快速诊断试剂在新生儿促甲状腺素检测中的应用

　　作者：余洁,肖鸽飞,吴洪秋　　作者单位：广东省珠海市妇幼保健院，广东 珠海

　　【摘要】目的：评价快速诊断试剂测定新生儿促甲状腺激素(TSH)的分析性能。方法：分别用化学发光免疫测定试剂盒、时间分辨免疫荧光测定试剂盒和金标快速检测试剂盒测定相应要求标本的TSH含量。结果：金标快速检测与时间分辨免疫荧光测定及化学发光免疫测定比较，检测效果更好，特异性与敏感性都比较高。结论：金标快速检测测定TSH具有重复性好、可报告范围宽、灵敏度高等优点，适合于临床应用。

　　【关键词】 快速诊断试剂;新生儿;促甲状腺素;检测

　　Applying of fast diagnosis reagent in the diagnosis of newborn's TSH

　　YU Jie， XIAO Ge-fei， WU Hong-qiu (Woman and Child Health Care Hospital of Zhuhai City， Zhuhai 519001， China)

　　Abstract： Objective To evaluation the analysis performance of the fast diagnosis reagent in the diagnosis of newborn's TSH. Method Chemiluminescence immunity determination reagent box， time resolution immunity fluorometric assay reagent box and golden sign fast examination reagent box were used to determine the TSH content of corresponding request specimens. Results Comparing to time resolution immunity fluorometric assay and chemiluminescence immunity determination， golden sign fast examination was better in the specificity and sensitivity of diagnosis. Conclusion Using golden sign fast examination for determinating TSH was better duplication， wider scope report and higher sensitivity， so it is suit for the clinical practice.

　　Key Words： Fast diagnosis reagent;Newborn;TSH;Determination

　　先天性甲状腺功能低下(俗称“呆小病”)是由于某些原因引起胎儿甲状腺受损，导致甲状腺激素合成不足。出生后表现为以神经系统发育不全为主的一系列发育障碍。由于新生儿的第二个生长发育期约在出生后1年，若在此时能及时诊断和治疗，则可使患儿生长和发育有明显改善， 而过了这个时期，婴儿中枢神经系统的病变将不可逆，因此早期的诊断是防治本病的关键。在我国新生儿中，先天性甲状腺功能低下的比例较高。根据2005年卫生部临床检验中心《新生儿筛查工作统计情况调查》报告显示，全国新生儿先天性甲状腺功能减低症患儿与正常新生儿之比为1∶2 707。 而在某些缺碘地区，先天性甲状腺功能低下的比例更高。为此，在《中华人民共和国母婴保健法》及其实施办法中已明确规定医疗保健机构应逐步开展新生儿疾病筛查，并将其列入母婴保健技术服务项目。我国从上世纪80年代初开始，已在北京、上海开展甲状腺功能减低症的筛查，到目前为止，新生儿疾病筛查已覆盖全国30个省、自治区、直辖市。但是由于条件的限制，在大部分的农村以及小城镇地区还没有广泛进行新生儿的促甲状腺素(TSH)筛查。

　　目前新生儿TSH常用的检测方法有酶联免疫吸附试验(ELISA)、酶免疫荧光测定(EFIA)、时间分辨免疫荧光测定(Tr-FIA)及化学发光免疫测定。这些方法虽然敏感，但对实验设备和试验操作要求较高。而金标快速检测试剂简便、快速，更适于基层单位开展，本研究将金标快速检测试剂与时间分辨免疫荧光测定及化学发光免疫测定进行比较，以评估其对新生儿TSH检测的性能。

　　1 材料与方法

　　1.1 试验样本

　　1.1.1 血清样本：广州市儿童医院采集的用于新生儿筛查的血清样本，共计100份。

　　1.1.2 干血斑样本：珠海市妇幼保健医院采集的用于新生儿筛查的血液样本制备的干血斑，共计100份。

　　1.2 试剂盒及检测方法

　　1.2.1 化学发光免疫测定试剂盒：美国Diagnostic Products Corporation公司生产。包被抗体为单克隆鼠抗人TSH，标记抗体为多克隆羊抗人TSH抗体。通过美国Diagnostic Products Corporation公司提供的IMMULITE 1000全自动免疫分析仪进行检测分析。临界值为10μIU/ml。

　　1.2.2 时间分辨免疫荧光测定试剂盒：芬兰Perkin Elmer Life Sciences PerkinElmerDELFLA 促甲状腺试剂盒。通过芬兰公司提供的Multilabel Counter 1420多功能免疫系统(型号 WALLAC 1420)进行检测分析。

　　1.2.3 金标快速检测试剂盒：珠海试剂有限公司生产。临界值为10μIU/ml。血清样本：向试管内加入150μl(3滴)样本稀释液，20μl血清样本，轻摇混匀，按试剂条上的箭头方向将试剂条插入试管中，15min后读取结果。干血斑样本：向试管内加入3～6滴样品稀释液，将带有干血斑的滤纸(直径5～8mm)完全浸入样品稀释液中，浸泡至少3h(可以浸泡过夜甚至更长时间)，轻摇混匀，按试剂条上的箭头方向将试剂条插入试管中，15min后读取结果。

　　1.3 评估方案：以化学发光免疫测定和时间分辨免疫荧光测定作为对照方法，对金标快速检测试剂进行评估。用化学发光免疫测定试剂与金标快速检测试剂平行检测100份血清样本;用时间分辨免疫荧光试剂与金标快速检测试剂平行检测100份干血斑样本。样本用对照试剂检测的结果超过其临界值时，被评估试剂的结果呈阳性，则判为两种方法结果符合;被评估试剂的结果呈阴性，则判为两种方法结果不符合;样本用对照试剂检测的结果低于其临界值时，被评估试剂的结果呈阴性，则判为两种方法结果符合;被评估试剂的结果呈阳性，则判为两种方法结果不符合。

　　2 结果

　　2.1 血清样本：在90份化学发光免疫测定结果<10μIU/ml的血清样本中，有1份样本金标快速检测试剂的检测结果为阳性，其余89份样本均为阴性;3份化学发光免疫测定结果在10～20μIU/ml的样本，金标快速检测试剂的检测结果均为阳性;2份化学发光免疫测定结果在20～40μIU/ml的样本，金标快速检测试剂的检测结果均为阳性;5份化学发光免疫测定结果≥40 μIU/ml的样本，金标快速检测试剂的检测结果均为阳性，结果见表1。与化学发光免疫测定相比，在血清样品的测试中，金标快速检测试剂的灵敏度、特异性、阳性预测值、阴性预测值以及符合率分别为100%、98.89%、90%、100%。以及99%。 100份血清样品的检测结果

　　2.2 干血斑样本：在79份时间分辨免疫荧光测定结果<10μIU/ml的样本中，金标快速检测试剂的检测结果都为阴性;16份时间分辨免疫荧光测定结果在10～20μIU/ml的样本，金标快速检测试剂的检测结果均为阴性;2份时间分辨免疫荧光测定结果在20～40μIU/ml的样品，金标快速检测试剂的检测结果1份呈阳性，1份呈阴性;3份时间分辨免疫荧光测定结果≥40μIU/ml的样品，金标快速检测试剂的检测结果均为阳性。

　　对21份时间分辨免疫荧光测定检测结果超过临界值的样本，重新采样后再次进行时间分辨免疫荧光测定。16份初次检测结果在10～20μIU/ml的样本，再次检测结果均小于临界值;两份初次检测结果在20～40μIU/ml的样本，再次检测其中1份结果仍在20～40μIU/ml，而另1份结果小于临界值;3份初次检测结果≥40 μIU/ml的样本，再次检测结果仍≥40 μIU/ml。与时间分辩免疫荧光测定相比，在干血斑样品的测试中，金标准快速测试的灵敏度，特导性、阳性预测值、阴性预测值以及符合率都为100%。 100份干血斑样本的检测结果

　　3 讨论

　　对血清样本，金标快速检测试剂与化学发光免疫测定试剂间具有较高的符合率。10份不正常的样品，两种试剂的检测结果都能检测出不正常结果，检测结果一致。对90化学发光检测值为正常的血清样品中，也只有一份样品的金标快速试剂的检测结果为阳性。该份血清的化学发光的测定为8.8μIU/ml，可能是临近金标试剂的临界值，而引起检测结果的不一致。

　　对干血斑样品中的正常值样品，金标快速诊断试剂与时间分辨免疫荧光测定试剂间具有较高的符合率。79份正常值的样品，两种检测结果一致。对干血斑样品中的不正常值样品，金标快速诊断试剂与时间分辨免疫荧光测定试剂的初次检测结果间的符合率不是很高。在21份时间分辨免疫荧光。测定试剂检测结果为不正常的样品中，金标快速试剂只能检出4份。但是对21份不正常样品进行确认检测，其中17份金标快速检测为阴性的样品，确认的检测结果都为阴性;4份金标快速检测为阳性的样品，确认的检测结果都为阳性。这可能是由于再次取样时，新生儿血样中的TSH下降或其他干扰因素下降所致;也可能是由于金标快速试剂在加提取液提取干血斑的过程中，由于提取不完全，而造成的灵敏度的下降。

　　在本研究中，金标快速试剂都能检测出化学发光检测检测结果不正常的样品，也能检测一些时间分辨检测结果不正常的样品。考虑到金标快速诊断试剂最适用样品为血清或全血样品，而使用干血斑样品，反而增加了操作的繁琐。初步表明金标快速诊断试剂能适用于新生儿TSH的筛查中。

　　由于先前没有商业化的新生儿TSH的金标快速诊断试剂，只有化学发光免疫测定、时间分辨免疫荧光测定试剂以及酶联免疫测定试剂等，因此大多数医院都选用化学发光免疫测定、时间分辨免疫荧光测定试剂或酶联免疫测定试剂来检测新生儿的TSH。由于金标快速试剂具有操作简便、无需任何仪器而且能单人份操作等优点，金标快速诊断试剂特别适用于广大的农村以及小城镇地区，而这部分地区也正好由于条件或资金的限制，目前还没有开展TSH的筛查。

　　【参考文献】

　　[1] 冯仁丰.临床检验质量管理技术基础[M].第2版.上海：上海科学技术文献出版社，2007：111-176.

　　[2] 罗 炜，王 慧，陈柏铭.化学发光免疫法与放射免疫法测定血清AFP的比较[J].上海医学检验杂志，2000，15(3)：149.

　　[3] 李少林.核医学[M].北京：人民卫生出版社，2002：49-68.

　　[4] 盛寿祥，朱利国，朱娅妮，等.肖华龙血清TSH化学发光免疫分析及免疫放射分析对甲亢和甲减的诊断试验评价[J].中华核医学杂志，2000，5：230.