浆液性卵巢癌中雌孕激素受体表达及预后关系探讨

　　作者：刘晨　冯捷　崔恒 (1.武警北京总队医院妇产科，北京 100027;2.北京大学人民医院妇科肿瘤中心，北京100044)

　　【摘要】目的：研究浆液性卵巢癌中雌孕激素受体表达的意义及与预后的关系。方法：选取19841~20037月在我院妇科首次收治的浆液性卵巢癌48例,卵巢浆液性囊腺瘤12例，正常卵巢10例。用SP法测定ER、PR蛋白表达情况，并与临床特征比较。结果：ER、PR阳性染色位于细胞核内，在卵巢癌、良性肿瘤、正常卵巢中ER表达率为2708%、3333%、100% ， PR 表达率为4167%、 8333%、100%，差异有极显著性(P<001)。ER、PR表达与浆液性卵巢癌的生存、分期、病理分级、淋巴关系，经检验差异无显著性(P>005)。结论：本研究中PR情况与患者生存情况无关。要明确ER、PR对卵巢癌的意义应作单一病理类型卵巢癌的受体多种测定方法的前瞻性研究。

　　【关键词】雌激素受体;孕激素受体;浆液性卵巢癌

　　Relationship between Expression of Estrogen and Progesterone Receptor and

　　Prognosis in Patients with Serous Cystadenocarcinoma of the Ovary

　　LIU Chen, FENG Jie, CUI Heng

　　Department of Gynaecology and Obstetrics， Hospital of Beijing Armed Police Division,Beijing 100000,China

　　【ABSTRACT】Objective: To study the relationship between expression of estrogen and progesterone receptor and prognosis in patients with serous papillary cystadenocarcinoma of the ovary.Methods: The expressions of ER and PR were examined by immunohistochemical staining (IHC) in the 48 cases of epithelial ovarian serous papillary cystadenocarcinoma,12 cases with serous papillary cystadenoma and 10 cases with normal ovary treated in Hospital of Beijing Armed Police Division from January 1984 to July 2003.All patients didnt receive chemotherapy treatment before operation.Results: ER and PR proteins were located in cellular nuclear.The positive expression rate of ER was 2708% which was significantly higher than that of benign tumors (3333%) and normal ovarium (100%)(P<001).The positive expression rate of PR was 4167% which was significantly higher than that of benign tumors(8333%) and normal ovarium (100%)(P<001).There was no correlation between the expression of estrogen and progesterone receptor and survival, stage, grade and lymph(P>005).Conclusion: To determine the significance of ER, PR, a prospective study involving a uniform population and utilizing both methods of steroid receptor expression would need to be performed.

　　【KEY WORDS】Estrogen receptor; Progesterone receptor;Serous cystadenocarcinoma of the ovary

　　近年来随着妇科肿瘤与女性内分泌的研究不断发展，发现雌孕激素及其受体对女性肿瘤的发生、发展、治疗及预后有着和其他肿瘤不同的关系。卵巢是性激素的产生器官，又是性激素作用的靶器官，雌孕激素及其受体是如何影响卵巢癌的发生发展，是目前研究热点之一。

　　免疫组化研究发现卵巢癌中雌激素受体浓度较高，部分学者认为这部分患者可能对激素治疗有反应。但在卵巢上皮性癌中雌孕激素受体表达状态和预后有什么关系，国内研究报道不多。卵巢上皮性癌中尤以浆液性癌最为常见，本文对浆液性卵巢癌中雌孕激素受体的表达及与浆液性卵巢癌的临床生物学特征之间关系进行研究，以探讨雌激素受体(estrogen receptor, ER)、孕激素受体(progesterone receptor, PR)在卵巢癌浆乳癌中表达的意义。

　　1资料与方法

　　11一般资料

　　选择19841~20037月在我院妇科收治的浆液性卵巢癌48例,术前未进行任何化疗，初次在我院诊断、手术并治疗。按FIGO(1985)进行临床手术分期，行卵巢癌肿瘤细胞减灭术，术后均经病理证实,按标准的化疗方案进行。平均年龄543(21~76)岁，未绝经19例，已绝经29例。5例合并高血压，3例合并糖尿病，3例有恶性肿瘤史，1例有恶性肿瘤家族史，生存期为首次手术日期至死亡或随访终止日期。随访时间自初次手术截止到2004年1月,随诊13~139个月,中位随诊62个月。卵巢浆液性囊腺瘤12例，平均年龄45(25~75)岁。正常卵巢10例。48例浆液性卵巢癌病例分布情况见表1。

　　表148例卵巢癌的临床情况(n)

　　分期病理分级G1G2G3淋巴转移未转移转移总例数Ⅰ63110010Ⅱ230505Ⅲ3111672330Ⅳ021123

　　2006年2月刘晨等：浆液性卵巢癌中雌孕激素受体表达及预后关系探讨第1期2006年2月河北北方学院学报(医学版)第1期12抗体

　　单克隆抗体ER1D5;单克隆抗体PR1A6;生物素化羊抗鼠IgG1(Biotinylated second antibody );过氧化物酶标记的链霉亲和素(streptavidinperoxidase)均购自美国Santa Cruz公司。

　　13方法

　　采用SP法免疫组化，石蜡切片用001mol枸橼酸钠及水浴修复抗原，羊血清封闭非特异性抗原，3，3二氨基联苯胺(DAB)显色。每例标本连续切取5μm 切片5张，一张用于HE染色由病理科医师重新阅片核实病理诊断，一张加PBS抗作为阴性对照，两张切片分别用于ER、PR染色测定，同时选取正常子宫内膜作为阳性对照。

　　因所选病例例数偏少无法作统计学分析,所以将FIGO分期中Ⅰ、Ⅱ合并为早期,Ⅲ、Ⅳ期合并为晚期,符合临床分期和统计学要求。

　　14结果判定标准

　　光镜下观察细胞核内有桔黄色或棕黄色颗粒存在者为阳性细胞;低倍镜下随机选取5处典型肿瘤部位，高倍镜下(×400)各计数100个癌细胞，计算5个高倍视野中的阳性癌细胞百分数均数，雌、孕激素受体染色阳性细胞百分数≤20%者为受体阴性，>20%者为阳性[1]。

　　15统计学分析

　　采用SPSS软件包及SAS81软件包。用logrank方法检验生存差异，用单因素方差分析各因素与生存的关系，预后分析采用多因素方差cox比例风险模型，P<005为差异有显著性。

　　2结果

　　2148例卵巢癌患者临床生存分析见表2。表248例临床因素与生存情况

　　22雌孕激素受体分布及阳性率

　　在ER、PR免疫组化染色切片中，可见棕黄色或橘黄色颗粒位于细胞核内，胞浆和胞膜未见染色颗粒。正常卵巢、卵巢浆液性囊腺瘤、浆液性卵巢癌各受体均有表达,但阳性率不同。PR在三组间表达经χ2检验差异均有显著性(P<005) 。ER在良性与正常、恶性与正常间比较差异有显著性(P<005)。但良性与恶性表达之间比较差异无显著性,见表3。表3雌孕激素受体表达分布情况表

　　受体分布PR(+)正常良性恶性PR(-)正常良性恶性ER(+)正常良性恶性ER(-)正常良性恶性阳性例数(n)〖3〗1010200228〖10〗104130835阳性率(%)〖3〗1008333*4167*016675833〖10〗1003333**2708**066677292总例数(n)〖3〗101248101248〖10〗101248101248注：*各组间PR表达P<005,有显著性差异，**ER表达P>005,无显著性差异。

　　23卵巢癌中雌、孕激素受体表达和生存关系

　　48例病例中对PR、ER表达与生存关系行单因素分析，并行LogRank检验。PR: χ2=00173 ，P=08952，P>005，差异无显著性。ER： =11935，P=02746，P>005，差异无显著性。但PR阳性表达的生存中位月(405个月)明显高于其阴性表达者(18个月),见表4。表448例中卵巢癌中雌、孕激素受体表达和生存关系对48例中PR、ER阳性率行卡方检验，孕激素受体在临床分期、病理分级、淋巴转移中表达经检验χ2值分别是：12218、00032、06893，P值分别是：02690、09984、04046，差异无显著性，P值均>005。雌激素受体在临床分期、病理分级、淋巴转移中表达经检验χ2值分别是：04316、09005、02512, P值分别是:05112、06375、06163, P值均>005,差异无显著性，见表5。

　　3讨论

　　性激素主要是通过其相应受体发挥生物学效应,临床上依据受体状态,对乳腺癌和子宫内膜癌判断预后并进行内分泌治疗,能显著提高疗效和3年生存率。目前研究发现ER、PR在卵巢上皮性肿瘤有一定阳性表达率，但各家报道表达率不一致。雌孕激素受体在卵巢上皮性肿瘤中的生物学功能尚未十分清楚。表548例卵巢癌雌孕激素受体表达和分期、病理分级、淋巴关系

　　〖3〗临床分期早期晚期病理分级G1G2G3淋巴转移无转移有转移PR阳性(n)812587119〖2〗阴性(n)721711101216〖2〗阳性率(%)53333636416742114118478336ER阳性(n)5826576〖2〗阴性(n)10251013121619〖2〗阳性率(%)33332424166731582941304324〖2〗总例数(n)15331219172325注：P值均>005, 无显著性差异

　　最早发现雌激素促进鼠卵巢上皮有丝分裂指数增加的报道始于1942年，以后的研究发现雌激素对于不同种属包括人类卵巢上皮都有促进生长作用，还可以刺激排卵后卵巢上皮修复作用，而雌激素对于相同来源的卵巢上皮癌细胞也有相同的促进作用。反过来卵巢上皮性肿瘤细胞中有雌激素受体表达，不仅可以提示雌激素与肿瘤生长有关系，也说明肿瘤仍保留了其来源的正常卵巢上皮细胞的调控机制，这一特征通过研究也获得证据。如使用雌激素刺激卵巢癌细胞系OVCAP3细胞后，可以表现出雌激素的典型作用，即细胞合成孕激素受体作用[2]。许多研究表明卵巢癌的发生发展是内分泌相关的、激素依赖的，但雌激素是如何促进卵巢癌的发生发展，目前认识不一[3~5]。

　　多数研究结果支持雌激素可促进卵巢表面上皮细胞及上皮性卵巢癌细胞在体内及体外增殖,并具有时间-浓度-效应关系,且雌激素对正常卵巢表面上皮细胞促进增殖能力较恶性上皮细胞强[6]。

　　然而孕激素可能作用相反。孕激素进入细胞核，直接在细胞核内与受体结合，激活的受体作为转录调节蛋白与激素反应成分特异的核DNA片段结合，进而转录合成mRNA，进入细胞浆合成各种特异性蛋白质，促进卵巢癌细胞分化、抑制癌细胞生长[7]。经过数项病例对照研究口服避孕药对防止卵巢上皮癌的发生有重要作用，可使卵巢癌发生危险率降低40%，该作用也与服用避孕药的时间长短有关[8]。

　　Formelli F等[7]成功的动物实验证明孕激素受体有效地抵抗人卵巢癌细胞在鼠体内移植。视黄醛类衍生物与雌孕激素受体同属于核受体超家族一员(即甾体激素/甲状腺激素受体超家族的成员)，在体外能通过诱导凋亡抑制不同癌细胞系如：人乳癌细胞、白细胞、视神经母细胞瘤细胞[9~11]等。因此在临床广泛用于治疗各种癌症,由此推断诱导凋亡可能是孕激素治疗卵巢癌关键作用之一[12]。

　　Kommoss等[13]报道87例FIGO分期Ⅲ/Ⅳ期上皮性卵巢癌，生化方法检测PR阳性率为66%，而免疫组化方法检测仅有31%PR(+)，但无论哪种方法，PR阳性患者预后明显优于阴性者。Hempling等[14]对67例晚期上皮性卵巢癌患者的年龄、雌激素受体、孕激素受体、术后残余癌等因素的分析发现，463%的肿瘤PR阳性，PR水平是独立预后因素，PR阳性者无进展性生存期较长。卵巢癌移植裸鼠模型的研究[15]结果提示，早期癌的PR含量高于晚期癌，子宫内膜样癌PR含量高于其他病理类型，且在此种类型中PR与ER浓度明显相关(P<00001)，PR含量较高者预后较好。Sevelda等[16]用DCC方法研究179例FIGO分期III、IV期原发性卵巢癌患者的ER、PR情况，319%PR(+)。术后化疗疗效与PR水平显著相关。组织学分级、残余癌、年龄和PR含量是预后相关因素，尤其是PR含量对术后残余癌灶直径≤2cm的患者预后具有显著意义。

　　Munstedt K[17]等用免疫组化方法研究了1982~1996 年间的186名浸润性卵巢癌患者ER/PR的分布和组合(ER+PR+, ER+PR-, ER-PR+, and ER-PR-)情况，并随访1~58年(中位数24年)观察预后。有PR表达结合组与无PR表达组相比，预后好。特别是ER-PR+组合有良好的预后，在相对预后好(分期早：Ⅰ期Ⅱ期，术后残留≤2cm，腹水少，高分化)组中比较，ER-PR+ 5年存活率显著高于其他受体组合，在预后差(分期晚、术后残留>2cm)组中比较，5年存活率分别为1/3(ER-PR+)、3/20(ER+PR+)、3/19(ER+PR-)、2/14(ER-PR-)。用多因素回归分析和残存(residual)分析去除已知的影响预后的因素如：肿瘤分期、残存肿瘤大小、肿瘤分级、满意的术后治疗等后，ERPR+表型仍显示显著性存活优势。有两点可以解释：①雌激素反应阳性细胞可以有效的修复DNA，避免凋亡相关的克隆表达和出现耐药。②雌激素阳性肿瘤和肿瘤增生指标Ki67高表达密切相关。而孕激素促进细胞分化和凋亡，抑制DNA合成和细胞分裂。

　　临床中已将ER、PR作为乳腺癌、子宫内膜癌预后指标，综上所述对卵巢上皮性癌的预后似乎也有价值。然而Geisler等[18]却提出不同见解，他认为ER、PR状态对卵巢癌的意义还是有争论的。他总结前人研究结果发现这些病例包括了不同类型肿瘤，虽然有些学者只研究上皮性癌，但包括低度恶性肿瘤和各种组织类型，因而不能肯定这些研究结果对卵巢癌某一特殊组织类型有意义。Geisler等限制研究对象为初次肿瘤细胞减灭术分期为Ⅲc期浆液性卵巢癌病例，包括G1期。采用和其他研究者一致的生化法测定胞浆中受体蛋白浓度。其结果显示随分级升高，死亡率没有下降;各级之间ER浓度没有显著性差异。低ER含量预后相对好，PR状态与预后无关。 FischerColbrie等[19]用DCC方法研究108例原发性卵巢上皮癌，29%PR(+)，PR情况与患者生存情况无关。

　　本文用免疫组化法研究了浆液性卵巢癌组织中ER、PR表达情况，结果提示ER、PR阳性表达与预后无关，和Geisler等的结果一致，但与其他学者不一致，差异何在?本研究中PR阳性表达患者的中位生存月明显高于阴性表达者，是否应该作单一病理类型卵巢癌的多种测定受体方法的前瞻性研究?或者选取更多的病例，并按照1年、3年和5年生存率进行比较，才能客观的评价ER、PR的表达对卵巢癌的明确意义。

　　卵巢本身既是激素分泌器官又是靶器官，虽然各家学者都希望找到卵巢癌激素治疗依据，然而从研究方法到结果却不太不一致。实验室中单独用雌孕激素对卵巢癌细胞系的作用似乎已有结论，卵巢微环境可能比较复杂，激素的使用比乳腺或子宫更为困难，研究卵巢局部激素表达及受体表达可能更有意义。

　　参考文献

　　1卢晓梅，陈淑媛，黄受方，等.乳腺癌石蜡切片中显示雌孕激素受体方法和阳性结果判断标准的探讨[J].中华病理学杂志，1996,25(6):329331

　　2曹泽毅.中华妇产科学[M].北京：人民卫生出版社, 2000.15071509

　　3Shull J D,Rizzino A, Pennington K I, et al.17βestradiol growth factors and the regulation of GH4C1 pituitary tumor cell proliferation[J].Proc Am Assoc Cancer Res, 1993,34:237240

　　4Choi K C,Kang S K,Tai C J, et al.Estradiol up regulates antiapoptotic bcl2 messenger ribonucleic acid and protein in tumorigenic ovarian surface epithelium cells[J].Endocrinology, 2001,142:23515239

　　5Keithn B M,Bonavidda B.Inhibitory effects of 17βestradiol and progesterone on ovarian carcinoma cell proliferation:a potential role for inducible nitric oxide synthase[J]. Gynecol Oncol,2001,82:127131

　　6Viqar SY,Gregory U,Samuel C, et al.Expression of receptor and growth responses to key reproductive hormones in normal and malignant human ovarian surface epithelilal cells[J].Cancer Res,2001,61:67686776

　　7Formelli F,Cleris L.Synthetic retinoid fenretinide is effective against a human ovaeian carcinoma xenograft and potentates cisplatin activity[J].Cancer Res, 1993,53:53745378

　　8曹泽毅.中华妇产科学[M].北京：人民卫生出版社, 2000. 15101512

　　9Marth C,Daxenbichler G,Dapunt O.Synergistic antiprolif

　　erative effect of human recombinant interferons and retinoic acid in culturede breast cancer cells[J].J Natl Cancer Inst, 1986,77:11971202

　　10Chen ZX, Xue YQ, Zang RF, et al.A clinical and experimental study on alltrans retinoic acidtreated acute promyelocytic leukemia patient[J].Blood, 1991,78:14131421

　　11Formrlli F, Carsana R, Costa A,et al.Plasma retinal level reduction by the synthetic retinoid:a one year followup study of breast cancer patients[J].Cancer Res, 1989,49:61496157

　　12Moon RC,Mehta RG, Detrisac CL.Retinoids as chemopreventive agents for breast cancer cells[J].Cancer Detect Prev, 1992,16:7381

　　13Kommoss F, Pfisterer J, Thome M, et al.Steroid receptor in ovarian carcinoma:immuneohistochemical determination may lead to new aspects[J].Gynecol Oncol,1992,47:317322

　　14Hempling RE, Piver MS, Eltabbakj GH, et al.Progesterone receptor status is a significant prongostic variable of progressionfree survival in advanced epithelial ovarian cancer[J].Am J Clin Oncol,1998,21(5):447451

　　15Langdon SP,Gabra H,Bartlerr JM, et al.Funcrionality of the progesterone receptor in ovarian cancer and its regulation by estrogen[J].Clin Cancer Res,1998,4(9): 22452251

　　16Sevelda P,Denison U,Schemper M,et al.Oestrogen and progesterone receptor content as a prongostic factor in advanced epithelial ovarian cancinoma[J].Br J Obstet Gynecol, 1990,97(8):706712

　　17Munstedt K, Steen J, Knauf AG, et al.Steroid hormone receptors and long term survival in invasive ovarian cancer[J].Cancer,2000,89(8):17831791

　　18Geisler JP,Wiemann MC,Miller GA, et al.Estrogen and progesterone receptor status as prongostic indicaroes in patients with optimally cytoreduced stage Ⅲc serous cystadenocarcinoma of the ovary[J].Gynecol Oncol,1996,60:424427

　　19FischerColbrie J,Witt A,Heinzl H, et al.EGFR and seroid receptors in ovanrian carcinoma comparison with prongostic parameters and outcome of patients[J].Anticancer Res,1997,17(1B):613619