大肠癌并肝转移患者生长抑素Ⅱ型受体表达的研究

大肠癌并肝转移患者生长抑素Ⅱ型受体表达的研究作者：董涛涛　郑春宁　殷宗秀　蒋秀玉　孙少川    作者单位：1山东大学医学院2山东大学附属济南市中心医院　普外科    【摘要】  目的:通过研究生长抑素Ⅱ型受体（somatostatin receptor typle Ⅱ，sst2）在大肠癌并肝转移患者病变组织中的表达，探讨生长抑素治疗该类患者的可行性及其作用机制。方法: 采用实时RT-PCR法及免疫组织化学两种方法测定32例大肠癌患者原发灶及相应肝转移灶中sst2的表达，采用方差分析对患者的年龄、性别、肿瘤位置、组织学分型、生长方式、术前CEA水平等方面进行比较。结果:sst2 在所有检测的原发肿瘤组织中均有表达，与肿瘤的位置、生长方式、组织学类型不相关（P>0.05）；肝转移灶中表达的sst2量与原发灶相比，差异无统计学意义（P＝0.172 1）；伴有CEA升高（>5 ng/mL）的患者，其肝转移灶及原发灶均较术前CEA较低（<5 ng/ml）患者sst2表达下调（原发灶，CEA升高vs CEA降低P=0.002 7；肝转移灶，CEA升高vs CEA降低P<0.0001）。结论：sst2在伴有肝转移的大肠癌患者原发灶及肝转移灶中均有表达，差异无统计学意义；sst2表达与患者术前CEA水平有关。    【关键词】  结直肠肿瘤·肝肿瘤·肿瘤转移·受体，生长抑素     Study of somatostatin receptor subtype 2 expression in hepatic metastasis from colorectal cancer DONG Tao-tao1， ZHENG Chun-ning2， YIN Zong-xiong2， JIANG Xiong-yu2， SUN Shao-chuan21Shandong University Medical College(Jinan 250012.China)  2Department of General Surgery, Jinan Central Hospital （Jinan 250013, China）   【ABSTRACT】 Objective: To explore the expression of somatostatin receptor subtype 2 in hepatic metastasis from colorectal cancer. Method: RT-PCR and immunohistochemistry were used to assess the expression of sst2 in 32 patients with hepatic metastasis from colorectal cancer. Result: sst2 expressed in all primary and metastatic tissues, and its expression had no relationship with the tumor’s location，growth pattern and history type（P>0.05）. The difference of sst2 expression in primary and metastatic tissues had no statistical significance（P＝0.1721）. The expressions of sst2 in patients with higher CEA（>5ng/mL）were less than those in patients with lower CEA（<5ng/mL）(primary tumor P=0.0027, liver metastasis P<0.0001 ). Conclusion: sst2 expresses in primary and metastatic tissues of colorectal cancer and its difference has no significant statistical meanings; the expression of sst2 has relationship with preoperative CEA levels.    【KEY WORDS】 Colorectal neoplasms·Liver neoplasms·Neoplasm metastasis·Receptors,somatostatin　　生长抑素可以通过G蛋白耦联受体家族直接调控细胞的分泌及增殖，也可以通过抑制促有丝分裂的激素和生长因子的分泌达到间接抗肿瘤的作用［1］。使用放射标记的生长抑素类似物在治疗分化良好的神经外胚层来源的肿瘤（例如类癌）中显得尤为有效。最近的报道表明不仅在神经外胚层肿瘤，在大肠癌中生长抑素受体（sst）同样高表达［2］。到目前为止，伴有肝脏转移的大肠癌的治疗令人沮丧。研究表明将生长抑素类似物与阿霉素或2-pyrrolinodoxorubicin 耦联的药物能有效的抑制表达生长抑素Ⅱ型受体（somatostatin receptor typle Ⅱ,sst2）和sst5的人乳腺癌和前列腺癌生长，因此能否将该方法应用于其他sst阳性肿瘤（如大肠癌）的受体靶向治疗令人期待［3-4］。1　资料与方法    1.1　一般资料　肿瘤组织取自2002年2月—2007年5月32例伴有肝转移的大肠癌患者，济南市中心医院15例，山东省千佛山医院7例，山东大学齐鲁医院10例。其中男15例，女17例，年龄41～82岁，平均年龄（64.2±13.2）岁。19例患者行一期原发灶及肝转移灶切除的大肠癌根治术，14例患者行一期原发灶切除，二期肝转移灶切除术。肿瘤位于右半结肠的10例，左半结肠的11例，直肠11例。肿瘤的生长方式为膨胀型（肿瘤的边界清晰）18例和浸润型（肿瘤细胞弥漫到周围组织并无明显的界限）14例。肿瘤组织标本均获得足够多的切片（>5张）。所有病例均常规进行HE染色及组织学检查。切片交由不了解生长抑素状况的两位病理医师检查，确定肿瘤病理组织学及分化程度分级。其中12例为G1，10例为G2，8例为G3，2例为胶质癌。每例患者原发灶及肝转移灶至少获取组织一块（≥1.5 cm×1.5 cm×1.5 cm）。样本迅速冷冻并在液氮中保存。所有病例术前均检测CEA，11例患者术前CEA<5 ng/mL，21例患者术前CEA>5 ng/mL。    1.2　RT-PCR对sst2 mRNA 表达的定量分析　每例标本通过RNeasy kit获得总RNA值。应用ABI Prism 7700 序列检测系统对sst2 mRNA进行定量分析，所用的引物以及探针参照文献［4］。产物的量通过插入标准曲线获得。标准曲线由从成神经细胞瘤细胞株CHP404（高度表达sst2 mRNA）提取的RNA绘得［4］。    1.3　免疫组织化学法对sst2表达的分析　兔抗人sst单克隆抗体、SP免疫组织化学试剂盒均购自福州迈新公司。联苯二胺为北京中山生物工程公司产品。采用SP法，实验步骤严格遵照试剂盒说明。在400倍光镜下随机取6个区域。结果以染色阳性区域占总的区域的百分比表示。   1.4　统计学处理　采用SPSS 12.0统计软件, 应用 t 检验以及单因素方差分析并采用直线相关回归分析数据，Ｐ ≤0.05为差异有统计学意义。2　结果    2.1　定量 RT-PCR检测sst2 mRNA　原发肿瘤组织sst2 mRNA表达的范围为（2.3～13.1）×107μg-1，均数为（1.1±2.1）×107μg-1。肝转移灶中sst2 mRNA的表达（0.89～220.0）× 107μg-1, 均数为（12.1±3.8）×107μg-1。原发灶与肝转移灶sst2表达情况比较，44％（14/32）患者升高（原发灶:转移灶> 1.2），50%（16/32）患者下降（原发灶:转移灶<0.8），6.25％（2/32）患者二者相同（0.8 < 原发灶:转移灶<1.2）。原发灶及转移灶sst2的表达差异无统计学意义（P>0.05，表1）。sst2的表达与其他指标如年龄、性别、肿瘤位置、组织学特征也无相关性（P>0.05）。然而，术前CEA水平升高的病例，其sst2的表达为（7.6 ±3.3） × 107μg-1，在原发灶及转移灶中均低于术前CEA水平正常的患者[（11.7±3.5）×107μg-1，P=0.002 7，见表1]。    2.2　免疫组织化学法检测sst2表达　sst2在结直肠癌肿瘤细胞中呈中等强度、弱阳性或阴性表达 （图 1）。间质细胞亦有少量弱阳性或中度阳性表达。32例结直肠癌组织中，sst阳性表达的半定量分析的结果差异很大，3.2％～17.6%，平均为（10.1±4.01）%。3　讨论　　2007年美国NCCN肿瘤治疗指南中指出，当患者耐受手术且肝转移灶可以切除时，应在新辅助化疗后争取一期或分期切除原发灶及转移灶。对于转移灶不可切除但原发灶可能引起梗阻的患者，仍应争取在全身情况及肝功能允许的情况下切除原发灶［5］。Pozzo等［6］报道利用依利替康联合氟尿嘧啶及亚叶酸钙的新辅助化疗，使32.5％的伴有不可切除肝转移灶的患者最终切除了肝转移瘤。另一些研究表明，包含阿霉素或2-pyrrolinodoxorubicin 的细胞毒性生长抑素类似物有效的抑制表达sst2和sst5的人乳腺癌和前列腺癌生长［7］。　　体外对大肠癌细胞株或体内对荷瘤裸鼠的研究表明，应用生长抑素及其类似物能明显抑制许多大肠癌细胞株的生长，但对于其受体阴性的肿瘤细胞株并无作用，表明生长抑素发挥抗增殖作用主要是通过于其受体结合而实现。与123I或111In耦联的生长抑素类似物已在核医学上用于对生长抑素受体阳性肿瘤及其转移灶的定位［8］。上述研究推进了将有效的生长抑素类似物应用于对大肠癌治疗的探索。在一部分病例，短效生长抑素的确降低了原发灶增殖速率。然而，对于大多数大肠癌患者来说，生长抑素类似物并未能延长患者的总体及无瘤生存期。这些结果的不统一可以用以下几个原因解释：1）不同的试验应用生长抑素的量并不同，在患者选择方面目前亦未有统一认识。2）即便对于那些生长抑素受体高表达的患者来说，生长抑素类似物的抗肿瘤增殖作用本身尚未能达到一定的强度以作为对手术或化学疗法的辅助治疗。　　近来关于生长抑素不同亚型受体在大肠癌中表达情况的报道甚多，但结果却并不统一。应用传统的定量RT-PCR法，Buscail等［9］发现1～5型的表达情况不一，且在进展期肿瘤sst2表达缺失。Laws等［10］同时使用RT-PCR和原位杂交技术观察到在进展期肿瘤中sst2仍有表达，但sst5却明显下降。Vuaroqueaux等［11］使用RT－PCR表明sst5、sst1和sst2在大肠癌及正常黏膜中均有较多表达，并且并不因肿瘤的进展而表达减少。结果不同可能来源于所用方法不统一，毕竟无论是RT-PCR、原位杂交还是免疫组织化学的方法，测定sst都存在一定不足。　　本研究在应用RT-PCR时，32例肿瘤原发灶中均有sst2的表达，均数为11.1×107 μg-1。采用免疫组织化学方法，所有原发灶均有sst2的表达。此外，在同时运用上述两种方法对肝转移灶进行检测时，并未发现sst2的表达与原发灶有显著性差异，表明只有很少一部分肝转移灶能表达更多的sst2，也就是说临床上只有很少一部分肝转移灶能表现出对生长抑素类似物具有更强的敏感性。　　sst2表达状况与肿瘤临床病理特征关系的研究表明：sst2表达与肿瘤的位置、生长方式及组织学特征并无明显相关性。因此，并不能认为随着肿瘤生物学行为的恶化（包括浸润及远处转移），sst2的表达下调。　　CEA基因是大肠癌中众多表达上调的最常见的一个。约50％的大肠癌患者，升高的CEA蛋白释放入外周循环。术前CEA是推荐的对大肠癌进行临床分期和手术预案制定的血清标记物，也是术后对患者进行随访的重要指标。本研究发现术前CEA 水平明显上升的病例，其原发灶和转移灶中sst2表达均明显下调。然而，sst2在判断预后，尤其是对患者的长期随访方面的作用有待进一步研究证实。　　基于RT-PCR 和免疫组织化学两种技术，本研究证实了伴有肝转移的Dukes D 期大肠癌患者原发灶和转移灶均有sst2的表达，且差异无统计学意义。sst2表达情况不与肿瘤的位置、生长方式和组织学特征无关。这为临床尝试将生长抑素应用于合并肝转移的大肠癌术前化疗提供了理论依据。对于术前CEA水平升高的病例，原发灶及转移灶均表现出sst2表达的下调，但能否将生长抑素受体表达状况作为判断预后的指标仍有待证实。【参考文献】  [1] Patel Y C, Srikant C. 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