早产儿感染病原体情况分析

         作者：董明驹 作者单位：襄樊市第一人民医院，湖北 襄樊 441000

　　【摘要】 目的：了解早产儿感染病原体情况。方法：用PCR方法检测早产儿血液中TORCH(弓形虫、风疹病毒、巨细胞病毒和单纯疱疹病毒Ⅱ型)DNA/RNA和早产儿痰中肺炎支原体、肺炎衣原体、解脲支原体和沙眼衣原体DNA。结果：巨细胞病毒感染率为5.2%(7/134)，肺炎支原体感染率为31.2%(39/125)，解脲支原体感染率为46.8%(65/139)，有31例同时感染肺炎支原体和解脲支原体，弓形虫、风疹病毒、单纯疱疹病毒Ⅱ型、肺炎衣原体和沙眼衣原体均未检出阳性病例。结论：早产儿感染的病原体主要为解脲支原体和肺炎支原体，少数感染了巨细胞病毒。

　　【关键词】 早产儿;感染;解脲支原体;肺炎支原体;巨细胞病毒

　　引起早产的病因较多，大多数研究认为孕妇感染弓形虫、风疹病毒、巨细胞病毒和单纯疱疹病毒Ⅱ型等病毒造成宫内感染时容易导致早产;孕妇宫颈感染支原体和衣原体，发生支原体和衣原体上行感染胎膜羊膜时，使胎膜早破也容易导致早产，同时早产儿也会感染相应的病原体。本研究检测早产儿血清中弓形虫、巨细胞病毒和单纯疱疹病毒Ⅱ型DNA，风疹病毒RNA;检测早产儿痰中肺炎支原体、肺炎衣原体、解脲支原体和沙眼衣原体DNA，来了解早产儿感染病原体情况，为临床诊断和治疗提供参考依据。

　　1 材料与方法

　　1.1 材料

　　1.1.1 研究对象 276例早产儿为我院新生儿科2004年1月至2007年12月住院患者，出生时<37孕周，日龄1 d～59 d，平均(10±9)d，其中男187例，女89例。

　　1.1.2 试剂和仪器 仪器：实时荧光PCR 检测仪(BioRad iCycler);试剂:由中山大学达安基因股份有限公司提供。

　　1.2 方法

　　1.2.1 标本处理 对于痰标本，取呼吸道吸出物1.5 ml 于离心管中，13 000 r/ min 离心5 min，去掉上清液,留管底沉淀作为DNA提取标本;对于血清标本，取50 μl血清作为DNA 提取标本。

　　1.2.2 DNA的提取 对于痰标本，向离心管中的沉淀物中加入50 μl提取液,充分混合;血清标本，加入等量提取液,充分混合;沸水浴10 min，然后置4℃放置> 30 min，13 000 r/ min 离心5 min，取上清液2 μl作为PCR 反应模板。

　　1.2.3 RNA的提取和逆转录 取0.5 μl灭菌离心管，加入10 μl RNA A提取液，再加入100 μl血清，充分混合;加入RNA B提取液200 μl，充分混合，放置5 min，8 000 r/ min离心1 min，去掉上清液，再加入RNA B提取液200 μl，充分混合， 8 000 r/ min离心1 min，去掉上清液;加入400 μl预冷DEPC水配制的75%酒精洗涤2次，打开盖子65℃ 10 min烘干;加入18 μl逆转录反应液，2 μl逆转录酶，混合，8 000 r/ min离心1 min;逆转录37℃ 45min;95℃ 3 min，8 000 r/ min离心1 min，取上清液5 μl作为PCR 反应模板 (逆转录所用的离心管和吸头均已灭菌)。

　　1.2.4 扩增和结果判断 93℃预变性2 min，然后93℃45 s～55℃120 s 做42 个循环。根据荧光强度曲线判断标本或标准达到临界阈值时所需要的循环数(Ct值)，Ct = 0.0 为阴性,10.0

　　2 结果

　　2.1 血清中TORCH结果 检测了134例早产儿血清中弓形虫、风疹病毒、巨细胞病毒和单纯疱疹病毒Ⅱ型，仅有7例巨细胞病毒为阳性，巨细胞病毒感染率为5.2%(7/134)，弓形虫、风疹病毒和单纯疱疹病毒Ⅱ型均未检出阳性病例。

　　2.2 痰中支原体和衣原体结果 肺炎支原体(MP)和解脲支原体(UU)有阳性病例，肺炎衣原体(CP)和沙眼衣原体(CT)未检出阳性病例，见表1。其中有31例MP和UU同时为阳性。

　　2.3 男女早产儿巨细胞病毒、肺炎支原体和解脲支原体感染率 均无统计差异(P>0.05)，见表 2。

　　3 讨论

　　早产儿的病死率较高，及时准确诊断早产儿感染的病原体，为临床医生提供治疗依据，降低早产儿病死率，有非常重要的临床意义。早产儿发生宫内感染主要有两条途径，一种是孕妇感染TORCH病原体后通过脐带血传播到宫内胎儿;另一种是孕妇阴道宫颈部位感染的病原体上行感染胎膜羊膜，病原体污染羊水而感染胎儿。

　　本研究显示，早产儿感染TORCH的病例很少，只有巨细胞病毒有感染病例，感染率为5.2%，比较低，弓形虫、风疹病毒和单纯疱疹病毒Ⅱ型均无感染病例，这也说明由孕妇感染TORCH导致早产的概率并不高。与陈纯真等[1]报道的不同，他们检测新生儿血清中TORCHIgG阳性作为新生儿先天性感染TORCH的指标，弓形虫、风疹病毒、巨细胞病毒和单纯疱疹病毒均有感染病例。本研究检测早产儿血清中弓形虫、巨细胞病毒、单纯疱疹病毒Ⅱ型的DNA和风疹病毒的RNA来判断早产儿是否先天感染TORCH更加准确，由于母体血液中TORCHIgG可以通过胎盘传给胎儿，在出生后可以在新生儿体内存在几个月，因此，以TORCHIgG阳性作为新生儿先天性感染TORCH的指标可能存在假阳性。

　　在TORCH 病原体中,为什么只检出巨细胞病毒感染早产儿的病例，由于巨细胞病毒与其他病毒不同，孕妇感染巨细胞病毒后，所产生的特异性抗体IgG，不一定能起到保护胎儿不受感染的作用。因此,孕妇感染巨细胞病毒比其他病毒更易致宫内感染和复发感染。迄今，多认为巨细胞病毒是TORCH 感染中对母儿危害最大的一种病毒[2]。由于风疹病毒疫苗的使用，孕妇在怀孕之前，一般对风疹病毒都有免疫抗体，现在发生风疹病毒宫内感染的病例很少。AbdelFattah 等认为，在英国孕妇仅巨细胞病毒需要做筛查[3]。

　　早产儿感染UU和MP较高，感染率分别为46.8%和31.2%。越来越多的研究认为孕妇阴道和宫颈部位的病原体上行感染胎膜羊膜，胎膜炎症部位脆性增加，导致胎膜早破引发早产，胎膜羊膜受病原体感染会污染羊水，使胎儿吸入相应的病原体而感染。宣仲英等研究认为UU宫内感染是发生胎膜早破的重要原因之一[4]。Kotecha S等从孕妇发生宫内感染羊水中分离最多的病原微生物是UU[5]，当羊水受到UU污染时，胎儿也就很容易感染UU。MP容易和UU混合感染，共有31例同时感染有MP和UU，可能由于同属于支原体，有相似的生长繁殖环境。由于胎盘组织UU培养阳性的早产儿比胎盘组织UU培养阴性的早产儿发展成为慢性肺病的风险高20倍[6]，当早产儿检查有UU和MP感染时，应及时应用抗生素的治疗，防止早产儿发生肺病窒息而死亡。

　　表1 痰中MP、CP、UU和CT检测结果(略)

　　表2 男女早产儿CMV、MP和UU感染率比较(略)

　　【参考文献】

　　[1] 陈纯真，卜景芝.新生儿先天性TORCH感染情况分析[J].中国妇幼保健，2007，22：30993100.

　　[2] 闻良珍. TORCH 宫内感染及对胎婴儿的影响[J]. 中国实用妇科与产科杂志，2003，19 (12)： 711712.

　　[3] AbdelFattah SA， Bhat A， Illanes S，et al. TORCH test for fetal medicine indications：Only CMV is necessary in the United Kingdom[J]. Prenat Diagn，2005，25 (11)：10281031.

　　[4] 宣仲英，陈瑜.胎膜早破与支原体宫内感染的关系[J].中国妇幼保健，2007，22：16261627.

　　[5] Kotecha S，Hodge R，Schaber JA，et al. Pulmonary Ureaplasma urealyticum is associated with the development of acute lung inflammation and chronic lung disease in preterm infants[J]. Pediatr Res，2004，55(1)：6168.

　　[6] Berger A，Witt A，Haiden N，et al. Microbial invasion of the amniotic cavity at birth is associated with adverse shortterm outcome of preterm infants[J]. J Perinat Med，2003，31(2)：115121.