口腔硬组织切片的固定脱钙染色方法统计分析
发表时间：2009-06-19 浏览次数：857次
作者：王颖
作者单位：吉林大学口腔医学院基础教研室，吉林 长春 130041
【关键词】 口腔硬组织切片 固定 脱钙 染色
为了解全国口腔硬组织切片染色技术的现状，对近年来杂志刊登的论文中有关口腔硬组织切片应用的固定、脱钙及染色方法进行统计分析，并结合实践体会对有关问题进行分析如下。
1 资料和方法
1.1 一般资料：2000年～2005年中华口腔医学杂志、华西口腔医学杂志、现代口腔医学杂志、实用口腔医学杂志、口腔医学研究（以下分别简称中华、华西、现代、实用、研究）刊登的论文中，涉及口腔硬组织切片的共282篇,见表1。其中仅3篇为切片染色技术交流或经验介绍，其余全部为科研论文。标本多数为常用实验动物鼠、兔、犬的牙及牙周组织、颌骨、颞下颌关节，少数为猴、小猪及山羊的牙齿、骨骼。人体标本不多，主要是离体牙。表1 6年5种杂志刊登的口腔硬组织切片文章数（略）注：中华为中华口腔医学杂志；华西为华西口腔医学杂志；现代为现代口腔医学杂志；实用为实用口腔医学杂志；研究为口腔医学研究
1.2 方法：从统计的资料中选择有口腔硬组织切片的文章，再从文章的材料和方法中查得切片用的固定、脱钙、染色方法，分别进行汇总、统计。通过对文章所附照片观察比较及实践体会，分析并探讨提高口腔硬组织切片质量和染色效果的方法。
2 结果
2.1 对282篇口腔硬组织切片文章应用的固定、脱钙、染色方法统计结果：见表2～4。表2 固定液及固定方法统计结果（略）表3 脱钙液及加速脱钙方法统计结果（略）注：①甲酸复合脱钙液包括甲酸甲酸钠、甲酸柠檬酸钠、甲酸氯化铝三种脱钙液；②无机酸及其他脱钙液为硝酸、盐酸及以其为主的混合脱钙液，包括文中未说明的其他脱钙液；③加速脱钙方法是指加用搅拌、微波、超声等表4 口腔硬组织切片的染色方法统计结果（略）注：①少数只进行一种染色，多数为数种染色；②特殊染色主要为改良的Masson、Mallory、Gomori及甲苯胺蓝染色；③组化染色均为磷酸酶的显示方法
2.2 对统计文章所附的照片观察比较：血管灌注固定、EDTA及甲酸复合脱钙液脱钙的，其切片质量和染色效果均较优良。
3 讨论
固定方法很重要，浸泡法固定液不易很快浸透到坚硬致密的牙体及颌骨内，固定不好则切片质量和染色效果不良。血管灌注法固定液能迅速浸透到组织和细胞内，固定得充分、均匀，保持生前的形态结构特征和物质成分性质，此举是提高切片质量和染色效果的基础和前提。因此实验动物标本宜采取灌注固定。
脱钙是牙齿、骨骼切片非常重要的特殊技术关键。硝酸、盐酸及其为主的混合脱钙液易引起组织损伤，染色不佳甚至染不上色，故应不用或少用。EDTA脱钙不损伤组织和细胞的形态结构及抗原等物质的性质，脱钙效果好，但脱钙慢需时太久，适宜于不受时间长限制的标本脱钙。甲酸甲酸钠、甲酸柠檬酸复合脱钙液，尤其是甲酸氯化铝脱钙液不引起明显的组织损伤，脱钙效果优于单一无机酸及其混合脱钙液，且比EDTA脱钙快。以氯化铝为保护剂的甲酸脱钙液中的铝离子，不但易被吸附起到保护作用，而且铝离子又是常规HE染色苏木精等色素的媒染助染剂，故HE、特染及免疫组化染色效果都很好［1，2］，是较理想的常规脱钙液。恒温磁力搅拌器搅拌、微波、超声等加速脱钙的方法，是提高脱钙效果和工作效率的重要措施，但本文统计结果说明应用的很少，不到1%。应引起重视，充分利用。
对口腔硬组织尤其是应用最多的牙及牙周组织等软硬组织联合切片常用的几种结缔组织多色染色进行比较，改良的Gomori特殊染色［3］可将牙齿、骨骼及与其相连的周围不同组织染成对比鲜明、艳丽的红色和绿色，且各种组织和细胞的图象清晰，操作简单，容易掌握，优于改良的Masson、Mallory三色染色。
【参考文献】 ［1］薛世泉，李红兵，王 渝，等．骨和牙切片的甲酸氯化铝脱钙液及脱钙方法［J］．中华病理学杂志，2006，35(6)：372．
［2］王 渝，臧光祥，孙宏晨，等．提高牙及牙周组织联合石蜡切片质量的探讨［J］．中华口腔医学杂志，2005，40(5)：437．
［3］程 敏，王 颖，李保泉，等．改良的Gomori特殊染色在口腔硬组织切片中的应用［J］．华西口腔医学杂志，2006，24(2)：185．
