微波杀灭口腔石膏模型上枯草芽孢杆菌的效果观察

　　作者：郭映辉,李贵霞,刘学聪　　作者单位：河北省科技厅资助科研课题(编号：06276102D72) 050031 石家庄市，河北省儿童医院

　　【摘要】目的 通过观察微波炉杀灭石膏模型上枯草芽孢杆菌黑色变种的效果，为快速杀灭石膏模型表面的细菌提供依据。方法 试验菌为枯草芽孢杆菌黑色变种(ATCC9372)，石膏模型染菌后放入美的牌家用箱式微波炉，选用不同功率档和不同时间进行试验。结果 在输出功率700 W×17%和输出功率为700 W×55%时，作用7 min不能够全部杀灭石膏模型表面的枯草芽孢杆菌黑色变种;在输出功率700 W×100%时，作用3 min和5 min亦不能完全杀灭枯草芽孢杆菌黑色变种，只有作用达7 min方能完全杀灭枯草芽孢杆菌黑色变种。结论 微波能有效杀灭口腔石膏模型上枯草芽孢杆菌黑色变种，但要保证一定的微波功率和作用时间。

　　【关键词】 微波;牙模型;枯草芽孢杆菌

　　随着医疗水平的发展，院内感染越来越受人们的重视，口腔科是发生院内感染的危险部门，义齿制作时的石膏模型极易被细菌病毒污染，因此对石膏模型的消毒灭菌显得尤为重要。微波对微生物具有良好的杀灭作用。我们选用微波炉对口腔石膏模型上的枯草芽孢杆菌黑色变种进行了消毒灭菌试验。实验结果如下。

　　1 材料与方法

　　1.1 微波炉

　　选择美的电器有限公司生产的美的牌家用箱式微波炉，型号MP17CKE，微波工作频率2 450 MHz，额定输出功率为700 W。

　　1.2 石膏模型

　　由我院口腔科灌制的工作模180件高压灭菌(132℃，30 min)后送微生物室备用。

　　1.3 标准菌株

　　采用枯草芽孢杆菌黑色变种(ATCC 9372)。

　　1.4 营养肉汤

　　高压灭菌的无菌营养肉汤1 800 ml平均分装至180个无菌试管中，用于增菌培养。

　　1.5 方法

　　配置0.5麦氏浊度(相当于1.5×108细菌数/ml)的枯草芽孢杆菌菌液10 ml置于无菌玻璃平皿内。用无菌镊子夹取无菌蒸馏水浸湿的石膏模型浸润到菌液中，随即将浸润了菌液的石膏模型放入无菌玻璃平皿内并加盖，放入微波炉进行消毒，并在炉内放置烧杯并加入400 ml水(作为水负载)，取出后室温静置10 min，再放入肉汤中增菌培养。用同样的方法将沾染菌液的模型不做微波消毒，而是直接分别放入营养肉汤管用做染菌的阳性对照;高压灭菌后没有沾染菌液的模型分别放入肉汤管中做无菌阴性对照。然后将营养肉汤同时置于37℃温箱内培养。24 h后，将每个试管振打混匀用接种环直接接种于血培养基上，再置37℃温箱内培养24 h，检测血培养基上有无枯草芽孢杆菌生长。将180件无菌模型分9组备用，每组20件。每组中16件模型做染菌消毒实验，2件模型做染菌的阳性对照，2件模型做无菌阴性对照，微波消毒功率分别为低火700 W×17%、中火700 W×55%和高火700 W×100%，消毒时间分别为3 min、5 min和7 min。

　　2 结果

　　2.1 阴性对照管

　　2件经高压灭菌、没有沾染枯草芽孢杆菌菌液的模型放入肉汤增菌培养24 h后无细菌及真菌生长。

　　2.2 阳性对照管

　　2件染有枯草芽孢杆菌黑色变种(ATCC 9372)的模型经肉汤增菌培养后有枯草芽孢杆菌生长。

　　2.3 试验结果

　　沾染有枯草芽孢杆菌的石膏模型微波消毒灭菌结果。微波对枯草芽孢杆菌消毒灭菌结果

　　3 讨论

　　随着对口腔医疗过程中各种感染性疾病传播途径认识的不断提高，人们越来越关注口腔门诊与技工室的消毒问题。人的口腔中存在着多种细菌、真菌和病毒，义齿制作中翻制的石膏模型会沾染这些微生物。郭映辉等[1]对义齿加工厂的石膏模型的细菌检测证实了这点。如不对石膏模型进行特殊的消毒处理则易造成传染性疾病在医患之间交叉感染。因此口腔修复室是防止医院内感染的重要部门[2]。

　　芽孢杆菌为革兰氏阳性杆菌，属于细菌的一个科，对外界有害因子抵抗力强，分布广，存在于土壤、水、空气以及动物肠道等处，代表种是枯草芽孢杆菌(bacillus subtilis)，在琼脂平皿上，枯草芽孢杆菌菌落呈棕色并随培养时间的延长，菌落有黑色素生成着色。枯草芽孢杆菌黑色变种为革兰氏阳性杆菌，极易形成芽孢，芽孢位于菌体中央，不膨大。有时这些形成芽孢的细菌是人体的病原菌，而芽孢又有很强的生命力，可度过不良环境，对干旱和高、低温都有极强的抵抗力[3]。本研究之所以选用枯草芽孢杆菌是因为其接种复活后，以繁殖体与芽孢混合存在，除能抵抗各种恶劣条件外，还能抵抗各种较温和的消毒措施。国内外许多对消毒效果的评价实验选用该菌作为指示菌。故枯草芽孢杆菌黑色变种可作为石膏模型消毒的指示菌[4，5]。

　　通过本实验，我们可以看出，对于枯草芽孢杆菌黑色变种需微波炉高功率(700 W×100%)消毒达7 min才可完全杀灭，较尤平涛等[6]报道的540 W功率的微波作用3 min之内，杀灭枯草杆菌黑色变种99.99%～100%时间较长;但低于吴少军等[7]报道的用家用微波炉完全杀灭枯草杆菌黑色变种芽胞，需以650 W微波照射8 min。这可能与试验中标本所含水分不同有关，尤平涛将标本放入水内微波照射而吴少军是用微波处理较干燥的服装，石膏模型含水量介于二者之间，这也说明了水在微波消毒中具有重要作用，微波消毒的效果与水分含量有很大关系。水分子是典型的偶极子，水是良好的微波吸收介质，增加水分含量有助于微波作用下产热，起到增强灭菌效果的作用，在被消毒物品旁，放置一杯水也可起到加湿增效作用。总之微波输出功率和消毒时间都对杀灭枯草芽孢杆菌有很大影响，所以应用微波炉消毒、灭菌时应选用功率较大的微波档并要照射足够的时间。

　　微波的波长为1～1 000 mm，是具有高频率(300～300 000 MHz)的电磁波，杀菌用915或2 450 MHz。具有良好的杀灭微生物效能，杀菌谱广，对细菌、芽孢及寄生虫等均有杀灭效果。微波消毒由于其具有效率高、速度快、处理后无污染等优点而日益受到重视。微波能对石膏模型消毒，其原理主要是利用微波热效应和非热效应的生物效应[8]。微波消毒灭菌的热效应原理即消毒灭菌用微波频率为2 450 MHz，也就是说微波电场以每秒几亿至几十亿次的频率周期在改变方向，以水为代表的微波吸收介质是极性分子(偶极子)组成，在微波高频交变电场作用下，高速运动引起相互摩擦，从而使温度迅速、均匀地提高，达到热效应消毒杀菌之目的;同时一些实验表明微波照射微生物时对其的杀灭率明显高于只用于热处理时的杀灭率，表明微波存在非热效应，微波非热效应作用机制至今尚无定义，可能与以下学说有关：(1)谐振吸收学说，即厘米波和分米波的频率较接近于有机分子的固有振荡频率，当微波照射时，高分散相的蛋白质、氨基酸、肽等可选择性吸收微波的能量，从而改变其分子结构或个别部分的结构，致使生化反应发生改变;(2)微波的振荡学说，即微波改变了细胞胶体的电动势，从而影响细胞功能。因此,微波利用其两个效应的综合作用杀菌，不仅具有效率高、速度快、对石膏模型精度影响小、处理后无污染等优点，而且微波炉价格低廉，操作简单，易于推广。但现普遍认为长时间微波辐射对人体神经、心血管、血液、内分泌、消化、免疫、生殖等各系统有不利影响，所以应重视其对操作人员及周围环境造成辐射危害，要进行正规的操作使用培训，并采取相应的防护措施。

　　【参考文献】

　　1 郭映辉，刘学聪，李贵霞,等.口腔石膏模型细菌污染情况的调查.现代口腔医学杂志，2007，21：658.

　　2 孙亚夫，赵荣贞，王玉玲,等.口腔器械污染状况和消毒效果调查.中华医院感染学杂志，2004，14：184186.

　　3 郝淑青，刘学聪，乔玉巧，等.微波消毒对口腔科石膏模型精确度的影响.河北医药，2008，30：814815.

　　4 周士新，顾键，徐燕，等.灭菌生物指示器材的研究进展.中国消毒学杂志，2001，18：231232.

　　5 梁哓曼，张少军，邓艳辉，等.两种气体灭菌剂灭菌效果及评价方法.中国感染控制杂志，2003，2：133134.

　　6 尤平涛，王宁红.微波对餐具消毒效果的实验室观察. 中国消毒学杂志，2006，23：512.

　　7 吴少军,陈森华.微波对旧服装消毒效果的观察.消毒与灭菌，1989，6：2341.

　　8 王保义，唐敬贤，江汉保，等主编.电磁场在生物医学中的应用.第1版.北京：国防工业出版社，1990.148.