CD44、LN和PCNA在宫颈癌组织中的表达及临床意义

作者：任宝红

作者单位：哈尔滨医科大学附属第二医院妇产科，黑龙江 哈尔滨 150086

【摘要】  探讨CD44v6、LN、PCNA在宫颈癌组织中的表达与淋巴转移、临床分期及细胞分化程度的关系。方法 采用免疫组化方法，检测95例宫颈癌组织中的CD44v6、LN、PCNA单克隆抗体表达情况。结果 正常宫颈组织对CD44v6不表达；有淋巴结转移的宫颈癌组织对CD44v6呈过表达，阳性率为82.75%，无淋巴结转移的宫颈癌组织CD44v6的阳性表达率为40.90%；CD44v6阳性表达组伴有PCNA过表达和LN低表达，与CD44v6阴性表达组比较有显著性差异。结论 CD44v6表达有显著的组织特异性并且与宫颈癌淋巴转移有关；CD44v6表达与宫颈癌的组织分化程度有关而与临床分期无关。

【关键词】  细胞粘附分子CD44v6 层粘连蛋白 增殖细胞核抗原 免疫组化 宫颈癌

    Expressions and clinical meanings of CD44、LN、PCNA in cervical invasion cancer and metastasis potentiality

    REN Baohong,LI Peiling  (Department of Gynaecology and Obstetrics,the 2nd Affiliated Hospital,Harbin Medical Univercity,Harbin，Heilongjiang Province,150086,China）

    Abstract:Objective  To study expressions of CD44v6、LN、 PCNA in the cervical invasion cancer and their metastasis potentiality. Methods  Expressions of CD44v6、PCNA、LN were detected by immunohistochemistry SP method in 95 cases of cervical cancer. Results  In normal cervical tissues,there were not any expression of CD44v6.In pelvic lymph node metastasis group CD44v6 was expressed with a high positive rate of 82.75%.In the group without pelvic lymph node metastasis a lower positive rate of 40.90% was found.It was significantly different between t the two groups.In CD44v6 positive groups,the expression of PCNA was high and LN was low,compared with the CD44v6 negative group,there was significant difference between the two above groups. Conclusion  CD44V6 might associate with tumor metastasis. CD44v6 expression associated with histological classification but did not relate to cervix stage.

    Key words:CD44v6；LN；PCNA；Cervical carcinoman

    宫颈癌是女性生殖系统最常见的恶性肿瘤之一，主要转移途径为淋巴转移。CD44是人体内最主要的细胞黏附分子之一［1］，研究发现CD44v6在诱导细胞迁移方面起重要作用。本研究采用免疫组织化学的方法，选用发病率高、淋巴转移为主的宫颈癌做为研究对象，检测CD44v6、LN及PCNA在细胞膜、细胞核及基膜中的表达情况，旨在研究三者在宫颈癌组织中的表达与淋巴转移和临床分期及细胞分化程度的关系。

     1  材料与方法

    1.1  资料来源

    共收集我院及吉大二院2004～2007年宫颈鳞状细胞癌手术标本95例，年龄25～67岁,平均年龄46.8岁,依据1995年国际妇产科联盟(FIGO)的分期标准：Ⅰb 20例，Ⅱa 48例，Ⅱb 27例；高分化癌56例，低分化癌39例；淋巴转移者29例，无淋巴转移66例。所有患者取标本前均未经过放、化疗或其他特殊治疗。另取10例正常宫颈组织作为对照组。

    1.2  标本制备

    石蜡切片为4 μm；CD44v6、LN、PCNA单克隆抗体及SP试剂均购于迈新生物技术公司，全部操作按试剂盒说明书进行。

    1.3  染色及结果判定

CD44v6以细胞膜染色呈深黄色，细胞浆同时有阳性反应。阳性：＞20％肿瘤区域呈强染色，＞80％肿瘤区域呈弱染色，但细胞膜染色清晰；阴性，其它染色情况均为阴性。

    PCNA细胞核染色出现染色颗粒为阳性细胞。Ⅰ级为0～25％，Ⅱ级为26％～50％，Ⅲ级为51％～75％、Ⅳ＞75％，Ⅰ～Ⅱ级为弱表达，Ⅲ～Ⅳ级为强表达［2］。

    LN染色主要分布在基膜，以基底膜染成黄色为阳性。将基膜对LN表达情况分为3个型别。Ⅰ型：呈棕黄色染色后的基膜占基膜的75%以上，且完整、连续、厚实；Ⅱ型：呈棕黄色染色后的基膜占基膜的25%～75％，且不完整，部分断裂，较薄；Ⅲ型：呈棕黄色染色后的基膜占基膜的25%以下，且有明显断裂、缺损。

    1.4  统计方法

    采用卡方检验。

    2  结  果

    2.1  CD44v6在宫颈癌组织中表达的情况

    免疫组化结果显示10例正常宫颈组织不表达CD44v6，在宫颈癌巢周边的间质组织同样不表达CD44v6。在有淋巴转移的癌组织中CD44v6呈过表达，而在无淋巴转移的癌组织中呈低表达。CD44v6的表达与组织分化有关，与临床分期无关。组织分化程度：高分化阳性率37.50%（21/56），低分化阳性率76.92%（30/39），两组比较有显著性差异（P<0.01）；有淋巴结转移阳性率82.75%（24/29），无淋巴结转移阳性率40.90%（27/66），两组比较有显著性差异（P<0.01）。临床分期：Ⅰb阳性率40.00%（8/20），Ⅱa阳性率60.41%（28/48），Ⅱb阳性率55.56%（15/27），组间无统计差异（P＞0.05）。

    2.2  CD44v6与LN、PCNA之间的关系

    分别检测CD44v6阳性表达组织和阴性表达组织中LN、PCNA表达情况。表达结果为：CD44v6阳性表达组织对LN呈低表达，阳性率19.60%（10/51），对PCNA呈过表达，阳性率82.35%（42/51）；CD44v6阴性表达组织对LN表达则呈过表达，阳性率52.27%（23/44），对PCNA的表达阳性率为56.68%（25/44）。2组在LN表达和PCNA表达上都有显著性差异（P＜0.01）。

    3  讨  论

    CD44是一种分布极为广泛的细胞表面糖蛋白，在淋巴细胞、成纤维细胞中均表达。在不同细胞上CD44分子由于结构的不同而介导不同的功能，其主要作用在于参与细胞与细胞、细胞与间质之间的粘连；介导淋巴细胞归巢及细胞的迁移。CD44基因在转录表达时产生两种类型，即标准型（CD44S）和变异型（CD44V）。

    有资料证实，CD44v6在乳腺癌、结肠癌等组织中有表达且与淋巴结转移有关［3］。CD44v6阳性表达的肿瘤较阴性表达者恶性程度高,发展快,淋巴结转移率高,术后易复发,术后生存期短［4］。而本实验结果显示，CD44v6在有淋巴转移癌组织中呈过表达，而无淋巴结转移者呈低表达，且癌细胞分化组的CD44v6表达率也明显高于高分化组织，两组有显著性差异。可得出推断：在正常组织细胞中存在着癌基因和抑癌基因，两者相互制约。一旦基因发生突变，在表型和功能上出现异质性则会影响CD44基因的转录和表达，出现异常拼接，从而造成细胞的恶变。特别是糖基转移的改变，将影响细胞间识别、粘着及信息传递，甚至丧失接触性抵制，造成细胞无限增殖这种CD44的拼接体（特别是CD44v6）能利用淋巴细胞归巢的机制，使细胞在发生恶变的早期就在淋巴结中植入、定居及快速增殖。

    层粘连蛋白（LN）是细胞外具有粘附功能的糖蛋白,为BMs的内源性成分，主要由上皮细胞、内皮细胞分泌，分布在皮肤、肌纤维等多种组织的基底膜。有研究表明，LN参与调节细胞的形态、分化及细胞的迁移，在胚胎发育、器官形成、损伤修复及肿瘤时有异常表达［5］。CD44v6分子发生变异性拼接后，在某些肿瘤细胞中的异常表达加速了肿瘤细胞对分解酶的合成，从而使基膜大量被降解破坏，极易使肿瘤细胞发生迁移。

增殖细胞核抗原（PCNA）是反映细胞增殖状态的一个重要指标［6］，PCNA的合成和表达与细胞增殖活性密切相关。本组实验中，CD44v6阳性者伴有PCNA过表达，说明该组织细胞增殖活跃，恶性度高。PCNA作为与细胞分化相关的因素,可作为对预后估计和可否需用术后辅助化疗的指征之一。

    综上所述，作为有组织特异性选择的CD44v6，若在癌细胞中呈异常表达，可表明癌细胞增殖活性强，产生的分解酶多，降解基膜的能力大，这类细胞具有转移潜能。CD44v6、LN及PCNA的联合检测可作为肿瘤转移判定的生物学指标，有助于宫颈癌的早期诊断，及对转移潜能和预后的判断。

【参考文献】  ［1］ Liotta L A.Tumor invasion and metastases——role of the extracellular matrix:Rhoads Memorial Award lecture［J］.Cancer Res,1986,46（1):17.

［2］ 王冬,王占东,安晓汾,等.宫颈浸润癌组织中CD44v6、PCNA、CⅣ表达与转移潜能的关系研究［J］.实用癌症杂志,2000,7(4):388390.

［3］ Takeuchi K,Yamaguchi A,Urano T,et al.Expression of CD44 variant exons 810 in colorectal cancer and its relationship to metastasis［J］.Jpn J Cancer Res,1995，86(3):292297.

［4］ 邱小芬,王孝养,张培锋,等.CD44v6 and CerbB2 Expression in NonSmall Cell Lung Carcinomas and Its Significance［J］.临床肿瘤学杂志,2003,8(4):257260.

［5］ MaedaYamamoto M,Suzuki N,Sawai Y,et al.Association of suppression of extracellular signalregulated kinase phosphorylation by epigallocatechin gallate with the reduction of matrix metalloproteinase activities in human fibrosarcoma HT1080 cells［J］.J A gric Food Chem,2003,51(7):18581863.

［6］ Woods A L.The prognostic value of PCNA immunostaining ingastrointestinal lymphomas［J］.J Pathol,1990，16:342.