固本止哮方防治支气管哮喘的实验研究

　　作者：谢晓书，　张士卿 作者单位：462000 河南 漯河，漯河市第二人民医院儿科(谢晓书);730000 兰州，甘肃中医学院儿科(张士卿)

　　【摘要】 目的　观察固本止哮方对幼龄大鼠哮喘的预防作用。方法　取幼龄大鼠100只，筛选出60只，并按随机数字表法将其分为5组，空白组、模型组、固本止哮方高剂量组、固本止哮方低剂量组、固本咳喘胶囊对照组，每组12只。空白组、模型组生理盐水灌胃28 d，余各组灌药28 d。除空白组外，余各组制备哮喘模型(采用卵白蛋白腹腔注射致敏与雾化吸入激发的方法)。观察灌胃第14天对大鼠引喘潜伏期的影响，大鼠首次与1%卵白蛋白气雾接触是否出现哮喘症状并记录哮喘等级，比较激发后各组诱发哮喘(3级)发生率。结果　(1)用药灌胃预防14 d后与模型组比较，固本止哮方高、低剂量组引喘潜伏期较长且差异均有统计学意义(P<0.05);(2)大鼠首次与1%卵白蛋白气雾接触与模型组比较，固本止哮方高、低剂量组哮喘等级明显有减轻趋势，差异有统计学意义(P<0.05);(3)在激发第4、7天，与模型组比较，固本止哮方高、低剂量组3级哮喘发生率明显减低，差异有统计学意义(P<0.05)。结论　固本止哮方能延长大鼠引喘潜伏期，降低大鼠哮喘发生率，减轻哮喘发生程度，对幼龄大鼠哮喘具有较好的防治作用。

　　【关键词】 哮喘/治疗;　固本止哮方/治疗应用;　大鼠;　实验，动物

　　【Abstract】　Objective　To observe the effect of Guben Zhixiao prescription in the prevention of asthma in young rats.Methods　Take 100 young rats，but select only 60，who were divided into 5 groups randomly;the blank group and the model group were given physiological saline stomach irrigation for 28 days，the other 3 groups with 28 days of medicine irrigation.Except the blank group，asthma model was made in all the other groups(by egg albumin all(OVA) intraperitoneal injection sensitization and atomization inhalation stimulation).Observe the effect of irrigation in rat stomach on day 14 on the incubation period;when rats had contact with 1% OVA smog for the first time observe if there was symptoms of asthma and record the level，compare the asthma incidence(level 3) among the groups.Results　(1)After 14 days of irrigation and compared with the model group，Guben Zhixiao prescription in large or small dose had longer incubation period，which had significant difference(P<0.05).(2)Compared with the model group at the first time of contact between rat and 1% OVA aerosol，Guben Zhixiao prescription apparently reduced asthma level，with significant difference(P<0.05);(3)On 4 and 7 days of stimulation，and compared with model group in Guben Zhixiao prescription in large or small dose group，level 3 asthma rates had a significant decrease，with significant difference(P<0.05).Conclusions　Guben Zhixiao prescription can extend the incubation period in rats，reduce asthma rates，reduce asthma degree，and has good prevention and cure effect on the young rats asthma.

　　【Key words】　Asthma/treatment;　Guben Zhixiao prescription/treatment application;　Rat;　Experiment，animal

　　支气管哮喘是一种常见的、多发的慢性呼吸系统疾病，患病率有逐年上升趋势，严重威胁人类身体健康。根据全球哮喘防治创议统计数字，全世界有1.5亿人患有哮喘，每年死于哮喘的人有18万之多。国外人群哮喘患病率为5%～10%，国内约为1%，儿童可达3%左右[1]。因此，哮喘的防治已引起全世界的重视，世界卫生组织已将其列入全球防治战略。发挥中医未病先防，整体观念，辨证论治，发时治标，防时治本，多环节，多角度，多靶点调治等优势，是支气管哮喘防治的研究方向之一。

　　1　材料与方法

　　1.1　实验动物

　　选取SPF级SD幼龄大鼠100只，体质量(70±10)g，雌雄各半，由甘肃中医学院实验动物中心提供(合格证号：SCXK(甘)20040006)。整个实验过程在SPF级动物实验室(动物实验设施使用证号：SCXK(甘)200400060000916)中实施。

　　1.2　实验药品

　　卵白蛋白粉剂(上海升正生物技术有限公司，批号：100108);固本咳喘胶囊(合肥今越制药有限公司，批号：090730);磷酸组胺(上海中秦化学试剂有限公司，批号：100410);氯化乙酰胆碱(兰州爱华化工有限责任公司，批号：081020);固本止哮方(甘肃中医学院药剂教研室)。

　　1.3　实验动物筛选

　　100只大鼠放入雾化装置箱内，待其安静后启动超声雾化仪，向箱内喷入2%乙酰胆碱和1%磷酸组胺1∶1混合液，喷雾时间为30 s，观察并记录大鼠出现二级哮喘时间(参照哮喘症状评分[2]，1级为呼吸困难，2级为呼吸困难+咳嗽，3级为呼吸困难+咳嗽+跌倒，4级为死亡)，即引喘潜伏期，超过60 s为不敏感弃之，筛选出60只，雌雄各半备用。

　　1.4　分组

　　将60只大鼠按随机数字法分为5组(空白组、模型组、固本止哮方高剂量组、固本止哮方低剂量组、固本咳喘胶囊对照组)，每组12只。

　　1.5　模型制备

　　除空白组外，各组制备哮喘模型。第1、6、11天对实验大鼠行腹腔注射10%卵白蛋白生理盐水1 mL致敏(含卵白蛋白100 mg，氢氧化铝干粉100 mg);第14天，将大鼠置于雾化箱中，以3%卵白蛋白生理盐水行超声雾化吸入诱发哮喘发作，每日激发1次，每次30 min，每次激发至3级哮喘状态，即大鼠出现咳嗽、呼吸急促、腹肌紧张、点头运动等哮喘症状。连续激发7 d。

　　1.6　干预方法

　　空白组、模型组分别连续生理盐水灌胃，固本咳喘胶囊对照组按0.13 g/kg剂量灌胃，固本止哮方高、低剂量组分别按生药20、5 g/kg剂量灌胃，各组连续灌药28 d。各组于灌药7 d后制备哮喘模型，空白组腹腔注射相同剂量的生理盐水，给予相同剂量的生理盐水雾化。

　　1.7　观察指标

　　对各大鼠引喘潜伏期的影响，大鼠首次与1%卵白蛋白气雾接触哮喘等级变化情况及激发后各组诱发哮喘(3级)发生率。

　　1.8　统计学方法

　　所有数据采用SPSS 17.0统计软件包作统计分析，计量资料采用x-±s表示，组间比较采用方差分析，等级资料采用Ridit分析，计数资料采用Mann-Whitney U检验。P<0.05为差异有统计学意义。

　　2　结果

　　2.1　对各组大鼠引喘潜伏期的影响

　　见表1。表1　各组大鼠引喘潜伏期比较表1结果表明，在第1天筛选过程中各组大鼠的引喘潜伏期差异无统计学意义(P>0.05);用药灌胃预防14 d后，除空白组未做引喘潜伏期测定外，余各组大鼠引喘潜伏期均延长，组间比较差异有统计学意义(P<0.05)，固本止哮方高、低剂量组、固本咳喘胶囊对照组引喘潜伏期均长于模型组，差异有统计学意义(P<0.05)。固本止哮方高、低剂量组、固本咳喘胶囊对照组3组两两比较差异无统计学意义(P>0.05)。

　　2.2　大鼠首次与1%卵白蛋白气雾接触哮喘等级变化情况

　　见表2。表2　各组大鼠哮喘等级变化情况表2结果表明，空白组未与1%卵白蛋白气雾接触，未发生哮喘，余4组均发生哮喘;与模型组比较，固本止哮方高、低剂量组、固本咳喘胶囊对照组哮喘等级明显有减轻趋势，差异有统计学意义(P<0.05);与固本咳喘胶囊对照组比较，固本止哮方高、低剂量组哮喘等级有减轻趋势，差异无统计学意义(P>0.05)。固本止哮方高、低剂量组比较，差异无统计学意义(P>0.05)。

　　2.3　激发后各组诱发3级哮喘发生率的比较

　　在激发第4、7天，与空白组比较，其余各组的3级哮喘发生率明显增高，差异有统计学意义(P<0.01);固本止哮方高、低剂量组、固本咳喘胶囊对照组的3级哮喘发生率明显低于模型组，差异有统计学意义(P<0.05);固本止哮方高、低剂量组的3级哮喘发生率低于固本咳喘胶囊对照组，差异无统计学意义(P>0.05)。固本止哮方高、低剂量组3级哮喘发生率比较差异无统计学意义(P>0.05)。见表3。表3　激发后各组诱发3级哮喘发生率的比较

　　3　讨论

　　固本止哮方由黄芪、五味子、炒白术、乌梅、防风、银柴胡、补骨脂、女贞子、何首乌、炙甘草等组成，是导师张士卿根据中医基础理论在玉屏风散和过敏煎的基础上，结合现代药理研究和多年临床经验，精心筛选其相关药物化裁而成。导师认为：哮喘的病变部位主要在肺、脾、肾三脏，小儿肺脏娇嫩，脾常不足，肾常虚，而人体水液的正常代谢由肺脾肾三脏完成，肺为水之上源，通调水道，脾胃为水谷之海主运化水谷精微，肾者水脏，主津液，若三脏功能失调，则水液代谢障碍，痰浊内生(与现代过敏学说有关)，成为哮喘之夙根。其病机主要为正虚痰伏，邪阻肺络，遇感外邪而触发。治疗上主张扶正为主，兼以祛邪。

　　玉屏风散由黄芪、白术、防风3味中药组成，主治表虚卫阳不固所致的体虚易感风邪者，前两味药，以扶正为主，而防风则以祛邪为主，它可以提升患儿的“正气”以抵御外邪，补脾实卫，益气固表止汗，被称为“中药免疫调节剂”。现代药理研究证实：黄芪、白术能提高免疫球蛋白，促进抗体产生，促进体液免疫，对B淋巴细胞免疫功能具有明显的增强作用且对多种细菌有抑制作用。防风大分子多糖为水提液的主要成分，具有明显增强机体免疫功能的作用。

　　过敏煎是祝谌予名老中医之验方，由银柴胡、防风、乌梅、五味子、甘草5味药组成。该方具有御卫固表、抗过敏的功效。银柴胡、防风发散表邪，祛风解痉，乌梅、五味子收敛肺气，止咳平喘，一散一收，调节肺气，颇合肺的呼吸出入功能。现代药理研究证实：银柴胡具有抗炎解热作用，五味子能抑制肥大细胞脱颗粒，有拮抗炎性介质，抗变态反应，止咳祛痰作用。乌梅有增强机体免疫力，抗过敏作用，甘草能预防支气管哮喘的发作。

　　补骨脂、女贞子、何首乌：滋补肝肾，强壮腰膝，纳气平喘。现代药理研究证实：补骨脂能提高巨噬细胞的吞噬能力，提高机体非特异性免疫的能力。女贞子能增强免疫功能对炎症有明显的抑制作用。何首乌中提取的大黄酚，能促进肠管的运动，并能骤减神经的时值，促使神经兴奋，增加肌肉时值，使肌肉麻痹，起到解痉作用。无论从药物配伍还是从单味药性上研究，固本止哮方都具有提高机体免疫力，参与免疫调节、抵抗变态反应的作用，故可防治过敏性哮喘。

　　本实验结果表明：(1)用药灌胃预防后，大鼠引喘潜伏期均延长，且固本止哮方高、低剂量组与哮喘模型组比较均有意义。(2)大鼠首次与1%卵白蛋白气雾接触：固本止哮方高、低剂量组与哮喘模型组比较哮喘等级明显降低。(3)在激发第4、7天，固本止哮方高、低剂量组与哮喘模型组比较3级哮喘发生率明显减低。故通过对固本止哮方实验研究发现：固本止哮方具有延长大鼠引喘潜伏期，降低哮喘发生率及哮喘程度作用，能够较好的防治幼龄大鼠哮喘。

　　【参考文献】

　　[1]　陈撅珠.实用内科学[M].11版.北京：人民卫生出版社，2002：1556.

　　[2]　Shimojo N，Kohno Y，Katsuki T，et al.Diminished interferon-gamma(IFN-gamma) production by bacterial antigen-specific T cells in atopic patients[J].Clin Exp Immunol,1996,106(1)：6266.