牙龈炎、牙周炎患者龈沟液和血清中白细胞介素8的含量及其与牙周指数的相关性

　　作者：黄亚莉，陈曦，张苏丽，刘利锋，赵亮 作者单位：(西安交通大学医学院第一附属医院口腔科，陕西西安 710061)

　　【摘要】 目的 研究白细胞介素8(IL8)在牙周炎和牙龈炎中的来源，以及与临床指数间的相关性。方法 采用双抗夹心酶联免疫吸附法(ELISA )测定成人牙周炎、牙龈炎患者及正常对照者龈沟液(GCF)及血清中的IL8含量。结果 ①牙周炎患者GCF中IL8含量明显高于对照组GCF中的含量(P<0.001)及牙周炎患者血清中的含量(P<0.001)，与牙龈炎患者GCF中的含量无显著性差异(P>0.05);②牙龈炎患者GCF中IL8含量高于对照组GCF中的含量(P<0.05) ;③牙周炎患者GCF中IL8含量与探诊出血指数(BI)、牙周袋深度(PD)、附着丧失(AL)呈正相关关系(P<0.05)。结论 IL8主要来源于牙龈组织局部;在牙周炎的发生过程中IL8并没有参与骨吸收;牙周炎患者GCF中IL8水平与PD、BI、AL呈正相关关系。

　　【关键词】 牙周炎;牙龈炎;龈沟液;血清;白细胞介素8

　　Measurements of IL8 in gingival crevicular fluid and　in serum from patients with gingivitis and periodontitis　and study of its correlation with clinical indexes

　　Huang Yali, Chen Xi, Zhang Suli, Liu Lifeng, Zhao Liang

　　(Department of Stomatology, the First Affiliated Hospital,Medical School of Xian Jiaotong University, Xian 710061, China)

　　ABSTRACT: Objective To study the source of interleukin8 (IL8) in gingivitis and periodontitis and its correlation with clinical indexes. Methods IL8 contents in gingival crevicular fluid (GCF) were measured in periodontitis, gingivitis and healthy controls with sandwich enzymelinked irnmunosorbent assay (ELISA). In addition, IL8 contents in serum were studied in periodontitis and healthy controls at the same time. Results ① IL8 level in GCF was markedly higher in periodontitis than in healthy controls (P<0.001) and than in serum of periodontitis (P<0.001). IL8 level in GCF was not significantly different between adult periodontitis and gingivitis (P>0.05). ② There was a significant difference of IL8 in GCF between adult gingivitis and healthy controls (P<0.05). ③ IL8 level in GCF of the patients with periodontitis had a positive correlation with BI, PD and AL(P<0.05). Conclusion IL8 in GCF is derived from local gingival tissues. IL8 is not involved in bone absorption in the process of adult periodontitis. IL8 level in GCF of patients with periodontitis has a positive correlation with BI, PD and AL.

　　KEY WORDS: periodontitis; gingivitis; gingival crevicular fluid; serum; interleukin8

　　在牙周炎和牙龈炎的发生过程中，其病理改变不仅与牙周致病微生物及其毒性产物侵入有关，还与机体防御应答特别是龈沟液(gingival crevicular fluid, GCF)中所产生的一系列因子有关[12]。白细胞介素8(interleukin8, IL8)就是其中参与因子之一。近年来，有学者报道了GCF中IL8含量与牙周炎的关系[34]，而患者血清中IL8含量变化如何，报道较少;牙周炎和牙龈炎GCF中IL8含量是否有差异，尚未见报道。在本研究中，我们通过检测患者GCF和血清中的IL8含量，分析其在牙周炎、牙龈炎中的变化及其与临床指数间的相关性。

　　1 材料与方法

　　1.1 病例选择 以在我院门诊就诊的成人牙周炎、牙龈炎患者为研究对象。其中，牙周炎患者72例，平均年龄47.8岁，男22例，女17例;牙龈炎患者13例，平均年龄39.2岁，男3例，女4例。同时，收集牙周炎患者血清17例。受试者无全身系统性疾病，半年内未做过任何牙周治疗，无口腔黏膜病，测定牙无龋洞;3个月内未服用过任何抗菌药物、镇静剂及免疫抑制剂，妇女未妊娠。另收集18例健康人GCF及7例健康人血清为正常对照组，要求正常对照者为全口牙龈组织无红肿，无牙周疾病，探诊不出血，龈沟在2mm以内，拍片无牙槽骨吸收。

　　1.2 血清的采集及处理 所有受检者于早晨空腹抽取静脉血3mL，静置离心后提取血清，放入塑料试管内，-20℃冰箱速冻，-70℃冰箱保存待测。

　　1.3 GCF的采集及处理 收集GCF之前记录菌斑指数(plaque index, PLI)、探诊出血指数(bleeding index, BI)、牙周袋深度(probing depth, PD)、附着丧失(attachment lost, AL)等临床指数，刮除龈上大块牙石、菌斑，漱口、休息15min，吹干牙面，棉卷隔湿。用Waterman I号滤纸制成2mm×20mm的滤纸条，分别在每个待测牙颊侧近中及远中牙周袋内各插入一滤纸条2min，取出，立即用游标卡尺测量GCF浸湿的面积。10min后，重复做一次。将四条滤纸条一并放入盛有生理盐水300μL的聚丙烯管内，每管内收集一个牙的四条滤纸，-20℃冰箱内速冻，-70℃冰箱保存待测。

　　1.4 GCF量的确定 以与GCF成分相似的正常人血清为标本，用5μL微量进样器分别取0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7……1.9、2.0、2.5、3.0、3.5、4.0、4.5、5.0μL的血清量滴于WatermanI号滤纸制成的2mm×20mm的滤纸条上，用游标卡尺测量其浸湿面积。每个点测两条滤纸，取其平均值，绘制标准曲线。用相关系数公式计算标准血清量与滤纸浸湿面积的相关性。然后用同样滤纸条取得的GCF，根据其浸湿面积从此标准曲线上计算出相当的GCF量[4]。

　　1.5 IL8的检测 将样品从-70 ℃冰箱中取出后，室温放置5min，常规夹心法(ELISA)检测IL8。用系列稀释的重组人IL8作标准曲线，样本含量由标准曲线算出(IL8试剂合由第四军医大学免疫教研室提供)。

　　1.6 统计学处理 采用SAS软件系统，数据以± s表示，组间比较及相关性采用t检验，以P<0.05为差异有统计学意义。

　　2 结果

　　2.1 GCF量的确定 从图1中可以看出标准血清量与滤纸条浸湿的面积有非常显著的正相关关系(r=0.9973，P<0.01)，即随着血清量的递增，相应的浸湿的面积逐步增加，这说明用滤纸上浸湿的血清面积可换算出相应的微升量。由于GCF与血清成分相似，故可以从滤纸上GCF的浸湿面积，换算出相应的微升量。

　　图1 正常人血清量与滤纸浸湿面积的关系(略)

　　Fig.1 Correlation between volume of healthy human serum and infiltration area of filter paper

　　2.2 IL8含量的测定结果 ①牙周炎患者GCF中IL8含量明显高于正常对照组GCF中的含量及牙周炎患者血清中的含量(P<0.001)，与牙龈炎患者GCF中IL8含量无显著性差异 (P>0.05);②牙周炎患者血清中IL8含量与正常对照组无显著性差异(P>0.05);③牙龈炎患者GCF中的IL8含量高于正常对照组GCF中的含量(P<0.05);④牙周炎患者GCF中IL8含量与BI、PD、AL呈正相关性(r分别为0.2942、0.3643、0.4474，P<0.05)，而与PLI无相关性(r=0.2472，P>0.05，表1)。

　　表1 牙周炎、牙龈炎患者GCF及血清中IL8的含量(略)

　　Table 1 IL8 content in GCF and serum of periodontitis and gingivitis

　　*P<0.001, ▲P<0.05 vs. control; △P<0.001 vs. serum

　　3 讨论

　　IL8是CysXCys亚家族趋化因子之一，属于内源性趋化因子，也是诱导型细胞因子。在白细胞介素1(IL1)、肿瘤坏死因子α(TNFα)、脂多糖(LPS)等的刺激下，中性白细胞、巨噬细胞、单核细胞、T淋巴细胞、内皮细胞、牙龈成纤维细胞、角质细胞等均能产生IL8。其中，中性白细胞是产生IL8的主要细胞。中性白细胞是存在于正常龈沟及GCF内的主要防御细胞，牙周炎症时，它参与了对牙周组织的破坏，其功能异常与牙周炎的发生及临床表现密切相关。龈沟中的中性白细胞是宿主细胞对牙周微生物产生防御反应的第一道防线，结合上皮中性白细胞在细菌菌斑和结合上皮之间又筑起了一道防线，这些白细胞时刻保护着牙周组织。IL8是中性白细胞强有力的趋化因子，可聚集并激活中性白细胞，使其释放溶菌酶，并促进溶菌酶的活性和吞噬效应，造成局部组织病理损害[57]。所以，IL8在牙周炎的免疫保护或免疫病理过程中起着重要作用。邹德荣等[4]用ELASA法在牙周炎患者GCF中检测到了IL8 。邹韵秋等[8]检测了重症牙周炎患者120个牙位GCF中IL8水平，均与对照组有显著性差异。Eick等[9]在离体牙龈细胞株内检测到了IL8及IL8mRNA的表达。Kurdowska 等[3]比较性检测了成人牙周炎及侵袭性牙周病患者GCF中IL8含量，结果发现侵袭性牙周炎患者GCF中IL8含量远高于成人牙周炎患者，另外IL8和IL8抗体复合体在成人牙周炎患者GCF中占90%而在侵袭性牙周炎患者GCF中占50%。这就提示了评估IL8及抗IL8抗体复合体可以识别成人牙周炎患者及侵袭性牙周炎患者。Gustaf等[10] 的体外研究表明，在细胞因子IL1和TNFα的作用下，缓激肽调节人牙龈成纤维细胞中IL8的产生比单独用缓激肽刺激人牙龈成纤维细胞产生更多的IL8，所以牙周炎患者GCF IL8可能与其他炎症介质协同作用导致牙周炎的发生。本研究结果表明，牙周炎、牙龈炎患者GCF中IL8含量明显高于健康对照组，与谢昊等[5]的实验结果一致，说明IL8与牙周组织疾病的发生有密切的关系。IL8是反映牙周炎症的一个明显的指标，牙周炎、牙龈炎GCF IL8含量，比其相应的血清中IL8含量明显增高，这就提示，牙周炎、牙龈炎患者GCF成分不仅来源于血清，更主要是来源于局部组织细胞，如成纤维细胞、单核细胞、吞噬细胞、中性白细胞等，这些细胞在病变组织局部占主导地位。因此，对于牙周炎及牙龈炎患者其血清IL8水平状况不能反映龈沟液IL8水平状况;全身因素在牙龈炎、牙周炎的发生、发展过程中不是主要因素。另外，牙周病患者GCF中IL8水平与PD、BI、AL有正相关关系，也就是说，比较好的牙周状况，GCF中IL8含量比较低，反之亦然。牙周炎患者GCF中IL8含量与牙龈炎患者无显著差异，而牙龈炎患者GCF中IL8含量高于正常对照组，说明IL8只是炎症介质，而与骨破坏吸收关系不密切。牙周炎患者血清中IL8含量与正常对照组无显著性差异，正常对照组GCF中的含量与正常对照血清中水平无显著性差异，与谢昊等[5]的实验结果不一致。分析原因可能与血清样本数量较少有关，临床上还需大量样本进一步观察。综上所述，①用夹心法ELISA可以在牙周炎、牙龈炎患者GCF中检测到IL8，说明IL8主要来源于牙龈组织局部，牙周炎的发生与局部因素密切相关;②牙周炎患者GCF中的IL8与牙龈炎患者无统计学差异，而牙龈炎患者GCF中的IL8高于对照组，说明IL8并没有参与骨吸收;③牙周炎患者GCF中IL8水平与PD、BI、AL有正相关关系。

　　【参考文献】

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