促红细胞生成素在子宫腺肌病组织的表达意义

　　作者：陈华 马生秀 作者单位：1.青海大学医学院;2.青海大学附属医院妇科

　　【摘要】 目的 观察促红细胞生成素(EPO) 在子宫腺肌病异位内膜组织的表达。方法 采用免疫组织化学技术检测38例子宫腺肌病(疾病组)异位内膜及34 例正常子宫内膜(对照组)EPO 的表达强度,并对比其差异。结果 EPO在子宫腺肌病异位内膜的表达为(8.79 ±2.54),明显高于正常对照组的(4.26 ±1.99),差异有高度显著性( P < 0. 01) ; EPO在腺肌病组、正常对照组的增殖期和分泌期表达相比,差异均无显著性(P >0.05) 。结论 EPO在腺肌病患者异位内膜表达显著增强,提示EPO可能促进异位内膜和其周围组织的新生血管形成。 陈华(1979～)，女，汉族，河南籍，住院医师，硕士研究生

　　【关键词】 子宫腺肌病 促红细胞生成素 免疫组织化学 内皮生长因子

　　SIGNIFICANCE OF ERYTHROPOIETIN EXPRESSION IN

　　ADENOMYOSIS

　　Chen Hua1, Ma Shengxiu2

　　(1.Qing hai Universitg Medical College;

　　2.The Department of Gynecology , Qing Hai University Affiliated Hospital)

　　Abstract Objective To investigate the expression of erythropoietin ( EPO) in adenomyosis. Methods Endometrium specimens were obtained from ectopic endometrium in 38 cases with adenomyosis and 34 normal uterus. Expressions of EPO in these paraffin embraced specimens were examined by immunohistochemistry. Results expressions of EPO in endometrium of adenomyosis were strongly higher than those in normal endometrium. Expressions of EPO in adenomyosis were(8.79 ±2.54), that was significantly higher than(4.26 ±1.99)in normal endometrial ( P < 0. 001) . Secretary and Proliferative endometrial between two teams have no significant difference( P > 0. 05).Conclusion The expressions of EPO in adenomyosis was markedly increased and suggest that it may take part in the formation of newer blood vessel.

　　Key words Adenomyosis Erythropoietin Immunohistochemistry Endothelial growth factor

　　近年研究表明,促红细胞生成素(EPO)是参与调控血管生成的血管生长因子，对异位内膜的血管形成起重要的作用，必要的血运及营养支持是异位内膜组织种植成功的关键。我们用免疫组化检测了EPO在子宫腺肌病组织的表达,以期从新生血管形成上探讨子宫腺肌病的发病机理。

　　1 材料与方法

　　1. 1 材料

　　取青海大学附属医院妇科2007 年3月～2008 年1 月手术切除且经病理确诊为子宫腺肌病患者的异位内膜组织34 例，其中增殖期18 例,分泌期16 例;年龄27～53岁,平均41.9 岁。另取同期病理诊断内膜正常的对照子宫内膜38例(内异症、异位囊肿者除外) ，其中增殖期21 例,分泌期17 例;年龄31～57 岁,平均43.3岁。组间年龄分布无差异( P > 0. 05) 。纳入实验的患者术前3 月内均未服用过激素类药物或放置宫内节育器。

　　1. 2 取材

　　取正常子宫内膜、腺肌病病灶(包括异位内膜及周围子宫肌层)各1 份。标本立即置4 %中性甲醛中固定,常规石蜡包埋,行5 μm 厚连续切片，组织块经多聚甲醛处理(含1ml/ LDEPC)。

　　1. 3 EPO 检测

　　严格按试剂盒说明操作。免疫组化用微波枸橼酸盐修复抗原,DAB 显色,同时用PBS 代替一抗作为染色的阴性对照,用已知的EPO 染色阳性的胎儿肾脏组织切片作为阳性对照。鼠抗人单克隆抗体(工作浓度1 :100)，SABC免疫组化试剂盒均购自武汉博士德生物工程公司。

　　1. 4 结果判断

　　高倍显微镜(10 ×40) 下观察细胞着色情况,胞质、胞核出现黄色或棕黄色者为阳性细胞。综合阳性细胞所占比例和染色强度进行半定量判定，评分标准[1]:每张切片任意选5 个视野,观察其阳性细胞表达强度,无表达者为阴性(0 分) ,阳性颗粒呈浅黄色者为可疑阳性(1 分) ,浅棕色者为弱阳性(2 分) ,棕黄色者为阳性(3 分) ,棕褐色者为强阳性(4 分) 。计算阳性细胞百分数(5 个视野的平均数) ,无表达者为阴性(0 分) ,1%～15%者为可疑阳性(1 分) ,16 %～50%者为弱阳性(2 分) ,51%～85%者为阳性(3 分) ,86%～100%者为强阳性(4 分) 。按公式[阳性细胞表达强度×阳性细胞百分数) / 2 ]计算该标本的阳性指数。

　　1. 5 统计学处理

　　用SPSS 11.5统计学软件, 结果以平均值±标准差即x±S表示,采用t 检验。

　　2 结果

　　EPO 在腺肌病组中以阳性或强阳性表达为主(8.79 ±2.54) ,棕黄色颗粒集中于胞质,胞核少量表达,明显高于对照组(4.26 ±1.99) ,差异有显著性( P < 0.01) ; 腺肌病组增殖期内膜的阳性指数(8.38±2.42)明显高于对照组(4.11±1.79)，差异有显著性( P < 0.01);而且腺肌病组分泌期内膜的阳性指数(9.25±2.67)也显著高于对照组(4.38±2.17)，差异有显著性( P < 0.01);腺肌病组增殖期内膜的阳性指数(8.38 ±2.42) 稍低于同组分泌期(9.25 ±2.67) ,差异无显著性( P > 0. 05) 。EPO 在正常对照组增殖期内膜与分泌期内膜上的表达差异无显著性( P > 0.05) ，见表1。表1EPO 在腺肌病组、正常对照组的表达

　　3 讨论

　　子宫腺肌病是一种以子宫内膜腺体与间质侵入子宫肌层，子宫内膜—肌层界面被破坏为特征的疾病。近年来,随着研究的深入 ,对子宫腺肌病的发病机制有了新的认识 ,尤其在新生血管形成方面对该病有了进一步的阐释。

　　EPO是一种糖蛋白激素,由165个氨基酸组成, 早期由胎肝产生,后逐渐转移至肾脏产生,成年后主要由肾小管间质细胞分泌。作为一种细胞因子广泛地参与了多种细胞的生长和凋亡等各种生理和病理过程, EPO其作用也不仅仅是促进红系细胞的发育,而且参与了抗凋亡、抗缺氧、促进新生血管生成等病理生理学过程[2]。

　　本研究结果显示, 腺肌病患者异位内膜腺上皮EPO的表达强度明显高于对照组，而且EPO主要集中于子宫内膜腺体细胞，这与韩燕华等[3]报道相似，推测EPO 的这种异常增高可能参与了腺肌病的发病过程。子宫腺肌病患者异位内膜可能因EPO过度表达而表现出比正常子宫内膜更强的血管生成能力，腺肌病患者EPO表达增强提示腺肌病中血管生成处于较活跃的状态，子宫内膜间质血管渗透性增加，并导致间质水肿和纤维素沉积，可以诱导血管生成，为子宫内膜侵入子宫肌层创造条件，异位病灶具有很强的血管生成能力得以存活，使异位内膜获得血供而进一步侵袭、发展，病灶不断扩大，加速异位内膜的种植。

　　同时本研究显示，EPO的表达主要局限于子宫内膜腺上皮，在整个月经周期中，子宫内膜腺上皮均有EPO的表达。腺肌病患者腺上皮细胞EPO表达强度于分泌期偏高,这与Yokomizo 等[4] 研究结果相似，发现整个月经周期的子宫内膜都表达EPO，而且EPO 浓度在分泌期比增殖期要高,在增殖中期开始增加,并在增殖晚期和整个分泌期继续增加。推测因腺肌病是雌激素依赖性疾病,子宫产生的EPO可能是以雌激素依赖模式来调节并参与子宫内膜的周期性血管新生,其子宫内膜合成雌二醇、孕酮能力增强或其受体表达增加,使局部激素水平上升,从而导致EPO表达在分泌期偏高。

　　异位内膜细胞发生异位种植时 ,异位环境对异位内膜细胞是一种不良刺激,会迅速表达EPO，以自分泌或旁分泌方式刺激周围组织中的血管内皮细胞 ,促进新生血管形成，此时内膜腺体细胞中 EPO 的强表达可能就是对这种外界刺激的应激反应。 EPO可能激活异位内膜局部及其周围的血管生成，从而形成一独立的血管网，并从中获取丰富的血供，以维持其存活及生长。推论血管生成可能在子宫内膜侵入子宫肌层并于肌层内继续生长的过程中发挥重要作用，是异位病灶形成的必要条件，这与蔡国青等研究[5]结果相似。可以推断，EPO 可能是子宫内膜周期变化的生长因子之一,参与增殖周期循环过程和内膜的分化过程。

　　EPO可能是一种较新的促血管生成因子,在体内、体外均能刺激内皮细胞的增生,参与调控血管生成重要的血管生长因子，它在组织中的表达反映了该组织的血管生成活性程度。推测EPO可能参与腺肌病的血管形成。

　　【参考文献】

　　[1] Watanabe H ,Kanzaki H ,Narukawa S. Bcl-2 and Fas expression in eutopic and ectopic human endometrium during the menstrual cycle in relation to endometrial cell apoptosis[J ].Am J Obstet Gynecol ,1997 ,176 :360-368

　　[2] Ribatti D ,Marzullo A ,Nico B ,et al. Erythropoietin as an angiogenic factor in gastric carcinoma[J]. Histopathology,2003,42 :246-250

　　[3] 韩燕华　周应芳　郑淑蓉. 子宫腺肌病患者血管内皮生长因子表达的研究[J ].中华妇产科杂志，2002，9 :539-541

　　[4] Yokomizo R ,Matsuzaki S ,Uehara S , et al. Expression of erythropoietin and erythropoietin receptor in peritoneal endometriosis[J ]. Mol.Hum.Reprod ,2002 ,8(5) :441-446

　　[5] 蔡国青 ,陈必良. 促红细胞生成素在子宫内膜异位症组织的表达[J ].现代妇产科进展， 2004，7：284-286