XPD基因多态性与非霍奇金淋巴瘤发病风险

　　作者：刘杰，祝敬燕，宋 宝，王哲海，石艳，吕丽燕 作者单位：济南，山东省肿瘤医院肿瘤内科; 2. 潍坊市中医院肿瘤中心;3. 山东大学齐鲁医院血液科

　　【摘要】 目的 探讨核苷酸剪切修复基因(XPD)单核苷酸多态性与非霍奇金淋巴瘤(NHL)发病风险的关系。方法 以309例NHL患者和305例健康对照者为研究对象，采用PCRRFLP技术检测XPD G23591A、A35931C位点的基因多态。结果 初步分析XPD G23591A和A35931C基因多态性与总的NHL无显著相关。对NHL亚类分析显示，在滤泡性淋巴瘤(FL)、弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)、其他B细胞NHL和T细胞NHL中，XPD 23591位点GA+AA型频率分别为16.3%、18.0%、10.5%、18.4%，对照组为12.5%，OR值分别为1.43、1.58、0.89和1.50，差异无统计学意义(P>0.05);XPD35931位点AC+CC型频率分别为15.2%、15.8%、18.4%、12.5%，对照组为11.5%，OR值分别为1.41、1.48、1.75和1.12，差异亦无统计学意义(P>0.05)。结论 山东地区汉族人群XPD G23591A、G23591A位点多态性与非霍奇金淋巴瘤发病无关。

　　【关键词】 非霍奇金淋巴瘤;XPD;多态现象;单核苷酸

　　Relationship between XPD Genetic Polymorphism and Risk of NonHodgkin's Lymphoma

　　LIU Jie1，ZHU Jingyan2, SONG Bao1, WANG Zhehai1, SHI Yan3 ,LV Liyan1

　　1. Medical Oncology, Shandong Tumor Hospital, Ji′nan 250117，China; 2. Medical Oncology, Weifang Hospital of Traditional Chinese Medicine;3.Department of Hemotology, Qilu Hospital,Shandong UniversityAbstract：Objective To explore the relationship between the single nucleotide polymorphisms of XPD (G23591A、A35931C) and individual susceptibility to nonHodgkin’s lymphoma(NHL).Methods XPD G23591A and A35931C genotypes in 309 NHL cases and 305 healthy controls were detected using PCRrestriction fragment length polymorphism assay.Results No significant association between the G23591A, A35931C polymorphisms and the risk of whole NHL was shown. NHL cases were subsetted into four groups: follicular lymphoma group, diffuse large Bcell lymphoma group, Tcell lymphoma group and other Bcell lymphoma group. XPD 23591GA+AA frequencies were 16.3%, 18.0%, 10.5% and 18.4% in each group, while 12.5% in controls, the ORs were 1.43, 1.58, 0.89 and 1.50, respectively. But no statistically significant difference was shown(P>0.05); XPD 35931AC+CC frequencies were 15.2%, 15.8%, 18.4% and 12.5% in each group, while 11.5% in controls, the ORs were 1.41, 1.48, 1.75 and 1.12, respectively. But no statistically significant difference was shown (P>0.05).Conclusion The XPD genotypes may do not contribute to the risk of developing NHL in shandong area populations.

　　Key words：NonHodgkin lymphomas; Xeroderma pigmenting group D (XPD); Polymorphism; Single nucleotide

　　非霍奇金淋巴瘤是一种常见的血液系统恶性肿瘤，近几年来发病率呈上升趋势。病毒感染、大剂量辐射、接触氯酚、农药、服用免疫抑制剂等是其致病因素[1]，然而机体内在遗传因素也在其发病中起了一定作用。研究表明机体内DNA修复酶类可以防御致癌物的侵袭，个体DNA修复功能低下者罹患肿瘤危险性增加。XPD是DNA修复系统的重要成员，国内外有报道该基因多态与肺癌、皮肤癌等多种肿瘤相关[2, 3]，但有关该基因多态与非霍杰金淋巴瘤(NHL)的研究报道较少。我们以病例对照方法，采用限制性片段长度多态分析，初步探讨山东地区汉族人群XPD基因多态分布及其与NHL患病风险的关系。1 资料和方法

　　1.1 临床资料

　　2002年7月～2005年6月在山东省肿瘤医院、山东大学齐鲁医院住院治疗的NHL患者309例，其中男性173例、女性136例，均为汉族。按照淋巴组织肿瘤WHO新分类标准(2001)对所有病例进行分类。其中弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)139例，滤泡性淋巴瘤(FL)92例，小淋巴细胞淋巴瘤15例，套淋巴细胞淋巴瘤10例，淋巴浆细胞淋巴瘤11例，周围T细胞淋巴瘤16例，间变性大细胞淋巴瘤12例，其余类型共计14例。对照组305例由同期在上述医院查体中体检健康者组成，与NHL患者的年龄、性别分布差异无统计学意义，均为汉族。所有研究对象均知情同意和自愿参加。

　　1.2 实验方法

　　1.2.1 外周血基因组DNA的提取

　　两组均取外周静脉血1ml，EDTA抗凝，应用Omega公司血标本DNA提取试剂盒按照操作步骤提取DNA。于-20℃冰箱中保存。

　　1.2.2 PCRRFLP检测

　　引物参照文献[4]由上海生工合成，XPD G23591A位点的引物为，上游5′CTGTTGGTGG GTGCCCGTATCTGTTGGTCT3′，下游5′TAATATCGGGGCTCACCCTGCAGCACTTCCT3′,产物大小751 bp;XPD A35931C位点的引物为，上游5′GCCCGCTCTGGATTATACG3′，下游5′CTATCATCTCCTGGCCCCC3′,产物大小436 bp。PCR条件为94℃ 5 min;95℃ 30 s、60℃ 30 s(XPD G23591A)或61℃ 45 s(XPD G35931A)、72℃ 5 min 35个循环;72℃ 10 min。取5 μl PCR产物加入含5 u限制性内切酶的20 μl酶切反应体系中,37 ℃消化8 h , 3%琼脂糖凝胶电泳检测结果。应用StyⅠ酶切G23591A位点，产生507和244 bp 2个片段的为GG型;产生474、244和33 bp 3个片段的为AA型;产生507、474、244和33 bp 4个片段的为GA型。应用PstⅠ酶切A35931C位点，产生290和146 bp 2个片段的为AA型;产生227、146和63 bp 3个片段的为CC型;产生290、227、146和63 bp 4个片段的为AC型。

　　1.2.3 统计学方法

　　分别计算NHL组和对照组XPD基因位点各基因型发生频数，以χ2 检验确定各基因型频率在病例组和对照组间差异的统计学意义。采用比值比(OR值)及95%可信区间(95%CI)估计相对危险度。所有统计分析应用SPSS10.0软件完成。

　　2 结果

　　2.1 XPD基因G23591A、A35931C位点PCRRFLP电泳图谱，见图1。

　　2.2 XPD基因型分布与NHL发病风险的关系

　　经检验病例组与对照组人群XPD多态位点的基因型分布频率符合HardyWeinberg平衡定律，确定两组样本具有群体代表性。XPD G23591A位点GG、GA、AA基因型频率在对照组与NHL组中分别为87.5%、11.5%、1.0%和83.4%、15.3%、1.3%，GA、AA型者发生NHL的危险度(OR值)分别为1.430(95%CI：0.891～2.295)、1.429(95%CI：0.316～6.468),差异无统计学意义(P>0.05)。XPD A35931C位点AC、CC基因型频率在对照组与NHL组中分别为88.5%、10.5%、1.0%和84.5%、13.9%、1.6%。AC、CC型者发生NHL的危险度分别为1.402(95%CI：0.860～2.288)和1.795(95%CI：0.423～7.608),差异无统计学意义(P>0.05)，见表1。表1 XPD 23591,35931位点基因型在病例组与对照组中频率分布

　　*OR经性别年龄调整 XPD G23591A:有2例对照和2例病例未扩增出2.3 XPD基因型分布与各种类型NHL发病风险的关系

　　进一步将NHL分为滤泡性淋巴瘤(FL)、弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)、T细胞NHL和其他B细胞类型NHL四大类，在NHL亚组中，XPD 23591位点GA+AA型频率分别为16.3%、18.0%、10.5%、18.4%，对照组为12.5%，GA+AA表2 XPD 23591,35931位点基因型在不同类型NHL组与对照组中频率分布*OR值经性别年龄校正型者患各类NHL风险分别约为1.43、1.58、0.89和1.50倍，各病例组与对照组间差异无统计学意义(P>0.05);XPD35931位点AC+CC型频率分别为15.2%、15.8%、18.4%、12.5%,对照组为11.5%，AC+CC基因型者患病风险分别为1.41、1.48、1.75和1.12倍,差异无统计学意义(P>0.05)，见表2。

　　3 讨论

　　XPD位于19号染色体长臂, 编码依赖ATP的5′3′DNA解旋酶,是Ⅱ型转录因子H(TFⅡH)复合体的重要组成部分，参与核苷酸切除修复，并可识别和修复大范围DNA损伤，如大的加合物和胸腺嘧啶二聚体等[4]。XPD基因G23591A和A35913C位点基因多态可能导致相应的氨基酸改变，引起个体DNA修复能力的差异，并可能在某些肿瘤发病中起一定作用。Hu等[2]对3 725名肺癌meta分析显示23591AA和(或)35913CC基因型者肺癌危险性增加;Tomescu等[3]报道35913A等位基因者色素瘤发病率增加;邢德印等[5]报道XPD 23591A等位基因型且重度吸烟者罹患肺鳞癌危险性增加, 但并未增加食管癌发病风险。本研究以309例NHL患者和305例健康对照者为研究对象，分析了XPD23591、35913位点基因多态性与NHL发病的关系。初步分析显示XPD基因多态与总的NHL发病无明显相关。NHL是一类高度异质性肿瘤，按照WHO标准划分为几十种不同亚型，FL和DLBCL分别占30%和45%左右。我们进一步将NHL分为四大亚类：FL组、DLBCL组、其他B细胞NHL组和T细胞NHL组，经分析显示，XPD各基因型分布频率在NHL亚类和对照组之间差异无统计学意义。本研究结果表明XPD基因多态性没有在非霍奇金淋巴瘤癌变过程中发挥作用。

　　本研究还显示山东地区汉族人群中XPD 23591A、35913C等位基因频率分别为6.25%和5.75%，与Yu等[6]报道中国人群、Park等[7]报道韩国人群研究结果相似，但与欧洲及北美白种人群(约50%)差别较大[3,8]，说明不同地域和人种存在遗传差异。我们推测由于中国人群XPD多态发生率较低，对该基因功能影响较小，因此在非霍奇金淋巴瘤发病中没有起到主导地位。然而，我们不排除其他DNA修复基因如XRCC1、XRCC3、XPA、XPC、XPE、XPF等在非霍奇金淋巴瘤发病中起作用。

　　【参考文献】

　　[1] Mills PK, Yang R, Riordan D. Lymphohematopoietic cancers in the United Farm Workers of America (UFW)，19982001[J].Cancer Causes Control, 2005,16(7):823830.

　　[2] Hu Z, Wei Q, Wang X, et al. DNA repair gene XPD polymorphism and lung cancer risk: a metaanalysis[J].Lung Cancer, 2004, 46(1):110.

　　[3] Tomescu D, Kavanagh G, Ha T, et al. Nucleotide excision repair gene XPD polymorphisms and genetic predisposition to melanoma[J].Carcinogenesis, 2001,22(3):403408.

　　[4] Lunn RM, Helzlsouer KJ, Parshad R,et al. XPD polymorphisms: effects on DNA repair proficiency[J].Carcinogenesis, 2000,21(4):551555.

　　[5] 邢德印，齐军，谭文，等.北京地区汉族人群DNA修复基因XPD单核苷酸多态性与肺癌及食管癌风险的研究[J].中华医学遗传学杂志,2003,20(1):3538.

　　[6] Yu HP, Wang XL, Sun X,et al. Polymorphisms in the DNA repair gene XPD and susceptibility to esophageal squamous cell carcinoma[J].Cancer Genet Cytogenet, 2004, 154(1):1015.

　　[7] Park JY, Lee SY, Jeon HS, et al. Lys751Gln polymorphism in the DNA repair gene XPD and risk of primary lung cancer[J]. Lung Cancer, 2002, 36(1):1516.

　　[8] Spitz MR, Wu X, Wang Y, et al. Modulation of nucleotide excision repair capacity by XPD polymorphisms in lung cancer patients [J]. Cancer Res， 2001, 61(4):13541357.