MTA1蛋白表达与口腔鳞癌临床病理特征的关系

　　作者：王永霞1,陈桂林2,李伟宏3　　作者单位：海南省卫生厅科研项目(琼卫2009-64)(1.海南医学院热带医学与检验学院微免教研室，海南 海口 571101;2.山东省济宁市嘉祥县人民医院，山东 济宁 272173;3.海南医学院附属医院妇产科，海南 海口 570201)

　　【摘要】目的：探讨MTA1蛋白在口腔鳞癌中的表达及其与口腔鳞癌临床病理特征的关系。方法：采用免疫组织化学法检测54例口腔鳞癌标本与20例正常口腔黏膜标本中MTA1蛋白的表达，并分析MTA1蛋白表达与口腔鳞癌患者临床病理特征的关系，包括患者年龄、性别、癌组织分化程度、浸润深度、临床分期及有无淋巴结转移。结果：MTA1蛋白主要表达于细胞核或细胞浆，于口腔鳞癌组织中的高表达率达72.2%(39/54)，而正常口腔黏膜组织中未见表达或仅有微弱表达(25.0%)，二者差异有统计学意义(P<0.005);MTA1蛋白高表达与癌组织分化程度、肿瘤浸润深度、临床分期及淋巴结转移密切相关，而与患者的年龄、性别无明显关系。结论：MTA1蛋白高表达在口腔鳞癌的发生、发展及浸润转移过程中可能起一定作用;MTA1蛋白有望成为判断口腔鳞癌患者预后及选择治疗方案的一个新肿瘤标志物。

　　【关键词】 MTA1蛋白,口腔鳞癌,免疫组化,高表达,浸润转移

　　[ABSTRACT] Objective: To study the expression of metastasisassociated gene1 (MTA1) in tumorigenesis and progression of oral squamous cell carcinoma (OSCC). Methods: MTA1 protein expression and its relation to clinicopathological features of OSCC were examined in 20 normal oral tissues and 54 OSCC by immunohistochemical SP methods. Results: The overexpression rate of MTA1 in OSCC was 72.2%(39/54), which was significant higher than that of the control group 25%(5/15) (P<0.005). The overexpression of MTA1 among the lower differentiated tissues were significant higher than the higher differentiated tissues of OSCC (P<0.05) , and the findings among the groups of intramuscular infiltration were similar higher than the group of nonintramuscular infiltration, the Ⅲ, Ⅳ clinical stages higher than Ⅰ,Ⅱ clinical stages, and lymph node involvement higher than the nonlymph node involvement of OSCC (P<0.05). Conclusions: The overexpression of MTA1 might play an important role in the pathogenesis and development of OSCC, and it might be a target for the therapy and prognostic indicator of OSCC.

　　[KEY WORDS] MTA1 protein; Oral squamous cell carcinoma; Immunohistochemical; Overexpression; Clinicopathological features

　　口腔鳞癌(oral squamous cell carcinaoma， OSCC)是头颈部最常见的恶性肿瘤之一，近年来发病率呈上升趋势，已证实其发生发展与多个基因的异常表达有关。肿瘤转移相关基因1(metastasisassociated gene 1, MTA1)是近年来新发现的一个与多种肿瘤浸润转移密切相关的基因, 研究表明其编码的MTA1蛋白在乳腺癌、肺癌、喉癌及卵巢癌[14]等多种恶性肿瘤中高表达，且参与了肿瘤的浸润与转移。本研究采用免疫组织化学染色法检测MTA1蛋白在口腔鳞癌及正常口腔黏膜组织标本中的表达情况，探讨其在口腔鳞癌发生发展中的作用。

　　1 材料与方法

　　1.1 材料

　　54例口腔鳞癌(OSCC)组织和20例正常口腔黏膜标本均来自2004～2009年间海南医学院附属医院口腔颌面外科手术切除的标本。所有病例术前未接受放疗、化疗，术后均经病理证实。54例OSCC中男性30例，女性24例，年龄35～72岁，中位年龄53岁。标本均经40g/L中性甲醛液固定，常规石蜡包埋，制成4μm厚连续切片。

　　1.2 主要试剂

　　羊抗人MAT1多克隆抗体(浓缩液)购至Santa Cruz Biotechnology 公司;SP免疫组化试剂盒、DAB显色系统购至武汉博士德生物科技公司。

　　1.3 实验方法

　　采用免疫组化SP法，石蜡切片常规脱蜡，梯度乙醇至水，以柠檬酸盐缓冲液高温高压修复抗原，自然冷却至室温，继以SP法检测，操作步骤按SP试剂盒说明书进行，DAB显色，苏木素复染，封片。以PBS代替一抗作阴性对照，已知的阳性OSCC标本作阳性对照。

　　1.4 免疫组化结果判断

　　MAT1蛋白阳性染色主要定位于细胞核，少数定位于细胞质，呈棕黄色颗粒。采用双盲法统计结果，随机选取5个高倍视野(×400)计数，统计阳性细胞所占的百分比，根据阳性细胞百分比将染色结果分为4个等级：阳性细胞≤10%为阴性(-);11%～50%为弱阳性(+);50%～75%为阳性(++);>75%为强阳性(+++)，阴性及弱阳性归为低表达组，阳性及强阳性归为高表达组。

　　1.5 统计学处理

　　采用SPSS13.0统计软件进行χ2检验、fisher 确切概率法相关分析，P<0.05认为差异有统计学意义。

　　2 结果

　　2.1 MAT1蛋白在口腔鳞癌及正常口腔黏膜组织中的表达情况

　　王永霞等.MTA1蛋白表达与口腔鳞癌临床病理特征的关系

　　MTA1蛋白主要表达于口腔鳞癌组织，棕黄色颗粒主要局限于细胞核，少数位于细胞质。MTA1蛋白在口腔鳞癌组织中高表达，在正常口腔黏膜组织中不表达或仅有微弱表达(图1、2)，2种组织中MTA1蛋白的高表达率分别为72.2%(39/54)和25.0%(5/20)。在口腔鳞癌组织中MTA1蛋白高表达率与正常口腔黏膜相比差异有统计学意义(P<0.005)。

　　MTA1蛋白高表达率在60岁以下患者组高于60岁以上患者组(含60岁)，但二者之间的差异无显著意义(P>0.05);女性患者组MTA1蛋白高表达率稍高于男性患者组，但差异无统计学意义(P>0.05);中低分化组与高分化组相比、肿瘤浸润至肌层组与局限于黏膜及黏膜下层组相比、临床分期3、4期与1、2期相比、有淋巴结转移组与无淋巴结转移组相比MTA1蛋白高表达率均明显升高，差异有统计学意义(P<0.05)(表2)。

　　3 讨论

　　MTA1基因是Toh等[5]于1994年应用差异cDNA文库筛选法从13762NF大鼠乳腺癌转移细胞系中首先克隆出来的一个与肿瘤细胞浸润转移密切相关的基因。人类MTA1基因位于染色体14q32.3上，全长2.2kb,编码一段含715个氨基酸残基的MTA1蛋白，分子质量为82kD，氨基酸序列中包含酪氨酸激酶、蛋白激酶C和酪蛋白激酶2的磷酸化位点，因此目前认为MTA1蛋白可能参与调控细胞信号转导通路及细胞骨架成分蛋白[6，7]，成为肿瘤细胞发生、发展过程中起重要作用的蛋白分子;另外，多项研究证实MTA1蛋白还参与了肿瘤的浸润与转移，目前认为MTA1蛋白是核小体重构与组蛋白脱乙酰基酶复合物的一个亚单位。研究认为MTA1蛋白可能直接或间接下调某些抑制肿瘤浸润转移基因的转录而促进肿瘤细胞浸润与转移，其机制为MTA1蛋白能与组蛋白去乙酰化酶(histone deacetylases, HDACs)结合，募集HDACs到目的基因的启动子区域，通过对组蛋白去乙酰基来重塑染色质结构，使其变得更加紧密而不利于转录[8-10];Mazumdar等[9]还认为MTA1蛋白可能直接与某些阻止肿瘤浸润转移的蛋白结合，抑制其功能。 Talukder 等[1]发现MTA1基因过度表达与乳腺癌的发生、发展关系密切;Sasaki等[2]发现MTA1 mRNA水平与肺癌浸润转移相关;Tang等[3]发现MTA1基因高表达与喉癌颈淋巴结转移密切相关;Toh等[11]发现MTA1基因表达异常与食管鳞癌的浸润转移密切相关。但MTA1基因表达与口腔鳞癌浸润转移的相关性尚未见报道。本研究采用免疫组织化学法检测了54例口腔鳞癌组织和20例正常口腔黏膜标本中MTA1蛋白表达情况，发现MTA1蛋白在口腔鳞癌组织中高表达，与正常口腔黏膜相比差异有显著意义(P<0.005);通过对54例口腔鳞癌组织临床病理特征与MTA1蛋白表达的相关性研究发现，MTA1基因高表达与癌组织分化程度、临床分期及肿瘤浸润深度及有无淋巴结转移关系密切，而与患者的年龄、性别无明显关系， MTA1蛋白高表达于口腔鳞癌中低分化组、临床分期3、4期组、肿瘤浸润至肌层组及有淋巴结转移组，与高分化组、临床分期1、2期组、肿瘤局限于黏膜及黏膜下层组及无淋巴结转移组相比，差异有统计学意义(P<0.05)，这说明MTA1蛋白的表达参与了口腔鳞癌的发生、发展及浸润转移，此结论不仅为进一步阐明口腔鳞癌发生、发展的分子机制提供了依据，还对判断肿瘤的生物学行为和预后有重要意义，为临床医生选择最佳治疗方案提供参考依据;同时，研究如何抑制MTA1基因表达及抑制其表达产物的功能有可能成为将来治疗肿瘤的新方法。

　　【参考文献】

　　1

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　　2 Sasaki H, Moriyama S, Nakashima Y, et al. Expression of the MTA1, mRNA in advanced lung cancer[J]. Lung Cancer,2002,35(2):149154.

　　3 Tang QF, Ji WY, Pan ZM, et al. Expression of the Metastasisassociated gene1 in laryngeal squamous cell carcinoma：correlation with cervical lymph node metastasis [J]. Zhonghua Er Bi Yan Hou Ke Za Zhi, 2003, 38(3):213216.

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　　9 Mazumdar A, Wang RA, Sandip K, et al. Transcriptional repression of oestrogen receptor by metastasisassociated protein 1 corepressor[J]. Nat Cell Biol,2001,3(1)：3037.

　　10 Yan C, Wang H, Toh Y, et al. Repression of 92kDa type Ⅳ collageenase expression by MTA1 is mediated through direct interactions with the promoter via a mechanism, which is both dependent on and indepent of histone deacetylation [J]. J Bid Chem,2003,278(4):23092316.

　　11 Toh Y, Ohga T, Endo K, et al. Expression of the metastasisassociated MTA1 protein and its relationship to deacetylation of the histone H4 in esophageal squamous cell carcinomas [J]. Int J Cancer,2004,110(S):362367.