反向斑点杂交技术检测HPV基因分开型在宫颈癌筛查中的应用
发表时间：2009-06-24 浏览次数：676次
作者:杨柳光,李卓园,巢薇
作者单位：广西医科大学第四附属医院检验科
【摘要】 目的 探讨反向斑点杂交法（RDB）检测人乳头瘤病毒（HPV）基因分型，作为宫颈癌筛查手段的临床意义和价值。方法 采用反向斑点杂交法检测23个HPV基因型别低危型：(HPV6、11、42、43、45)和高危型：(HPV16、18、31、33、35、39、45、51、52、53、56、58、59、66、68、73、83、MM4)。结果 683例样本中检出HPV阳性者196例，检出率为28.69%，低危型占30.10%、高危型占54.04%、二型和二型以上混合感染占17.85%。结论 持续的HPV感染与宫颈疾病的演变有关，反向斑点杂交法能较好地检出HPV感染的基因型，为临床提供较有价值实验资料，对宫颈病筛查有较大的帮助。
【关键词】 反向斑点杂交法 人乳头瘤病毒 宫颈癌
自1995年的IALC专题讨论会认为:HPV感染是宫颈癌的主要病因后，HPV越来越受到人们的重视。目前已发现HPV有一百多个基因型，其中约有30多个型与泌尿生殖道感染有关［1］。作者采用ORB技术对683例临床样本（宫颈分泌物）进行HPV基因分型，现报告如下。
1 材料与方法
1．1 研究对象 所有样本均来自2006年4月～2007年3月在本院妇科门诊就诊患者，全为女性，年龄21～64岁，平均（38.5±12.5）岁。
1．2 实验材料 主要仪器：基因扩增仪为美国ABI公司产品PE-5700，核酸杂交仪为FYY-3型，DecipherTM TC1000基因芯片阅读仪。试剂由亚能（深圳）公司提供。
1．3 采样 所有病例均使用一次性取样器，女性用无菌拭子常规方法取宫颈拭子。取样后立即送检。
1．4 反向斑点杂交的技术要点 分泌物中细胞的DNA提取；PCR扩增；快速杂交；观察结果。
2 结果
2．1 HPV各型的检出 683例样本中检出HPV阳性者196例，检出率为28.69%，单一低危型占30.10%、单一高危型占52.04%、二型和二型以上混合感染占17.85%。共检出16种HPV型别，各型别检出见表1。
表1 各型别HPV检测结果表（略）
2．2 本实验HPV阳性按四个年龄段来分析，即<25岁、26～35岁、35～45岁、>46岁，各组HPV感染分别为30.86%、34.28%、28.44%、13.72%。
表2 683例HPV型号感染的年龄分布（略）
3 见附图 附图为反向斑点杂交法检测HPV阳性结果扫描图谱，结果显示该病例为时混合感染了五个型HPV (HPV6、16、45、58、66)，PC为阴性对照点。
4 讨论 目前较为公认的HPV基因分型定义是:只要分离HPV株L1 ORF与已知序列近源病毒株同源性少于90%时,就可被确定为一种新的型别［2］。而依据不同型HPV与宫颈癌发生的危险性高低将HPV分为：低危HPV（如 6、11、42、43、44型等）和高危型HPV（如16、18、31、33、35、……型等）［3］。目前，检测HPV基因分型的方法主要有：杂交法、型特异性PCR法，杂交（DNA-RNA）捕获法、而反向斑点杂交法集上述几种方法的优点，既具有PCR扩增的敏感性，又具有核酸杂交的特异性，且一次能同时检出23个HPV型别，结果客观见附图。 本实验结果显示，HPV总感染率为28.69%，稍高于国内报道［4］，这可能是临床选择病例的差别。所检出的HPV型有16个型别，检出率排在前5位的分别是HPV16、6、11、58、18。其中HPV58型这种世界范围少见的一种高危型HPV，本地区的感染率为12.6%，为国内的报道明显高于国外报道的高危型的一个型别，提示HPV型的感染有一定的地域分布。 表2结果显示，本地区HPV感染高峰为<46岁的年龄组，其阳性者占92.86%，与Burk等［5］报道HPV感染高峰为中青年组的观点一致，且中青年组的感染多为短暂的感染。而对于>46岁的感染者，可能存在持续感染的危险，特别是高危型感染者，应定期进行HPV分型检测和TCT（液基细胞学检测），以便能对宫颈癌的早期诊断。
综上所述,反向斑点杂交法在HPV基因分型检测,在检出率和特异性方面均高于传统的检测方法。其既可以对其病因学研究,还可以为流行病学和HPV疫苗的研究提供可靠的资料，具有重要的临床预警意义，适用于HPV感染的大规模人群调查研究。
【参考文献】 ［1］ 叶顺章,邵文夺.性病诊疗与预防［M］.北京:人民卫生出版社，2002:252-254
［2］ Ethel-Michele de Villiers. Papillomavrus and HPV typing［J］. Biophys Acta,1997,15:199-206
［3］ 赵方辉,乔友林.宫颈癌病因学研究［J］.癌症进展杂志,2004,2（1）：39-42
［4］ 黄涛,何进才.分子杂交技术有人乳头瘤病毒分型检测中的应用［J］.江西医学检验，2006，24（3）：195-196
［5］ Burk RD, Kelly P, Feldman J,et al. Decliningprevalence of cervicovaginal human papillomavirus infection with age is independent of other rish factors［J］.Sex Transm Dis, 1996,23(4):333-427
