P504s、P63和Ck34βE12联合检测在前列腺腺癌鉴别诊断中的应用价值

作者：贺海燕，李晶，张淼，孙琪    作者单位：宁夏回族自治区人民医院病理科，银川 750021

【摘要】  　　目的 探讨P504s、P63和Ck34βE12联合免疫组化染色在前列腺良、恶性病变鉴别诊断中的价值。方法 采用免疫组织化学方法观察P504s、P63、Ck34βE12和PSA在82例不同前列腺疾病中的表达情况。结果 在18例前列腺腺癌中P63、Ck34βE12染色均(-)，17例P504s呈(+)；良性前列腺增生及低度前列腺上皮内瘤(PIN)的腺泡和导管周围可见连续的P63和Ck34βE12(+)，少数呈间断表达，但P504s染色皆呈(-)；PIN，P63和Ck34βE12染色基底细胞呈不连续表达或(-)；而增生的腺上皮，部分细胞P504s呈弱(+)；非典型腺瘤性增生P63和Ck34βE12呈(+)，P504s呈(-)。PSA在所有病例中均强阳性表达。结论 P504s对判断前列腺腺癌具有重要参考价值；P504s、P63和Ck34βE12联合检测可提高前列腺癌诊断的正确率；PSA对前列腺组织有极高的敏感性，但在良、恶性病变鉴别诊断中意义不大。

【关键词】  前列腺腺癌 免疫组化 诊断 P504s P63 Ck34βE12

　　Application of P504s，P63 and Ck34βE12 in Diagnosis of Prostate Cancer

　　(Dept. of Pathology，Ningxia People's Hospital，Yinchuan 750021)

　　Abstract：Objective  To explore the value of the expression of P504s、P63、Ck34βE12 and PSA immunohistochemical staining in diagnosis of benign and malignant lesions of the prostate. Methods  Expression of P504s、P63 、Ck34βE12 and PSA in benign and malignant lesions of prostate was detected by immunohistochemical method. Results  P504s staining was positive in 17 out of 18 prostatic carcinoma cases，but P63 and Ck34βE12 was negative. Continuous positive expression of P63 and Ck34βE12 was found in the acini and duets of most benign prostatic hyperplasia and low prostate intraepithelial neoplasia(PIN)，and few cases showed interrupted expression，but P504s staining presented negative reaction. Interupted expression or negative reaction for P6 and 和Ck34βE12was found in PIN cases and low positive reaction for P504s were found in part of hyperplastic glandular epithelia . Atypical adenomatous hyperplasia was positive for P63 and Ck34βE12，but negative for P504s. PSA staining was positive in all cases of benign and malignant lesions. Conclusion  P504s is a useful marker for microscopic diagnosis of prostatic adenocarcinoma and immunohistochemistry study using a combination of P504s and P63/Ck34βE12 may be of greater benefit in aiding the differential diagnosis.

　　Key words：prostatic neoplasms；immunohistochemistry；diagnosis；P504s；P63；Ck34βE12

　　前列腺疾病是临床极为常见的老年男性疾病。随着人均寿命的延长、膳食结构的改变，前列腺腺癌的发病率逐年上升。但在临床病理诊断中，前列腺良恶性病变的鉴别有一定难题，尤其是微灶性高分化前列腺腺癌易漏诊，迄今尚无特异性标记物识别前列腺腺癌。2000年，Xu等［1］从前列腺腺癌组织中分离出α-甲酰基辅酶A消旋酶(α-methylacylCOA racemase，P504s)，2001年，Tiang等［2］首先将P504s的抗体用于前列腺腺癌的免疫组化诊断，并提出P504s是前列腺腺癌高度敏感和特异性的阳性标记物。近年来国内学者利用P504s与基底细胞特异性标记物(P63或Ck34βE12)联合检测应用于前列腺腺癌的诊断［8］。本文观察了P504s、P63蛋白、高分子量细胞角蛋白(Ck34βE12)、前列腺特异性抗原(PSA)在前列腺腺癌及良恶性病变中的表达，旨在评价其在前列腺腺癌的诊断和鉴别诊断中的价值。

1  材料与方法

　　1.1  材料

　　收集宁夏回族自治区人民医院2006年5月—2007年9月经尿道前列腺切除标本82例，其中前列腺腺癌18例，良性前列腺增生(BPH)56例，轻度前列腺上皮内瘤(PIN)2例，基底细胞增生4例；前列腺非典型腺瘤性增生(AAH)2例；年龄52～88岁，平均71岁。

　　1.2  方法

　　上述标本均为10％中性甲醛固定、石蜡包埋后切片。免疫组化染色采用S-P法。P504s、P63、Ck34βE1、PSA单抗及S-P试剂盒购自北京中彬金桥生物技术有限公司，所有抗体均为工作液。石蜡切片常规脱蜡至水后置抗体修复液中行高温、高压抗原修复，详细步骤按操作说明进行，每批染色设置阳性对照，阴性对照用PBS替代一抗，DAB显色，苏木精复染。

　　1.3  结果判断

　　按照WHO的标准进行前列腺腺癌诊断并做Gleason分级［3］。按细胞学分类分为亮细胞型和暗细胞型。免疫组化染色P504s、PSA、Ck34βE12以胞质/膜出现棕黄色颗粒为阳性，P63以细胞核出现棕黄色颗粒为阳性。依阳性细胞所占比例不同将染色结果分为阴性(-)；1+(＜10%)；2+(10％～50％)；3+(＞50％)。

　　2  结果

　　2.1  P504s、PSA在前列腺腺癌及良性增生性病变中的表达(表1)表1  P504s、PSA在前列腺腺癌及良恶性病变中的表达（略）

　　18例前列腺腺癌中，17例表达P504s(94.4％)，阳性信号位于胞质和胞膜(图1，见封4)，其中(3+)为15例(88％)，(2+)2例(11.1%)，(1+)0例，(-)1例(5.6%)，P504s表达强度与Gleason分级的关系详见表2。χ2检验P504s的阳性表达率与前列腺腺癌Gleason分级的关系没有统计学意义(P＞0.05)。癌组织呈腺管状、实性片状或呈团状排列、或在间质内及肌束内浸润。PSA在前列腺腺癌及良性增生性病例中均呈阳性表达(100％)，阳性部位位于细胞质/膜，其表达强度均为3+(图2.3，见封4)。表2  前列腺腺癌组织中P504s的表达与Gleason分级的关系(略)

　　2.2  P63和Ck34βE12在前列腺腺癌及其类似病变中的表达

　　18例前列腺腺癌组织中未见P63、Ck34βE12的表达。2例PIN和AAH中均有P63、Ck34βE12在腺泡周边基底细胞层呈连续或不连续阳性表达。前列腺腺泡基底细胞增生中，P63、Ck34βE12显示腺泡周边基底细胞呈复层化增生。BPH腺泡周边基底细胞层均见P63及Ck34βE12表达(图4，见封4)，P63阳性定位于细胞核，而Ck34βE12阳性定位于细胞质。

　　3  讨论

　　3.1  前列腺腺癌的病理形态学诊断标准为组织结构的改变，浸润性生长方式及细胞的异型性，其中出现大核仁是诊断前列腺腺癌最重要的指标［3］。但有些腺癌组织结构的改变及细胞的异型性并不明显，经常需要和其它相似病变鉴别。目前公认血清PSA＞10μg/mL高度怀疑患者有前列腺腺癌，然而PSA是一个组织特异性而非肿瘤特异性标记物。P504s是前列腺上皮胞质内一种具有382个氨基酸的蛋白质，在支链脂肪酸的β-氧化和衍生过程中起作用。2001年，Tiang等［2］首次将P504s的抗体用于前列腺的免疫组织化学诊断，并提出P504s是前列腺腺癌高度敏感和特异的阳性标记物。通过对P504s等抗体在82例前列腺病变中的应用，我们发现P504s在前列腺腺癌病例中的阳性表达率为94.4％，界于Jiang等［2］、Beach等［4］和Magi Galluzzi等［5］的观察结果之间(80％～100％)，其中强度达3+为15例(占88％)。阳性结果表现为癌细胞胞质内弥漫性棕黄色、粗大颗粒状物(图2，见封4)或腔缘着色。利用P504s的免疫组化染色可以帮助我们判断细胞的良恶性。据以往的研究，P504s在前列腺腺癌的阴性表达率在0％～18％之间，本组1例为阴性，阴性表达率为5.6％(1/18)，阴性表达病例大部分细胞为亮细胞型，此与陈光勇等［6］观察结果类似，究其原因，可能是此型癌细胞α-甲酰基辅酶A消旋酶参与的支链脂肪酸代谢减弱的缘故。Chen等［7］应用定量分析的方法也观察到，与典型的前列腺腺癌相比，P504s在泡沫细胞型前列腺腺癌中的表达强度显著降低；Zhou［8］观察到单克隆和多克隆P504s在泡沫细胞前列腺腺癌的表达率分别为68％和62％，说明对亮细胞型前列腺腺癌进行免疫组织化学检测时，癌细胞并不能全表达P504s，有少数病例会出现假阴性；而PSA在前列腺腺癌和良性病变中的阳性率均为100％，这对区分良恶性病变意义不大，但对转移性前列腺腺癌诊断很有帮助。

　3.2  P504s与显示基底细胞的抗体P63／34βE12联合应用，是前列腺腺癌诊断和鉴别诊断的有效手段。本研究中PIN和AAH显示出程度不等的P504s阳性表达，说明P504s并不能作为前列腺腺癌绝对特异性标记物。鉴于基底细胞层存在与否在鉴别诊断中的重要作用，我们认为，如能结合P63和CK34βE12的染色，对良恶性病变的鉴别诊断会有很大帮助。已知Ck34βE12是显示前列腺腺泡和导管基底细胞有效的特异性抗体，其阳性部位定位于细胞质，而近来发现的P63也能特异性显示基底细胞，但其阳性着色部位位于胞核，两者联用，均能清楚显示成层的、断续的、甚至个别的基底细胞。而基底细胞层是否完整，在癌的鉴别诊断中意义不同，基底细胞在癌为全部缺如。本组实验中P63、Ck34βE12在癌中无1例表达，在PIN和AAH可残存。当结合P504s染色结果，综合细胞的不典型及浸润性生长方式进行鉴别，使这些病变都能得以正确诊断，避免误诊、漏诊。

【参考文献】  　　［1］Xu J，Stolk JA，Zhang X，et al. Identification of differentially expressed genes in human prostate cancer using subtraction and microarry［J］. Cancer Res，2000，60：1677-1682.

　　［2］Jiang Z，Woda BA，Rock KL，et al.P504s：a new molecular marker for the detection of prostate carcinoma［J］. Am J Surg Pathol，2001，25：1397-1404.

　　［3］Mostofi FK，Sesterhenn IA，Davis CJ，et al. Histological typing of prostate tumours［C］. WHO，Geneva. Heideberg：springer，2002：

　　［4］Beach R，Coun AM，De peralta-Venturina MN，et al. P504s immunohistochemistry detection in 405 prostatic specimens including 376 18 gauge needle biopsies［J］. Am J Surg Pathol，2002，26：1588-1596.

　　［5］Magi-Galluzzi C，Luo J，Isaacs WB，et al. Alpha-methylacyl-COA racemase：a veriably sensitive Immunohistochemistry marker for the diagnosis of Smail Prostate cancer foci on needle biopsy［J］. Am J Surg Pathol，2003，27：1128-1133.

　　［6］陈光勇，孙丽娜，周小鸽，等.α-甲酰基辅酶A消旋酶在前列腺腺癌诊断和鉴别诊断中的作用［J］.中华病理学杂志，2004，10(5)：419-423.

　　［7］Chen L，Jiang，wode BA. Decreased expression of alphametrlacy-COA racemase/P504s in foamy gland carcinoma of the prostate［J］. Mod Pathol，2003，16：145A.

　　［8］Zhou M，Jiang Z. Expression and diagnostic utility of alphamethylacyl-COA racemase(P504s)in foamy gland and pseudohyperplastic prostate cancer［J］. Am J Surg Pathol，2003，27：772-778.