学染色程序严格参照SABC试剂盒说明书进行;鼠抗人p16Ab、生物素化羊抗鼠IgG及SABC复合物的工作浓度均为1:100，以正常小鼠血清代替一抗为阴性对照。
1.3 阳性结果判定
染色的切片在光镜下观察p16的蛋白表达及分布情况，以出现棕黄色颗粒者为阳性细胞，无可见颗粒或可疑者为阴性。对每张有阳性细胞的切片，在高倍镜下(×400)选择含瘤细胞或癌旁组织细胞的5个视野记数，计算阳性细胞总数的百分率，以阳性率<5%为(-);<10.0%为(+);10.0%～25.0%为(++);>25.0%为(+++)。
1.4 统计学处理
根据数据类型采用χ2检验方差分析,P<0.05表示差异有显著性。
2 结果
肺癌组织经p16免疫组织化学染色后,阳性颗粒呈浅棕色到深褐色, 72例肺癌中p16阳性表达率为55.6% (40/72),主要表达于肿瘤细胞的胞核,呈棕黄色颗粒，部分胞浆也有表达。p16表达与性别、年龄、组织学分型均无关(P>0.05),而与肿瘤的分化程度、大小、淋巴结转移、血道转移和临床分期密切相关(P<0.05),(见表1)。表1 p16表达与临床病理生物学的关系(略)
3 讨论
p16基因又称细胞周期依赖性激酶(CDK)的抑制基因,定位于人染色体9p21,编码由148个氨基酸组成的核结合蛋白, p16蛋白与细胞周期蛋白D1(cyclinD1)竞争,特异性结合CDK4或CDK6而抑制其活性,阻止细胞进人G1/S期,无限制扩增向肿瘤发展和转化,从而达到抑癌作用[3]。p16的突变和缺失广泛存在于人类肿瘤中,且其低表达与肿瘤的病理分级、肿瘤分期及预后有关。王强修等[4]检测了胃癌中p16蛋白的表达,发现p16蛋白在分化程度低的胃癌中呈低表达,随临床分期的增加、淋巴结转移而强度降低,揭示胃癌发生、发展过程中可能有p16基因的变异。王爱梅[4]等检测了子宫内膜癌中p16蛋白的表达,发现肿瘤组织学分级升高, p16蛋白表达缺失率明显升高。本实验结果显示，随着肺癌组织学分级越高、临床分期越高，p16蛋白表达缺失率越高，提示p16蛋白表达与肺癌的组织学分级及临床分期呈负相关;而与肺癌的发病年龄及组织学分型无关。综上所述，抑癌基因p16的检测将有助于临床医师评估肺癌的生物学行为和预后,对指导治疗和提高疗效有重要的意义。
【参考文献】
[1] OHTANI N, YAMAKOSHI K, TAKAHASHI A,et al. The p16INK4a-RB pathway: molecular lin k be-tween cellular senes cence and tumor suppression[J].J Med Invest,2004,51:146-153.
[2] Feakins RM ,Nickols CD,BiddH,et al.Abnormal expression ofpRb,p16, and cyclin D1 in gastric adenocarcinoma and its lym phn odemetastases:relationshipwith pathological features and surviv-al[J].Hum Patho l,2003,34(12):1276-1282.
[3]Serrano M,Hannon GJ,BeachD.A new regulatorymotifcell-cyclecontrol Causing specific inhibition of cyclin D/CDK4[J].Nature,1993,366(6456):704-707.
[4] 王爱梅. 子宫内膜癌p16、p53和C-erbB-2的表达及其临床意义[J].上海交通大学学报(医学版),2007,27(1):993-995.
