LOX1mRNA在急性冠脉综合征患者外周血单核细胞的表达

　　作者：李如意,刘美霞,吕军娥,齐晓勇　　作者单位：河北省人民医院心脏中心，河北 石家庄 050051

　　【摘要】目的探讨外周血单核细胞血凝素样氧化低密度脂蛋白受体1(LOX1)mRNA表达与急性冠脉综合征(acute coronary syndrome，ACS)间的关系。方法 分离8例ACS、8例稳定性心绞痛(SAP)及8例对照(C)外周血单核细胞，采用异硫氰酸胍酚氯仿抽提法提取总RNA，扩增目的基因LOX1mRNA。结果 ACS患者外周血单核细胞LOX1mRNA表达与C组比较增加(P<0.05)，且血清氧化低密度脂蛋白(oxLDL)浓度与C组比较亦增高(P<0.05);单核细胞LOX1mRNA表达与血清oxLDL浓度呈正相关(r=0.527,P=0.008);而与冠脉狭窄积分无相关性。结论 ACS患者外周血单核细胞LOX1mRNA表达增加，可能参与ACS的发病过程。

　　【关键词】 急性冠脉综合征,单核细胞,血凝素样氧化低密度脂蛋白受体1,氧化低密度脂蛋白

　　血凝素样氧化低密度脂蛋白受体1(LOX1)作为氧化低密度脂蛋白(oxLDL)的细胞表面受体，可在内皮细胞、巨噬细胞、血管平滑肌细胞、单核细胞等细胞表达，而斑块中的巨噬细胞主要来源于循环中激活的单核细胞，研究发现急性冠脉综合征(ACS)患者外周血单核细胞处于活化状态〔1〕，但ACS患者外周血单核细胞LOX1 mRNA的表达情况及其与斑块稳定性的关系尚不明确，本研究通过观察不同类型冠心病患者外周血单核细胞LOX1 mRNA的表达，探讨LOX1 mRNA表达与斑块稳定性之间的关系。

　　1 资料与方法

　　1.1 对象

　　住院患者24例，男13例，女11例，分为ACS组(8例)，稳定性心绞痛(SAP)组(8例)，对照(C)组(8例)。入选标准：冠心病组临床表现及心电图变化均符合WTO诊断标准，经选择性冠状动脉造影术判断至少有1处狭窄50%以上;ACS的诊断按照ESC2002年的诊断标准;SAP的诊断按照ESC2006年的诊断标准;C组：临床表现或心电图变化怀疑冠心病，经选择性冠状动脉造影术证实无狭窄。排除外周血管疾病，慢性心力衰竭，甲状腺疾病，肝肾功能不全，并发炎症，肿瘤，近半年内重大外伤、手术史，近半年内心肌梗死、经皮冠状动脉成形术、冠状动脉旁路移植术史。

　　1.2 冠脉病变程度判断

　　按狭窄累及左冠脉的左前降支、左回旋支或右冠脉的支数，分为1、2、3支病变组，显著累及左主干计为2支。每支按近中段最狭窄处狭窄程度分级:Ⅰ级为0～25%，Ⅱ级为26%～50%，Ⅲ级为51%～75%，Ⅳ级为76%～100%，分别记为1、2、3、4分。多支病变者将各支分数累加即为其冠脉狭窄积分(CSS)。

　　1.3 血清oxLDL测定

　　ACS患者入院后即刻、SAP患者及C组入院后次日晨抽取空腹静脉血2 ml，自然凝固后1 h内离心取血清置于-70℃冻存，之后应用ELISA方法成批检测oxLDL，试剂盒由美国ADL公司提供，购自上海麦莎有限公司。

　　1.4 外周血单核细胞的分离

　　ACS患者发病24 h内、SAP及C组择期行冠状动脉造影时，注射肝素前于取股动脉血20 ml注入枸橼酸钠抗凝管，立即置4℃冰箱，1～2 h后用密度梯度离心法分离单个核细胞。将单个核细胞悬浮于含10%胎牛血清的RPMI1640液，接种于25 ml培养瓶在37℃、5%CO2的条件下贴壁孵育6 h，收集贴壁细胞即为单核细胞，用giemsa染色细胞纯度大于85%者可用于试验提取总RNA。

　　1.5 总RNA提取和RTPCR扩增

　　取106个单核细胞用1 ml Trizol提取液按异硫氰酸胍酚氯仿抽提法提取总RNA，采用逆转录试剂盒将核糖核酸逆转录为cDNA，扩增目的基因LOX1，人βactin作为内参照，PCR产物在2.0%琼脂糖凝胶上电泳，用凝胶图像分析系统分析结果。扩增产物与βactin扩增产物密度扫描之比作为目的基因的相对表达量。LOX1引物序列：上游：5′tta ctc tcc atg gtg gtg cc3′，下游：5′agc ttc ttc tgc ttg ttg cc3′，193 bp;扩增条件：95℃ 5 min，然后95℃ 30 s，56.8℃ 30 s(35个循环)，72℃延伸5 min。βactin引物序列：上游：5′tgg cac cca gca caa tga a3′，下游：5′cta agt cat agt ccg cct aga agc a3′，186 bp，扩增条件为：95℃ 5 min，然后95℃ 30 s，57℃ 30 s(35个循环)，72℃延伸5 min。引物序列依据文献报道设计，由上海生物工程公司合成。

　　1.6 统计学处理

　　计量资料数据以x±s表示，应用SPSS13.0进行数据分析，组间比较采用方差分析。

　　2 结果

　　2.1 各组间单核细胞LOX1mRNA表达、血清oxLDL浓度及冠脉狭窄积分CCS的比较

　　ACS患者单核细胞LOX1mRNA表达与C组比较增加(P<0.05)，与SAP组比较无差异，SAP组与C组比较无统计意义;ACS组患者血清oxLDL浓度与SAP组及C组比较均增加(P<0.05)，SAP组与C组比较亦增加(P<0.05);冠脉狭窄积分CCS在ACS组与SAP组间无差异。表1 各组间单核细胞LOX1mRNA表达、血清oxLDL

　　2.2 单核细胞LOX1mRNA表达与血清oxLDL浓度、冠脉狭窄积分的相关性

　　单核细胞LOX1mRNA表达与血清oxLDL浓度呈正相关(r=0.527,P=0.008);而与冠脉狭窄积分无相关性。

　　3 讨论

　　LOX1作为oxLDL的跨膜受体，其表达增加会引起单核源巨噬细胞摄入oxLDL增加，促进泡沫细胞的形成，使粥样核不断增大，并且增生的巨噬细胞可分泌MMPs和其他酶类，使胶原降解，增加斑块的不稳定性，导致斑块的破裂和ACS的形成。本研究显示ACS患者外周血单核细胞LOX1mRNA表达高于C组，而SAP组与C组比较无明显差异，提示单核细胞LOX1mRNA表达增加可能参与了不稳定斑块的形成。

　　体外细胞培养证实，oxLDL以浓度依赖性方式刺激血管内皮细胞LOX1表达上调〔2〕。本研究显示，血清oxLDL浓度在冠心病患者高于C组，且ACS患着高于SAP患者，进一步相关分析显示单核细胞LOX1mRNA的表达与血浆oxLDL浓度呈正相关，提示ACS患者血单核细胞LOX1mRNA表达增加可能由血浆中增高的oxLDL所诱导;同时相关分析显示，LOX1mRNA的表达与代表冠脉病变程度的冠脉狭窄积分无明显相关性，即单核细胞LOX1mRNA表达不受病变程度的影响，而受循环血中的增高的oxLDL等因素影响。多项体外研究证实，除oxLDL外肿瘤坏死因子α、内皮素(ET1)、切应力和血管紧张素Ⅱ等多种因素可诱导并上调内皮细胞LOX1的表达〔3～6〕，本研究从临床角度在体研究进一步证实oxLDL可上调单核细胞LOX1表达。

　　本研究从临床及冠状动脉造影两方面进行观察发现，ACS患者LOX1 mRNA表达水平高于SAP患者，LOX1 mRNA表达水平与代表病变程度的冠脉狭窄积分无相关性，因此，本研究证实，冠心病患者单核细胞LOX1mRNA表达水平与冠脉病变是否活动密切相关，而与冠脉病变程度无关。

　　LOX1作为oxLDL的跨膜信号受体，在动脉粥样硬化的发生发展中发挥了重要作用。本研究仅对外周血单核细胞LOX1表达的变化与ACS的关系做一初步探讨，间接证实血清中增高的oxLDL可激活并诱导外周血单核细胞LOX1mRNA表达增加，而LOX1mRNA表达增加参与了不稳定斑块的形成及ACS的发生。由于研究的局限性，无法从破裂的斑块中直接获得更强有力的证据，进一步的阐明有待于更多研究的进行。

　　【参考文献】

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