HOXA 10在子宫内膜异位症不孕患者血清中的表达及意义
发表时间:2014-01-21 浏览次数:512次
子宫内膜异位症(Endometriosis,EMs)是具有生长功能的子宫内膜组织出现在子宫腔以外的疾病,是生育期女性的常见病。据统计[1],在育龄期女性中EMs的发病率超过10%,且此比率有逐年上升的趋势。EMs是育龄妇女不孕的主要原因之一,但EMs导致不孕机制尚不肯定,除其引起输卵管堵塞、排卵障碍、盆腔炎性反应外,最大引起不孕的可能是胚胎着床失败。目前的研究已发现与EMs不孕密切相关的一些分子生物学因素,其中包括HOXA10,它可能通过改变对胚胎着床有重要作用的下游靶基因的表达从而使 EMs 患者的受孕率降低。在以往的研究中,为探讨 HOXA10 基因在 EMs引起的不孕中所起的作用,多检测HOXA10mRNA在在位内膜中的表达,但其终究是一种有创检查,不能为所有患者接受,发现一种无创并可以预知EMs患者接受辅助生育技术的结局的检测方式为临床工作所亟需。本研究采用Elisa方法检测HOXA10在EMs不孕患者血清中的水平,以期进一步发现EMs 的不孕机制并发现一种无创的EMs导致不孕的检查方式。
1材料与方法
1.1一般资料:本研究选取2011年1月~2013年4月年因子宫内膜异位症导致不孕就诊于吉林省人民医院妇产科门诊的48例EMs患者,其中,12例为原发不孕,36 例为继发不孕,不孕年限1.15~8年,平均(4.13 ±2.11)年。48例患者妇科检查均发现有骶韧带增粗、触痛结节、卵巢粘连、后陷凹粘连及卵巢肿块形成等内膜异位症体征,在腹腔镜检查中看到:①卵巢子宫内膜异位囊肿,病理学诊断为卵巢子宫内膜样囊肿(卵巢囊肿)。②盆腔腹膜或内生殖器浆膜层子宫内膜异位。根据 1985 年美国生育学会修订的内异症分期标准(Revised classification of American Fertility Society,r-AFS),48 例内异症患者中,Ⅰ期12例、Ⅱ期16例、Ⅲ期8例、Ⅳ期2例。48例患者进入本研究均符合入选条件。
1.2入选条件:①20~39 岁的育龄期女性,性生活正常、未采取避孕措施、其他不孕检查结果无异常,1年未能受孕。②月经规则,有正常排卵周期(周期为 24~35 d,基础体温双相型或经前血浆孕酮水平≥ 911 nmol/L);丈夫精液检查在正常范围内。③既往无盆腔炎症病史;9个月内未服用过任何治疗内异症的药物。④输卵管、子宫碘油造影显示,双侧输卵管均通畅。⑤临床诊断为内异症,且无盆腔炎性反应和(或)合并子宫腺肌症。
1.3血清HOXA10测定:检测采用HOXA0药盒由cusabio有限公司提供,采用美国Molecular Devices Emax酶标检测仪,操作步骤严格按照说明书进行,同时进行质量控制,设立阴性和阳性对照及定标。
1.4统计学处理:计量资料采用t检验,计数资料采用χ2检验,经 SPSS 12.0统计软件处理。C A125数据采用均数±标准差( x±s)表示。
2结果
EMs患者的血清HOXA10水平低于正常人:本课题组对于经过检查(包括病史,查体、彩超及血清CA125)确诊的采取EMs及正常人血清,通过检测二者的HOXA10 水平,笔者发现EMs患者的血清HOXA10水平低于正常人。①首先,笔者通过检测试剂盒的标准曲线来检测试剂盒的情况。在试验中,笔者得到如下标准曲线(见图1)。②通过标准曲线的检测,笔者进一步证实了试剂盒的质量及可行性,进而我们检测了EMs及正常人血清。结果见图2。
图1HOXA10试剂盒标准曲线
图2EMs及正常人血清HOXA10的差别
在研究中发现,EMs患者血清HOXA10的水平明显低于正常人,其均值为0.173 75明显小于正常人的0.230 1。因此EMs患者的血清HOXA10明显低于正常人,为不孕患者的进一步检查及预后的评估提供了新的证据。
3讨论
3.1HOXA 10 基因在EMs 患者内膜组织中的异常表达及意义:EMs的临床症状包括痛经及不孕,据相关统计发现EMs 患者不孕症的发生率高达30%~40%,甚至有报道认为[2],50%EMs患者合并不孕,Ems患者发生不孕的机制尚未明确,包括包括输卵管堵塞、盆腔环境改变等。在辅助生育技术中,试管婴儿治疗的患者中虽然胚胎移植率较高,最高可以达到85%,但妊娠率仅20%左右[3],远远低于其他因素导致不孕患者的妊娠率,说明EMs患者的胚胎着床率较低,提示 EMs 患者不孕的主要因素之一可能是胚胎着床受阻。在胚胎着床过程中,HOXA10基因起到了重要作用。在以往的很多研究中发现,HOX家族特别是HOXA10对胚胎着床过程中起着重要的作用[4]。正常人输卵管组织仅表达微量 H O X A1 0mRNA,但在输卵管妊娠时,在输卵管妊娠的着床部位HOXA10 mRNA 表达接近正常妊娠时在位内膜的表达水平,因此HOXA10基因在胚胎着床中起重要作用[5]。
在以往的研究中,学者们通过检测子宫内膜组织的HOXA10表达量以期发现EMs患者不孕的原因,及HOXA10基因在EMs导致不孕所起的作用,但这种检查终究是一种有创检查,患者首先需要接受清宫术,采集内膜组织,才能进行相关检测,即检测内膜容受性,患者行清宫术后需要休息一段时间,待内膜功能层恢复,适合胚胎着床,才能接受促排卵治疗,从而进而行IVF-ET胚胎移植 ,治疗周期较长,患者花费较多,且有创,因而不能为某些患者接受。在研究中,首先监测血清中HOXA10量,为进一步的检查治疗提供方向。
在本研究中,以EMs不孕患者、正常生育患者为研究对象,对其血清HOXA10水平进行了检测。研究结果显示:HOXA10在正常生育组血清中较高,其均值为0.230 1,而 EMs 不孕者的血清中的表达水平则明显较低,其均值为0.173 75,低于正常生育组(P<0.01)。 1999 年Taylor 等就在研究中发现[6]:EMs 患者的在位内膜HOXA10基因的表达在分泌中期下调。2005 年,Wu 等的研究证实 HOXA10基因启动子的异常甲基化是HOXA10 表达下调的原因[7]。研究结果发现了在EMs患者血清中HOXA10的含量低于正常生育组志愿者血清中的含量。基于这一结果,笔者可以推测EMs患者接受IVF-ET治疗的结局,进而检测在位内膜中HOXA10的mRNA的表达量,行相关检查及治疗,并决定在促排卵周期实行钱是否行相关检查及治疗,以提高子宫内膜的容受性,降低EMs的病变程度。
3.2HOXA 10 基因异常表达对EMs 不孕的影响:本研究 EMs 不孕患者 HOXA10 基因表达与正常生育组相比明显降低,与Tetrault等的研究结果一致[8],提示 HOXA10 基因的低表达可能是EMs不孕的重要因素之一。
HOXA10通过直接影响EMs患者子宫内膜容受性影响胚胎着床:HOXA10介导胚胎种植的多个环节,如子宫内膜容受性的建立、胚胎的定位及黏附、胞饮突形成、蜕膜化、血管通透性等。Eun等提出以 HOXA10基因作为子宫内膜容受性的标志[9]。但在以往的研究中多集中于检测在位内膜的HOXA10mRNA表达,进而发现HOXA10在妊娠中的作用,检测血清中HOXA10含量的研究较少,为弥补这一空白,并为EMs患者的妊娠提供更有效的治疗措施,我们检测了HOXA10在血清中的含量。研究结果证实HOXA10在EMs患者血清中较低,可以推论HOXA10 基因表达的下调可能会降低EMs 患者子宫内膜容受性,引起胚胎着床困难,导致EMs患者不孕。与Matsuzaki等研究相符[10~13]。
综上所述,研究表明,HOXA10基因在EMs 不孕患者血清的表达水平明显降低,可能是引起 EMs 不孕患者子宫内膜容受性降低,进而引起不孕的重要因素之一。研究结果为EMs不孕症的治疗提供了一个新的思路,有望在将来利用基因治疗以增加EMs不孕患者内膜组织中HOXA10基因的表达,使子宫内膜容受性恢复正常而利于胚胎着床,进而提高妊娠率,但有关 HOXA10基因对 EMs 不孕的影响机制还需进一步深入研究。
4参考文献
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[6]Taylor HS,Bagot C,Kardana A,et al.HOX gene expression is altered in the endometrium of women with endometriosis[J]. Hum Reprod,1999,14(5):1328.
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