香附对未孕大鼠离体子宫肌收缩的影响

　　作者：李志强，马力扬，徐敬东，杨慧霞 作者单位：(西北民族大学医学院生理教研室，甘肃兰州 730030;首都医科大学基础医学院生理系，北京 100069;兰州市妇幼保健院儿科，甘肃兰州 730030)

　　【摘要】 目的 探讨香附对未孕大鼠离体子宫平滑肌条运动的影响及其机制。方法 选用Wistar雌性未孕大鼠60只，体重250-300g，用Biolap410生物机能仪记录正常子宫平滑肌肌条收缩运动，并分别用苯海拉明(2×10-6mol/L)、酚妥拉明(2×10-6mol/L)、异搏定(2×10-7mol/L)、吲哚美辛(2×10-5mol/L)作用于肌条5min后，加入香附水煎醇沉液(以下简称香附)以及单用香附，观察对离体子宫平滑肌运动的影响并分析作用机制。结果 香附减弱未孕大鼠离体子宫平滑肌的收缩运动，收缩波的频率减慢，振幅减小，持续时间缩短。结论 香附减弱未孕大鼠离体子宫平滑肌的收缩运动，该作用可能是通过前列腺素的合成与释放，与L型钙通道、H1受体、α受体无关。

　　【关键词】 大鼠;离体子宫平滑肌;香附;苯海拉明;酚妥拉明;异搏定;吲哚美辛

　　Effect of nutgrass galingale rhizome decotion on contractile activity　of uterine smooth muscle strips of nonpregnant rats in vitro

　　Li Zhiqiang, Ma Liyang, Xu Jingdong, Yang Huixia

　　(Department of Physiology, Northwest University for Nationalities, Lanzhou 730030;Department of Physiology, Capital Medical University, Beijing 100069;Department of Pediatrics, Lanzhou Maternal and Child Health Hospital, Lanzhou 730030, China)

　　ABSTRACT: Objective To study the effects of nutgrass galingale rhizome decotion on contractile activity of uterine smooth muscle strips of nonpregnant rats. Methods We selected 60 Wistar nonpregnant rats of weight 250-300g to record the effects of nutgrass galingale rhizome decotion (1.0g/L, 2.0g/L, 4.0g/L, 8.0g/L) on contractile activity of uterine smooth muscle strips of nonpregnant rats with Biolap 410 Biological System. Four antagonists, diphenhydramine(2×10-6mol/L), phentolamine (2×10-6mol/L ), verapamil (2×10-7mol/L), and indomethacin (2×10-5mol/L) were used to study their mechanisms respectively. Results Water extract of nutgrass galingale rhizome (4×10-3kg/L) could significantly weaken uterine contractile activity of nonpregnant rats, lessen the frequencies, shorten the duration and lower the amplitude of contractile activity. Conclusion The effect of nutgrass galingale rhizome on contractile activity of uterine smooth muscle strips in rats may be mainly associated with prostaglandin synthese or release nothing with Lvoltagedependant calcium channels, H1 receptor or α receptor.

　　KEY WORDS: rat; isolate uterine smooth muscle; nutgrass galingale rhizome; diphenhydramine; phentolamine; verapamil; indomethacin

　　香附，异名雀香、莎草根等，为莎草科植物莎草(Nutgrass galingale rhizome)的干燥根茎。本品味辛、微苦、微甘，性平，具有行气解郁、调经解痛之功效。香附醇提取物对注射酵母菌及内毒素引起的大鼠发热有明显的解热作用，并有起效快、持续时间长的特点[12]。此外，其挥发油对小鼠正常体温有明显的降温作用。其解热镇痛有效成分可能为三萜类化合物，香附的有效成分为α香附酮，香附流浸膏能抑制豚鼠、家兔、猫、犬等离体已孕及未孕子宫的收缩[3],但有效作用机制尚未明确。本研究将探讨其可能机制。

　　1 材料与方法

　　1.1 动物及离体子宫肌条标本准备 成年未孕Wistar大鼠60只，体重250-300g，由兰州医学院实验动物室提供(合格证书：医动字第3676494号)。动物于实验前72h皮下注射乙烯雌酚0.5mg/kg，人工造成动情期以提高子宫对药物的敏感性。猛击大鼠头部致晕厥，游离卵巢及子宫分叉处之间的中段子宫，沿系膜纵轴剖开子宫角，经Krebs缓冲液漂洗后，平铺固定在盛有石蜡的培养皿中，加入Krebs液并持续供给950mL/L O2和50mL/L CO2混合的标准气体。在石蜡盘中，用固定的两片平行刀片沿平滑肌纤维的纵行方向取宽2mm的肌条，用大头针固定两端，以肌条平展为宜，用手术缝线将肌条扎紧打结，另一端打结后再结一个直径约0.5cm的环以备悬挂。扎线后的肌条长约5-8mm。将肌条分别安置在盛有5mL 37℃ Krebs 液的CW3恒温平滑肌肌槽中。

　　1.2 药品及配制 香附购于甘肃省黄河中药材批发市场，经过兰州医学院生药教研室周印锁教授鉴定后，按常规制备为1000g/L的水煎剂，于4℃冰箱内冷藏保存。使用时用250g/L NaHCO3调pH值为7.3-7.4，并稀释至其终浓度为100g/L。苯海拉明(江苏兴化制药厂，批号：00032331)，针剂20g/L;酚妥拉明(上海旭东海普药业有限公司，批号：20000502)，针剂10g/L;异搏定(上海禾丰制药有限公司，批号：00701)，针剂5g/L;吲哚美辛(江苏太仓制药厂，批号：990113)，于50g/L的NaOH溶液中溶解后，以10mol/L的盐酸滴定至pH为7.4，四种药品分别制备为2×10-6mol/L、2×10-6mol/L、2×10-7mol/L、2×10-5mol/L终浓度的溶液。

　　1.3 实验分组及方法 将大鼠随机分为5组，每只大鼠取4条平滑肌标本，将肌条按1.1中制备并分别安置在恒温平滑肌肌槽中，每个肌槽中分别盛有5mL 37℃ Krebs液。肌条在1g的前负荷下温育，每20min更换一次5mL新鲜的Krebs液(37℃)，待肌条的自发活动平稳后再加入药物。肌条平稳的自发活动设为正常对照组，之后累计加入香附100g/L50μL使其终浓度(指溶于肌槽中5mL溶液后的浓度)分别为1.0、2.0、4.0、8.0g/L，为单用香附组。肌条的自发活动平稳后分别加入苯海拉明、酚妥拉明、异搏定、吲哚美辛5min后，再加入香附(2.0g/L)为受体拮抗剂+香附组(给药组)。

　　1.4 结果记录及统计学处理 用Biolap410生物机能仪记录子宫平滑肌肌条收缩运动，计算给药前5min子宫平滑肌条的收缩波平均振幅和平均持续时间以及5min内收缩波频率作为对照值，给药后5min记录相同指标的数值作为效应值，单用香附组和给药组用变化指数表示[(效应值一对照值)/对照值×100%+3]。统计学处理数据以均数±标准差(±s)表示，使用SPSS 8.0软件进行统计学分析，单用香附组和给药组与正常对照组之间进行配对比较的t检验，检验水准为α=0.05。

　　2 结果

　　单用香附组(1.0、2.0、4.0、8.0g/L)子宫平滑肌收缩运动减弱，收缩波的频率减慢，振幅减小，持续时间缩短(表1)。在加入抑制前列腺素合成酶吲哚美辛后，香附对子宫平滑肌的作用减弱，与单用香附组相比无显著性差异(P>0.05);在加入L型Ca2+通道阻断剂异搏定后，香附抑制子宫平滑肌收缩振幅减弱，收缩波的频率与单用香附组比较无显著性差异(P>0.05);在加入α受体阻断剂酚妥拉明后，香附对子宫平滑肌的收缩活动无显著影响(P>0.05)，收缩波的持续时间与单用香附组比较有显著性差异(P<0.05);在加入H1受体阻断剂苯海拉明后香附对子宫平滑肌的作用被部分阻断，与单用香附组有显著性差异(P<0.05，表2)。

　　表1 香附对大鼠离体子宫平滑肌条收缩活动的影响(略)

　　Table 1 The effect of nutgrass galingale rhizome on uterine smooth muscle strips

　　*P<0.05， **P<0.01 vs. control; NGR: nutgrass galingale rhizome

　　表2 使用拮抗剂后香附对大鼠离体子宫平滑肌条作用的影响(略)

　　Table 2 The mechanism of using the antagonist on uterine smooth muscle strips

　　*P<0.05, **P<0.01 vs. NGR; ΔP<0.05，ΔΔP<0.01 vs. antagonist+NGR (data as changed indexes in the table); NGR: nutgrass galingale rhizome

　　3 讨论

　　香附为莎草科多年生草本植物莎草的根茎，性味辛、微苦、微甘，平，主归肝、脾、三焦经。具有疏肝理气,调经止痛的功效。李时珍称其为”气病之总司，女科之主帅”，临床应用十分广泛。以往的研究表明香附具有强心和雌激素样作用[1]，香附水提物有较强的镇痛作用，但解热效应不明显[2]。香附的化学成分复杂，药理作用广泛[3]。实验证明[45]香附的有效成分α香附酮能有效地抑制未孕大鼠离体子宫肌的自发性收缩，同时抑制缩宫素引起的离体子宫肌的收缩，并呈剂量依赖关系，是香附调经解痛的主要有效成分。香附可缓解缩宫素致小鼠子宫的激烈收缩，可减轻痛经时的疼痛症状。通过实验，确定了香附发挥较好镇痛作用的剂量，在同样的生药量下，确定了石油醚、乙酸乙酯部位为香附治疗痛经的有效部位。

　　本实验结果表明：香附可抑制大鼠离体子宫平滑肌的自发收缩活动，并不被酚妥拉明、苯海拉明、异搏定阻断，但可被吲哚美辛阻断。推测香附抑制大鼠离体子宫平滑肌条的收缩，可能与降低子宫平滑肌细胞内的前列腺素的合成与释放有关，而没有通过细胞膜上L型钙通道、H1受体、α受体。

　　基金项目：国家民委自然科学基金资助项目(No. 2002127)

　　【参考文献】

　　[1]欧润妹，邓远辉，李伟英，等. 香附不同溶剂提取物解热镇痛效应的比较 [J]. 山东中医杂志, 2004, 23(12):740742.

　　[2]邓时贵，邓远辉，李伟英，等. 香附乙醇提取物微囊化前后的解热效应比较 [J]. 中国中医急症, 2006, 15(3):295296.

　　[3]黄险峰，彭国平. 香附的化学成分及药理学研究进展 [J]. 中药材, 2003, 26(1):6568.

　　[4]温东婷，张蕊，陈世忠. 香附化学成分的分离及对未孕大鼠离体子宫肌收缩的影响 [J]. 北京大学学报(医学版), 2003, 35(1):110111.

　　[5]夏厚林，吴希，董敏，等. 香附不同溶剂提取物对痛经模型的影响 [J]. 时珍国医国药, 2006, 17(5):773774.