诱导型一氧化氮合酶对进展期胃腺癌凋亡、增殖的影响

作者：吴敏    作者单位：200336上海市长宁区中心医院肿瘤科,2.病理科 【关键词】  诱导型一氧化氮合酶 胃腺癌 进展期 凋亡 增殖    一氧化氮（NO）在肿瘤的发生、发展及转移方面的作用是目前国内外研究的热点之一。诱导型一氧化氮合酶（iNOS）是内源性一氧化氮合成的关键酶。我们通过免疫组化法检测胃腺癌细胞iNOS、细胞增殖核抗原(Ki67LI)，用原位末端标记技术TUNEL法检测凋亡比例（AI），对iNOS、Ki67LI、AI与胃腺癌病理学特性，以及iNOS与Ki67LI、AI之间的相互关系和预后进行了探讨,分析了iNOS在胃癌发展中的作用。

    1  资料与方法

    1.1  资料

    2000～2002年在我院肿瘤科行根治性胃癌切除术进展期患者58例。年龄在28～83岁，其中男42例，女16例。术前均未接受放化疗、免疫治疗，影像学检查未发现其他脏器转移。病理诊断均为胃腺癌。术后行5氟尿嘧啶、丝裂霉素、表阿霉素静脉或介入化疗6～8周期。随访率86.2%。其中2例死于心脑疾病,生存统计按48例计算。iNOS、Ki67表达采用SP法染色。TUNEL法检测胃癌细胞凋亡。PBS代替一抗作为空白对照。

    1.2  结果判定

    iNOS阳性细胞为细胞浆或细胞膜呈棕黄色或棕褐色者，根据染色强度和阳性细胞数量两项分数相加[1]：0～2分（）；3～6分（+）。Ki67阳性细胞为细胞核染成颗粒样或片状棕黄色者。凋亡癌细胞为细胞核呈黄色深染或有明显凋亡形态学改变的细胞。每个标本在同一放大倍数下（×400）随机检测10个纤维视野。分别计数Ki67阳性细胞及凋亡癌细胞在全部细胞中所占比例。

    1.3 统计学处理

    SPSS11.5 for windows 软件包行统计学分析。

    2  结果

    2.1  iNOS表达、AI、Ki67LI特点

    iNOS阳性表达率为55.2%（32/58），凋亡指数范围0.1%～5%，平均为（1.63±1.11）％，Ki67LI范围为5%～98%，平均为（66.78±32.82）%。

    2.2  iNOS阳性表达、AI、Ki67LI与胃癌临床病理指标关系

    iNOS阳性表达与年龄、性别、肿瘤分化程度、淋巴结转移、肿瘤浸润深度、TNM分期、血管浸润、淋巴管浸润、神经浸润无关（P＞0.05）。无血管浸润组AI(1.900±1.287)明显高于有血管浸润组AI(1.629±1.185，P=0.039)；无血管浸润组Ki67LI(58.33±33.74)明显高于有血管浸润组Ki67LI(75.38±32.85，P=0.024)。AI、Ki67LI在有无神经浸润方面差异无统计学意义（P＞0.05）。

    2.3  iNOS表达与AI、Ki67LI关系

    iNOS阳性表达者AI（1.375±0.973）低于INOS阴性表达者AI（2.058±1.479，P=0.039），iNOS阳性表达者Ki67LI（75.47±27.602）高于INOS阴性表达者Ki67LI（58.00±34.693，P=0.042）。

    2.4  iNOS表达、AI、Ki67LI与预后的关系

    生存≥3年者iNOS阳性表达率为33.3%（9/27），生存＜3年者iNOS阳性表达率为66.6%（14/21，P=0.022）。生存≥3年者AI均值（2.057±1.334）明显高于生存＜3年者AI均值（1.25±0.953，P=0.032）。生存时间与Ki67LI无明显相关性。

    3  讨论

    许多肿瘤组织中NOS的表达增加，提示NOS的异常表达以及NOS的生成可能与这些肿瘤的发生发展有关[2]。胃癌细胞表达iNOSmRNA，提示胃癌细胞本身能产生一氧化氮，并以其作为一种原始的防御机制来对抗机体清除作用[3]。NO在VEGF促血管内皮细胞增殖和迁移中起重要作用[4]。iNOS参与肿瘤发生发展的确切机制不十分清楚，目前认为可能与下列因素有关：细胞增殖/凋亡失衡，肿瘤新生血管形成，抑制机体对肿瘤细胞的免疫作用等[5]。本实验的研究结果显示，胃腺癌组织中iNOS阳性表达与年龄、性别、肿瘤分化程度、淋巴结转移、肿瘤浸润深度、TNM分期、血管浸润、淋巴管浸润、神经浸润无明显相关，而与凋亡、增殖关系密切。iNOS阳性表达者其增殖指数高于阴性表达者（P＝0.039），凋亡指数低于阴性表达者（P＝0.042）。王广义等研究提示[6]，在胃癌组织中血管内皮生长因子（VEGF）与iNOS表达具有明显相关性，说明iNOS在VEGF的生成和发挥作用中起重要作用；PCNALI随着VEGF和iNOS表达的增加而增加，两者对胃癌细胞增殖有促进作用。顾建华等报道[7]，应用诱导型一氧化氮合酶抑制剂可抑制iNOS活性从而减少血浆中NO的生成，阻断NO促进肿瘤生长和细胞增殖活性，同时也负向调节了NO促凋亡作用。很多因素影响胃癌预后，iNOS可能是影响胃癌预后因素之一。iNOS、血管内皮生长因子阳性表达增强，微血管密度值增加，与胃癌TNM分期，淋巴结转移及预后关系密切 [1、8]。本实验结果显示，无血管浸润者AI明显高于有血管浸润者（P＝0.039），Ki67LI低于有血管浸润者（P＝0.024）。在患者3年生存率中，生存大于等于3年者iNOS阳性表达率明显低于生存小于3年者（P=0.022）。生存大于等于3年者AI均值明显高于生存小于3年者AI均值（P=0.032）。生存时间与Ki67LI未发现明显相关性。本研究结果提示，iNOS可能通过调节凋亡增殖参与胃癌发展并影响预后。选择合适的iNOS抑制剂，可能为胃癌患者提供新的治疗点。

【参考文献】  ［1］ 陶文惠，邓长生，朱尤庆.一氧化氮合酶和微血管生成与胃癌发展的关系.中华消化杂志[J]，2004，24（1）:1113.

[2] Ambs S，Merriam WG，Bennelt WP,et al.Frequent nitric oxide synthase2 expression in human colon adenomas：implication for tumor angiogenesis and colon cancer progression[J].Cancer Res,1998，58（2）：334341.

[3] 邹益友，冯德云，伍赶球，等.一氧化氮合酶mRNA在胃癌细胞内的表达[J].中华消化杂志，1999，19（3）:213214.

[4] Chavakis E，Dernbach E，Hermann C，et al.Oxidized LDL inhibits vascular endothelial growth factorinduced endothelial cell migration by an inhibitory effect on the Akt/endothelial nitric oxied synthase pathway[J].Circulation,2001,103(16):2102.

[5] Krocke KD,Fehsel K,KoldBachofen V.Inducible nitric oxide synthase in human disease[J].Clin Exp Immunol，1998，113（2）：147156.

[6] 王广义，王旭.胃癌组织NOS和VEGF表达与癌细胞增殖相关性的研究[J].外科理论与实践，2003，8（1）:4446.

[7] 顾建华，王广义，孟宪瑛，等.诱导型一氧化氮合酶抑制剂对胃癌MFC细胞增殖与凋亡的影响[J].中华胃肠外科杂志，2004，7（6）:496498.

[8] 任小龙，张明立，朱任之.胃癌组织iNOS，VEGFmRNA表达与肿瘤血管形成有关[J].第四军医大学学报，2003，24（10）:895.