口腔鳞癌中白细胞介素-8的表达及临床意义

　　作者：冯红超，彭玉峰，宋宇峰 作者单位：贵阳医学院2005级研究生

　　【摘要】目的： 了解口腔鳞癌(oral squamous-cell carcinoma, OSCC)组织中白细胞介素-8(interleukin-8，IL-8)的表达情况，并探讨其与肿瘤发展和转移的关系。方法： 应用免疫组织化学SP法检测40例OSCC和10例正常口腔黏膜中IL-8的表达，并分析其表达和临床指标的关系。结果： OSCC中IL-8的表达显著高于正常口腔黏膜组(P<0.05)，其阳性表达率分别为67.50%和30.00%;在OSCC中IL-8的表达Ⅲ～Ⅳ期病例显著高于Ⅰ～Ⅱ期病例(P<0.05)，有淋巴结转移组显著高于无淋巴结转移组(P<0.05)。结论： OSCC中IL-8的高表达参与了肿瘤的生长和转移，但具体的机制及其在OSCC预后、治疗中的意义还需进一步的研究。

　　【关键词】 癌，鳞状细胞; 口腔肿瘤; 免疫组织化学; 肿瘤转移; 白细胞介素8

　　The Expression of Interleukin-8 and Its Clinical Significance in Oral Squamous-cell Carcinoma

　　FENG Hongchao, PENG Yufeng, SONG Yufeng

　　Department of Stomatology, Guiyang Medical College, Guiyang 550004, Guizhou, China

　　[Abstract] Objective: To get information of IL-8 protein expression in oral squamous-cell carcinoma (OSCC), and to study its relationship with development and metastasis of the tumor. Methods: The expression of IL-8 in 40 cases of human OSCC and 10 specimens of normal oral mucosa was detected by using immunohistochemistry SP method, and the relationship of IL-8 expression with patients' clinical indexes was analyzed. Results: the positive rate of IL-8 protein expression in OSCC was 67.50%, which was significantly higher than that in normal oral mucosa (30.00%; P<0.05). Expression of IL-8 protein was correlated with TNM stages and lymph node metastasis. Conclusions: The high expression of IL-8 protein might be involved in the growth and metastasis of OSCC, while the potential mechanism and significance of IL-8 protein in the prognosis and treatment in OSCC need further research.

　　[Key words] carcinoma,squamous cell; mouth neoplasms; immunohistochemistry; neoplasms metastasis; interleukin-8

　　口腔癌多为鳞状细胞癌，且多出现颈淋巴结转移，是常见的头颈部恶性肿瘤，对其生长和转移机制的研究有重要的临床和社会意义。在其它的肿瘤研究中发现，白细胞介素8(interleukin-8，IL-8)通过多种途径参与了肿瘤的生长和转移，但口腔鳞癌(oral squamous-cell carcinoma, OSCC) 中目前的研究不多。2007年通过免疫组织化学的方法检测OSCC中IL-8的表达，并分析其和肿瘤的临床病理参数之间的关系，以探讨其在口腔癌生长和转移中的作用。

　　1 材料和方法

　　1.1 标本

　　收集1999-2007年贵阳医学院附属医院口腔颌面外科手术切除或活检的OSCC标本40例,其中男25例，女15例，年龄34～76岁，平均57.70岁。口底癌13例，舌癌12例，牙龈癌4例，腭癌3例，颊癌8例;其中有区域淋巴结转移22例，非淋巴结转移组18例。根据2002年国际抗癌联盟(UICC)制定的口腔癌TNM分期标准进行分期，Ⅰ～Ⅱ病例12例，Ⅲ～Ⅳ病例 28例。40例中高分化36例，中分化3例，低分化1例。正常口腔黏膜10例, 均取自无烟酒嗜好的外伤或拔牙病人。肿瘤标本术前未经任何针对肿瘤的治疗,所有标本均经病理证实。标本均经10%中性福尔马林液固定，常规石蜡包埋，制成4 μm厚连续切片。

　　1.2 染色方法

　　所有标本均进行普通HE染色。以兔抗人IL-8多克隆抗体(购于武汉博士德生物工程有限公司)标记IL-8，所有标本均进行免疫组织化学SP法(试剂盒购于福州迈新生物工程有限公司)。抗原修复：将切片置于500 ml 0.01 mol/L(pH6.0)枸橼酸盐缓冲液中微波加热至沸腾后(高火)保持3 min，然后低火保持10 min,取出自然冷却至室温。严格按照说明书进行染色，严格控制实验时间、实验温度和各种试剂浓度等条件。以PBS液代替一抗为阴性对照;以试剂公司提供的阳性标本行阳性对照。

　　1.3 结果判断

　　普通HE染色：观察肿瘤的一般形态、病理分级，由3位高年资的病理科医师分别进行，取至少2位意见相同的结果进行统计分析。

　　免疫组织化学染色：IL-8以细胞胞浆和胞核内出现棕褐色颗粒判断为阳性细胞。在400倍高倍镜下随机选择5个上皮或癌变视野,计算阳性细胞百分数和染色强度。按染色强度分为:0分, 1分, 2分, 3分;阳性细胞百分数:小于10%为0分,10%～25%为1分, 25%～50%为2分,大于50%为3分;两者积分之和≥2分判断为免疫组织化学阳性染色。评分分级为:≤2分为阴性,2～4分为阳性,≥4分为强阳性。

　　1.4 统计分析

　　SPSS11.5版软件包进行统计分析，采用行x列表资料χ2的检验。P﹤0.05有统计学意义。

　　2 结果

　　2.1 IL-8免疫组织化学染色特点

　　OSCC中IL-8阳性表达呈棕黄色，主要表达于鳞癌细胞胞浆和胞核，部分见于间质细胞, 见图1。正常口腔黏膜组织中IL-8表达为阴性或弱阳性，染色强度明显低于OSCC组织，见图2。

　　2.2 不同口腔组织中IL-8的表达

　　表1显示，在OSCC中IL-8的表达高于正常口腔黏膜组(P<0.05)，其阳性表达率分别为67.50%和30.00%。表1 不同口腔组织中IL-8的表达(略)

　　2.3 OSCC中IL-8表达与各临床病理学参数间的关系

　　如表2显示：IL-8在OSCC中的表达在临床各因素的比较中，Ⅲ～Ⅳ期病例高于Ⅰ～Ⅱ期病例(P<0.05)，有淋巴结转移组高于无淋巴结转移组(P<0.05),男性患者显著高于女性患者(P<0.05)，但不同年龄组的比较差异无显著性。表2 口腔鳞癌中IL-8表达与各临床病理学参数间的关系(略)

　　3 讨论

　　本研究发现，IL-8在OSCC组织中呈高表达，主要表达于肿瘤细胞和部分间质细胞的胞浆及胞核中，其阳性表达率较正常组差异有统计学意义。在OSCC中Ⅲ～Ⅳ期的表达高于Ⅰ～Ⅱ期，同时有淋巴结转移组表达较无淋巴结转移组高，差异均有统计学意义，说明OSCC组织内高表达的IL-8可能参与了肿瘤的生长和转移过程。由于OSCC多为高分化，本组病例中中低分化仅4例，因此没有进行IL-8的表达和肿瘤病理分级关系的研究。

　　IL-8是一个多功能的细胞因子，许多细胞(如单核巨噬细胞、淋巴细胞、中性粒细胞等)在适当刺激后可产生IL-8，其中单核巨噬细胞是主要产生者。研究表明，IL-8的功能主要表现为对中性粒细胞、T淋巴细胞、嗜碱性粒细胞的激活和趋化，在炎症损伤中起到重要作用。但近几年来，人们发现IL-8还参与了许多炎症反应以外的生物学行为，目前，在多种恶性肿瘤组织中，均发现了IL-8的过量表达，并和肿瘤的转移、分期有关[1,2]。本项研究结果与其他关于IL-8在头颈肿瘤的研究均证实，IL-8的表达与肿瘤的浸润和淋巴结转移有关[3]。目前的研究表明，IL-8参与肿瘤生长和转移的可能机制有：IL-8可能通过调节促细胞分裂蛋白激酶P38r及凋亡促进因子Bcl家族的表达，抑制肿瘤细胞的凋亡[4,5];IL-8可通过调节细胞外基质及基质金属蛋白酶的表达，使得机体阻碍肿瘤向周围组织扩散和转移的屏障被溶解破坏，进一步促进肿瘤的浸润及转移[6,7];许多研究都表明，IL-8在肿瘤的血管生成和转移过程中起重要作用。各种浓度的IL-8均可促进血管内皮细胞迁移[8]。重组人IL-8作用于人类脐静脉内皮细胞和人皮肤微血管内皮细胞后可诱导内皮细胞增殖和毛细血管形成[9]。而Bao等[10]用1a、25二羟维生素D3抑制前列腺癌中IL-8的表达，发现前列腺癌组织中微血管密度随之降低，肿瘤转移率降低。因此，在口腔癌中IL-8的高表达可能通过不同的途径参与了肿瘤的生长和转移。

　　国内张妍蓓[11]等研究了非小细胞肺癌患者血清中IL-8的水平在肿瘤发生、发展、转移和预后中的作用及其临床意义，结果发现，血清IL-8水平与非小细胞肺癌的发生及其转移相关，提示IL-8在非小细胞肺癌的发生和发展中起着某种重要的作用。国外研究也发现，非小细胞肺癌组织IL-8mRNA高表达者生存率明显降低[12]。这些结果说明IL-8在评价一些肿瘤的预后中也有一定的意义。但由于研究周期短、随访困难等原因，本组病例中IL-8的表达在预后中的意义还需进一步研究。　　总之，本研究表明在OSCC中IL-8高表达，并和肿瘤的TNM分期、淋巴结转移有关，但具体的机制及其在OSCC预后、治疗中的意义还需进一步的研究。4

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