乙型肝炎病毒前S2抗原、核心抗体IgM与其五项指标联合检测的意义

作者：郝繁运作者单位：宁阳中医院检验科，山东 宁阳 271400  【摘要】  目的 探讨乙肝病毒前S2抗原（PreS2Ag）、乙肝病毒核心抗体IgM（HBcAbIgM）与乙肝五项指标联合检测的临床意义。方法 采用ELISA法对618例标本进行乙肝五项指标和PreS2Ag及HBcAbIgM检测。结果 乙肝五项指标中HBeAg阳性率最低（3.56％），HBsAg阳性率较高（8.25％），HBcAb阳性率最高（43.37％）。PreS2Ag的阳性率（6.63％）高于HBeAg而低于HBsAg。在HBsAg阳性组中，PreS2Ag阳性率为80.39％，HBsAg阴性组中无1例PreS2Ag阳性。PreS2Ag在“大三阳”组中阳性率为90.91%（10/11），在“小三阳”组中阳性率为95.23%（20/21），在“双阳”组（HBsAg、HBcAb阳性）中阳性率为58.33%（7/12）。HBcAbIgM的阳性率较低（0.49％）。结论 PreS2Ag比HBeAg更敏感地反映了病毒的复制情况，PreS2Ag、HBcAbIgM与乙肝五项指标联合检测并利用s/co值能更好地对HBV感染者进行临床分析。 【关键词】  肝炎病毒,乙型;前S2抗原;病毒核心蛋白质类;实验室技术和方法　　COMBINED DETECTION OF HEPATITIS B VIRUS PreS2Ag, HBcAbIgM AND HEPATITIS B VIRUS FIVE MARKING　　SHAO FANYUN　　(Ningyang Hospital of Traditional Chinese Medicine,  Ningyang 271400, China);　　［ABSTRACT］ObjectiveTo evaluate the clinical significance of combined detection of PreS2Ag, HBcAbIgM and “hepatitis B virus five markings” (HBVFMs).MethodsHBVFMs, PreS2Ag and HBcAbIgM were detected in 618 samples by ELISA.ResultsIn HBVFMs, the positive rate of HBeAg was the lowest (3.56%), HBsAg was higher (8.25%), and the highest was HBcAb (43.37%). The positive PreS2Ag (6.63%) was higher than HBeAg (3.56%), but lower than HBsAg (8.25%). In HBsAgpositive group, the positive PreS2Ag was 80.39%, but, no PreS2Agpositive case was found in HBsAgnegative group. The positive PreS2Ag was 90.91% (10/11) in “big threepositive” group, and 95.23% (20/21) in “small threepositive” group, and 58.33% (7/12) in HBsAg and HBcAb  positive group. The positive HBcAbIgM was the lowest (0.49%).ConclusionPreS2Ag is more sensitive than HBeAg in reflecting the replication of viruses. Combined detection of PreS2Ag, HBcAbIgM with HBVFMs and applying the parameters of s/co can, clinically, better analyze HBV infection.    ［KEY WORDS］Hepatitis B virus; PreS2Ag; Viral core proteins; Laboratory techniques and procedures    文献报道，乙型肝炎（乙肝）病毒前S2抗原（PreS2Ag）与乙肝DNA有很好的相关性，可以作为判断乙肝病毒复制的良好指标，乙肝病毒核心抗体IgM（HBcAbIgM）是已被公认的乙肝病毒新近感染或复制活动的金指标[1～3]。因此，若将PreS2Ag、HBcAbIgM与乙肝五项指标组成“乙肝七项指标”进行联合检测，可更好地了解乙肝病人免疫状态和病毒复制的活跃程度，特别对传统的乙肝五项“小三阳”模式、少见模式以及其他仅凭乙肝五项指标难以解释和判断的情况，都可以结合PreS2Ag、HBcAbIgM进行更为全面的解释。现报告如下。　　1  资料与方法　　1.1  标本来源    我院门诊体检者和就诊病人618例，男328例，女290例，年龄18～65岁。　　1.2  试剂和仪器    乙肝病毒血清学指标HBsAg、HBsAb、HBeAg、HBeAb、HBcAb、 HBcAbIgM的ELISA试剂由上海荣盛科技有限公司提供；PreS2Ag的ELISA试剂由北京大学人民医院肝病研究所提供。采用美国雷杜RT 2100C酶标仪及RT 2600C洗板机。

　1.3  检测方法

    仪器经过校正，整个过程严格进行室内质量控制。HBsAg、HBsAb、HBeAg、HBeAb、HBcAb、 HBcAbIgM、PreS2Ag测定根据试剂盒说明书进行，采用洗板机洗板、酶标仪比色。

　　2  结果

    乙肝五项指标中HBeAg阳性率最低（3.56％），HBsAg阳性率较高（8.25％），HBcAb阳性率最高（43.37％）。PreS2Ag的阳性率（6.63％）高于HBeAg而低于HBsAg。在HBsAg阳性组中，PreS2Ag阳性率为80.39％，在HBsAg阴性组中无1例PreS2Ag阳性者。PreS2Ag在“大三阳”组中阳性率为 90.91%（10/11），在“小三阳”组中阳性率为95.23%（20/21），在“双阳”组（HBsAg、HBcAb阳性）中阳性率为58.33%（7/12）。HBcAbIgM的阳性率较低（0.49％）。618例被检测者有269例为全阴性，349例为HBV阳性模式,HBcAbIgM、PreS2Ag在乙肝五项阳性模式中的分布情况见表1。表1  HBcAbIgM、PreS2Ag在乙肝五项阳性模式中的分布(略)

　　3  讨论

    本文结果显示，传统的“五项指标”中HBeAg阳性率最低，HBsAg阳性率较高，而HBcAb的阳性率最高；PreS2Ag的阳性率高于HBeAg而低于HBsAg。在HBsAg阳性组中，PreS2Ag的阳性率为80.39％，说明PreS2Ag与HBsAg有伴随关系，检测PreS2Ag同样有助于HBV感染的诊断。而在HBsAg阴性组中无1例PreS2Ag阳性，可能扩大检测对象会有所发现。北京大学人民医院肝病研究所的研究认为，HBsAg与PreS1Ag都存在基因突变而导致HBsAg与PreS1Ag检测的漏检，而PreS2Ag则可作为HBV感染的指标弥补HBsAg与PreS1Ag检测的漏检造成的缺陷。本实验中HBeAg与PreS2Ag存在个别的交叉阴阳性反应，HBeAg阳性者有1例PreS2Ag阴性，而HBeAg弱阳性者PreS2Ag全部阴性，但总体看PreS2Ag检出率明显高于HBeAg的检出率，所以二者不能互相代替。这可能是由于乙肝病毒前C区G1896A突变会产生1个终止密码，从而阻止HBeAg合成，因而在血清中检测不到，表现为HBeAg阴性乙肝[4,5]。因此，提示以HBeAg转阴作为疾病好转的指标有时并不准确，PreS2Ag检测可以弥补HBeAg/Ab系统缺失造成的漏检[6]。作为病毒复制标志，PreS2Ag优于HBeAg，这与许多文献报道一致[1～3]。本实验结果中HBcAbIgM的阳性率较低（0.49％），可能的原因有：①在该人群中新近感染率较低，HBsAg阳性率为8.25％，有35.4%的人产生了保护性抗体HBsAb；②许多HBV新近感染者无自觉症状或症状不明显，忽视了及时就诊检测而不能早期发现；③与IgM类球蛋白在血清中存留周期较短有关。

    乙肝五项结合s/co值、PreS2Ag、HBcAbIgM进行临床分析具有重要价值。由于对一些少见（罕见）模式的解释一般持谨慎态度，许多人认为少见模式的出现，应从仪器、试剂、操作、标本采集等诸多方面查找原因。ELISA方法学的灵敏度为1 μg/L，市场可供试剂多为一步法试剂，因此ELISA的灵敏度和试剂的缺陷可能是少见模式出现的一个重要原因。PreS2Ag、HBcAbIgM试剂为ELISA二步法，因此其结果即使出现弱阳性，也有较大的参考价值[7,8]。作者认为，将PreS2Ag、HBcAbIgM与乙肝五项指标进行联合检测，不仅可排除某些不合理的甚至错误的少见模式结果，而且也证明了某些少见模式的客观存在，并为其合理解释提供了有力佐证。本研究共出现14例少见模式，约占2.3%（14/618），对少见模式采用同一种试剂由一步法改为二步法重复试验，最后有9例为少见模式，约占1.5%（9/618）。4例HBeAg单项阳性者（s/co值分别为1.071、2.027、2.681、7.328)，s/co值较低，二步法重复试验仅1例为阳性（s/co值7.328），其HBcAbIgM也为阳性（s/co值1.849），进一步表明有近期感染的迹象。

    在乙肝五项的几种少见模式一般弱阳性多见，有的产生了保护性抗体，但一般是低水平的。许多虽然表现为阴性，但根据抗原抗体的s/co值也可看出有低滴度抗原抗体产生的迹象。所以作者认为，采用ELISA法对乙肝五项进行检验所出具的报告，不但要报告阴阳性结果，也应该同时报告抗原抗体的s/co值，使有限的检验资源能够最大限度地转化为临床有价值的诊疗参考信息。需要强调的是，对于少见模式的检测结果，一定要进行复检，最好重新采血后进行复检核对，可以结合HBV DNA、肝功能及临床症状进行全面的动态分析；另一方面，由于ELISA实验条件控制不佳引起本底值偏高时，不适合 s/co值的临床分析。

  　　从方法学角度看，采用PCR技术检测HBV DNA是理论上乙肝检测的“金标准”，但其对实验要求如实验室布局、人员技术要求较高，临床应用并不理想。2000年全国HBV DNA PCR室间质评结果显示，在所有91家实验室中，仅有28家(30.8％)测定结果全部正确[9]。2005年山东省临床检验中心公布的全省PCR室间质评的45个实验室，24个实验室PT<80，不合格者高达53.2％（24/45）。因而，把HBV DNA作为常规检验项目还有很长的路要走。另一方面，ELISA法被公认为诊断乙肝的准确特异的方法之一虽然有其缺点，但的确也偶有报道乙肝五项“大三阳”而DNA阴性者，说明乙肝病毒感染相关指标都有各自的意义，并不能相互替代。PreS2Ag、HBcAbIgM与乙肝五项指标联合组成的“乙肝七项指标”，采用技术上已经非常成熟的ELISA法检测，成本低廉，并可以借助s/co值对抗原抗体滴度进行综合分析，能够被广大的临床实验室和病人接受，应该能有更好的发展前景。但各实验室应搞好室内质控和室间质评，试剂厂商要不断提高试剂质量以满足临床需要[9，10]。

【参考文献】  　　[1]乐爱平,万腊根,郭萌萌,等. 乙型肝炎病毒前S2抗原抗体系统检测的临床意义[J]. 江西医学检验, 2003,21（5）:323326.

　　[2]鞠北华,张经宇,郭萌萌,等. HBV PreS1Ag、PreS2Ag、PreS2Ab联合检测的临床意义[J]. 江西医学检验, 2003,21（5）:380381,374.[3]周海洋. 338例慢性肝病病人HBV PreS1Ag、PreS2Ag及PreS2Ab与其血清标志物的相关性研究[J]. 现代检验医学杂志, 2005,20(1):4345.

　　[4]POLLICINO T, ZANETTI A R, CACCIOLA I, et al. PreS2 defective hepatitis B virus infection in patients with fulminant hepatitis[J]. Hepatology, 2003,26(2):495499.

　　[5]TONG S P, KIM K H, CHANTE C, et al. Hepatitis B virus e antigen variants[J]. International Journal of Medical Sciences, 2005，2(1):27.

　　[6]STUYVER L J, LOCARNINI S A, LOK A, et al. Nomenclature for antiviralresistant human hepatitis B virus mutations in the polymerase region[J]. Hepatology, 2001,33:751757.

　　[7]雷国林,黄清流. 两种方法检测HBeAg结果的分析[J]. 江西医学检验, 2007,25（1）:96.

　　[8]李丹玲. 酶联免疫吸附实验中两种检测方法的比较[J]. 北京医学, 2006,28（11）:661.

　　[9]李金明,王露楠,邓巍,等. 乙型肝炎病毒DNA聚合酶链反应测定的全国室间质量评价[J]. 中华医学杂志, 2000,80（2）:116117.

　　[10]郝繁运. 酶免疫分析技术进展与自动化[J]. 中国误诊学杂志, 2007,7（1）:2326.