婴幼儿人巨细胞病毒感染154例PCR与ELISA检测比较
发表时间：2010-08-17 浏览次数：403次
作者：缪美华，邵雪君，朱 宏，徐 俊，丁云芳 作者单位：(苏州大学附属儿童医院，苏州 215003)
【摘要】 目的: 探讨采用不同的定量方法及不同的标本检测婴幼儿人巨细胞病毒(HCMV)感染阳性率。方法:采用荧光定量PCR法和ELISA定量法分别对154例疑感染HCMV住院患儿进行HCMV DNA和HCMV IgM抗体的定量检测，其中对73例患儿的血及尿标本同时进行HCMV DNA的检测。结果: 血和尿HCMV DNA同时检测，尿检出率明显高于血;血和尿HCMV DNA检出率明显高于血清HCMV IgM;两种方法的联合检测进一步提高阳性率。结论: 两种方法同时检测可提高HCMV的检出率;尿标本HCMV DNA的检出率明显高于血标本，采用尿标本更方便，且阳性率高。
【关键词】 巨细胞病毒;荧光定量;聚合酶链反应;人巨细胞病毒IgM抗体;儿童
Comparison of PCR and ELISA in detecting 154 cases children HCMV infection
MIAO Meihua, SHAO Xuejun, ZHU Hong, ,at el ( Affiliated Children's Hospital, Soochow University, Suzhou 215003)
[Abstract] Objective: To explore the positive rate of human cytomegalovirus (HCMV) infection in children using different quantitative methods and different specimens. Methods:Fluorescent quantitative PCR and quantitative ELISA method were applied to154 hospitalized children who were suspected to be infected by HCMV, to detect the HCMV DNA and HCMV IgM respectively. Among them, 73 children's urine and blood samples were collected simultaneously to detect the HCMV DNA. Results: HCMV DNA positive rate was higher than HCMV IgM significantly, and the urine samples had more positive rate than the blood ones when HCMV DNA was detected. If these two methods were employed simultaneously, the positive rate would improve further. Conclusion:Applying the fluorescent quantitative PCR and quantitative ELISA methods simultaneously could improve the positive rate of HCMV infection; urine sample was recommended which had much higher positive rate and easier to collect with the HCMV DNA copies.
[Key words] Cytomegalovirus; Fluorescent quantitative;polymerase chain reaction;Human cytomegalovirus IgM;Children
人巨细胞病毒(human cytomegalovirus，HCMV)属疱疹病毒科，为双链线状DNA病毒，具有潜伏—活动的生物学特征。HCMV是儿科感染的重要病因，严重的HCMV感染常累及多系统和多脏器，肝脏是HCMV感染易累及的脏器，尤其在幼小儿童和免疫抑制个体[1-2]。国内外此类报道不少，但分别从抗原和抗体两个方面对HCMV进行定量检测国内外报道不多，本文通过对HCMV定量检测的两种方法学进行比较，监测HCMV病毒活动，为临床及早诊治HCMV感染患儿提供依据。
1 资料与方法
1.1 一般资料 对2008年9月～12月住院疑感染HCMV患儿154例进行HCMV DNA和HCMV IgM抗体的定量检测，年龄0～7岁，男91例，女63例，其中有73例患儿同时收集到血和尿标本，男38例，女35例，诊断标准按照《巨细胞病毒感染诊断方案》[3]。
1.2 方法 血HCMV DNA的检测采用EDTA-2K抗凝的全血，淋巴细胞分离液分离单个核细胞;尿HCMV DNA的检测采用随机尿标本，BIO-RAD iCYCLE PCR荧光定量分析仪，达安基因HCMV DNA荧光定量试剂盒检测;HCMV-IgM采用ELISA方法定量检测,试剂由德国VirionSerion提供(Labsystems Dragon酶标仪，BIO-RAD洗板机)。
1.3 统计学方法 采用SPSS13.0进行χ2检验, P<0.05示差异有统计学意义。
2 结 果
2.1 HCMV荧光定量PCR和抗体检测阳性率比较 对154例患儿同时进行HCMV DNA PCR(血和/或尿标本)和HCMV IgM(血清)的定量检测，见表1。
2.2 不同标本HcMv荧光定量PCR检测结果比较 对能够同时采集到血和尿的73例患儿同时进行血和尿双份标本HCMV DNA的PCR检测，见表2。
3 讨 论
儿童是HCMV感染的易感人群，活动性感染发生率高，尤其3岁以内婴幼儿为高发年龄组[4]。因此及早诊治HCMV感染患儿，实验室检查尤其重要。病毒分离是诊断HCMV感染的金标准，但不能满足临床需求。临床实用的方法包括血清学测定HCMV 特异抗体，即HCMV IgM;荧光定量PCR技术测定血、尿HCMV DNA。 HCMV IgM抗体检测是诊断HCMV活动性感染的有效指标，定量PCR通过检测HCMV DNA水平，可监测病毒活跃程度。
本研究通过定量检测HCMV IgM和HCMV DNA，对其方法学及HCMV DNA检测时不同的标本来源时的检出率进行了分析和评价，结果显示PCR检出率高于抗体的检出率，PCR检测时尿检出率高于血检出率，但不论采用何种检测方法或何种标本，按照《巨细胞病毒感染诊断方案》[3]都存在一定的假阴性率，PCR检测时为13.7%(10/73)，抗体检测时为42.5%;PCR采用尿标本检测是为8.1%，血标本检测时为54.0%。我们知道，不同的方法、不同的标本来源的检测结果代表着不同的临床意义，HCMV IgM 阳性表明HCMV 活动或近期感染，但婴儿尤其是新生儿免疫反应较弱，可呈假阴性[5];HCMV IgM阳性,HCMV DNA 阴性，说明在病毒感染早期,已有机体发生免疫抗体反应，但病毒未能大量繁殖或还未侵入肾脏;HCMV IgM阴性,HCMV DNA 阳性,考虑急性的早期感染期已过,抗体在血中的滴度已下降,而病毒却在机体内不断产毒，并可长期经肾脏排毒[6];或是在经历潜伏期后,人体抵抗力低下时,又出现病毒活动;HCMV IgM及HCMV DNA均阳性,既是发病早期又是活动产毒期，说明大量病毒在体内活动应积极治疗。HCMV的噬上皮特性，使其易于感染在肾脏细胞内，查尿中HCMV DNA，可知其复制，排毒情况[7-8]，且其阳性检出率比血要高，假阴性率比血低得多，因此，采用尿标本既方便，阳性率又高，但由于肾小管间歇性排出HCMV颗粒，可出现假阴性。因此，血清HCMV IgM抗体和血、尿HCMV DNA同时检测可提高HCMV感染的诊断率，有利于临床分析患儿的感染情况，以便及时采取合理的治疗方案。
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