哮喘综合治疗对哮喘儿童Th1/Th2免疫状态的影响
发表时间：2010-03-23 浏览次数：533次
作者： 施筠，甘露，徐红梅 ［摘要］目的本研究拟测定健康儿童及支气管哮喘儿童外周血单个核细胞(PBMC)分泌白细胞介素-4(IL-4)、白细胞介素-10(IL-10)、γ干扰素(IFN-γ)的水平以及哮喘综合治疗后的变化，以观察哮喘和健康儿童PBMC中Th1/Th2的平衡状态及哮喘综合治疗对其的影响。方法支气管哮喘患儿64例(哮喘组)，哮喘组中又分未正规治疗组26例，综合治疗组38例。对照组为32例健康儿童，采静脉血3 ml，分离PBMC，体外经植物血凝素（PHA-P）刺激，细胞培养48 h，用ELISA法检测培养上清液中白细胞介素-4、白细胞介素-10和γ干扰素含量。结果（1）哮喘未正规治疗患儿外周血单个核细胞分泌细胞因子IL-4、IL-10水平高于正常对照组，差异有显著性(P<001～005)，而IFN-γ水平则较正常对照组低，两者差异有显著性(P<005)。（2）综合治疗8～12周后,综合治疗组较未正规治疗组PBMC分泌IL-4、IL-10水平下降、IFN-γ水平升高,与未正规治疗组比较，差异有显著性(P<005)。结论哮喘未正规治疗患儿PBMC中Th2类因子（IL-4、IL-10）强势表达。以吸入糖皮质激素为主的综合治疗可显著下调IL-4、IL-10水平，上调IFN-γ水平,从而减轻气道炎症，有效地防止哮喘的发作。
［关键词］哮喘；外周血单个核细胞；白细胞介素-4；白细胞介素-10；γ干扰素；综合治疗
支气管哮喘(哮喘)是一种慢性持续性气道炎症疾病,多种炎性细胞和炎性介质参与其过程，其中肥大细胞、嗜酸粒细胞、T淋巴细胞为主要效应细胞。目前认为T辅助淋巴细胞两个功能性亚群Th1/Th2相关细胞因子在哮喘发病中发挥着重要作用。本研究拟测定健康儿童及支气管哮喘儿童外周血单个核细胞(PBMC)分泌白细胞介素-4(IL-4)、白细胞介素-10(IL-10)、γ干扰素(IFN-γ)的水平以及哮喘综合治疗后的变化，以观察哮喘和健康儿童PBMC中Th1/Th2的平衡状态及哮喘综合治疗对其的影响。
1资料与方法
11一般资料我院2005年6月~2006年6月就诊的儿童96例,其中支气管哮喘患儿64例(哮喘组)，男39例,女25例;年龄6～13岁,平均855岁。诊断均符合2004年中华儿科学会呼吸学组制订的儿童哮喘诊断标准［1］。哮喘组中又分未正规治疗组26例，近2周内未使用过糖皮质激素和免疫调节剂。综合治疗组38例:选择我院儿科哮喘门诊患儿，严格按GINA方案［2］分级治疗。使用药物：压力定量吸入气雾剂丙酸氟替卡松(FP)气雾剂125 μg/喷，布地奈德(BUD)气雾剂（200 μg/喷）和准纳器［丙酸氟替卡松100 μg/喷加沙美特罗（SALM）50 μg/喷］。轻度吸入激素200~400 μg/d；中度吸入激素400~800 μg/d，加用SALM；重度吸入激素800 μg/d，加用SALM共8～12周。治疗期间有急性
发作者同时加用喘乐宁气雾剂100~200 μg/次，每日3～4次，症状缓解后停用；个别重者加用口服短效β2受体激动剂及全身激素快速缓解发作。如有明确细菌感染者加用抗生素。对照组为32例健康儿童，男18例,女14例;年龄5～13岁,平均73岁。均无特殊病史,1个月内无呼吸道感染,未用过糖皮质激素及抗组胺药物。
12方法每例患者均采取空腹静脉血3 ml肝素抗凝，以等量的PBS溶液稀释，缓慢加至等量淋巴细胞分离液界面上(18 ℃~20 ℃),水平式分离2100 rpm/min，20 min，收集分离液与血浆间白色絮状单个核细胞，然后加入含10%灭活胎牛血清的RPMI-1640培养液的细胞培养板上，加入植物血凝素（PHA）,调理成细胞浓度为1×109/L的细胞悬液,然后将培养板置于37 ℃,5% CO2的培养箱中培养48 h，离心收集上清液于-80 ℃冰箱保存以备测。
13培养上清液中细胞因子的测定用双抗体夹心ELISA法检测IL-4、IL-10和IFN-γ水平。IL-4、IL-10、IFN-γ酶联免疫试剂盒购自中国深圳晶美生物工程公司。
14统计学方法采用SPSS 90统计软件进行统计学分析。结果呈正态分布，数据以均数±标准差(±s)表示,采用t检验。
2结果
细胞因子检测结果：（1）哮喘未正规治疗患儿外周血单个核细胞分泌细胞因子IL-4、IL-10水平高于正常对照组，差异有显著性(P<001～005)，而IFN-γ水平则较正常对照组低，两者差异有显著性(P<005)。（2）综合治疗8～12周后,哮喘综合治疗组患儿培养上清液中IL-4、IL-10水平低于未正规治疗组，差异具有显著性(P<005)，而IFN-γ水平高于未正规治疗组患儿，两者差异有显著性（P<005）,见表1。表1哮喘患儿外周血Th1/Th2细胞因子检测结果注：与对照组相比，*P<005，**P<001;与哮喘未正规治疗组相比，△P<005
3讨论
根据CD4+Th细胞所分泌的细胞因子不同,将其分为Th0、Th1和Th2 3种亚型。Th0细胞在不同细胞因子、激素、抗原等因素的作用下,可向Th1或Th2分化。Th1细胞产生IL-2、IFN-γ,Th2细胞产生IL-4、IL-10，上述细胞因子在慢性气道炎症中发挥重要作用［3］。正常情况下Th1/Th2细胞因子应处于一种平衡状态,哮喘患者存在Th1/Th2细胞因子间失平衡,是哮喘发病的关键机制,表现为Th1细胞因子分泌的γ干扰素、肿瘤坏死因子(TNF-β)、IL-12减少,对哮喘具有负向调节作用；Th2细胞因子分泌的IL-4、IL-5、IL-8、IL-10、转换生长因子(TGF-β)增加,对哮喘具有正向调节作用,对气道炎症具有激发和促进作用。结果使嗜酸粒细胞、肥大细胞、T淋巴细胞等多种炎症细胞在效应部位增生、聚集和活化，释放白三烯等活性物质,导致气道的慢性炎症。
本研究显示,哮喘未正规治疗患儿外周血单个核细胞分泌细胞因子IL-4、IL-10水平明显高于综合治疗组及对照组(P<001～005),提示哮喘患儿PBMC中Th2类因子强势表达。目前认为,IL-4在哮喘炎症过程中是起主导作用的因子，IL-4血清水平的升高与哮喘严重程度相关，并能促进B细胞生成IgE［4］。IL-10能抑制Th1细胞产生IL-2、IL-4、IFN-γ等。IFN-γ是一种抗哮喘因子，它可抑制变态反应，是IL-4合成的生物拮抗剂,可降低B细胞过度合成IgE，并抑制Th2型细胞的增生［5］。在哮喘发病中起重要保护作用。
支气管哮喘是一种气道慢性炎症性疾病。糖皮质激素是治疗哮喘较为有效的药物,可以抑制嗜酸细胞的增殖和分化,并能有效降低循环中哮喘炎性细胞的数量,从而有效降低IL-4、IL-10水平,并抑制炎症介质释放,调节Th1/Th2细胞因子间失平衡。因此长期吸入皮质激素可抑制气道的慢性炎症及气道高反应性，减少支气管腺体的过度分泌，修复受损的气道上皮，从而避免肺功能不可逆损害，防止发展为成人哮喘［6］。2000年Rudiger等发现SALM能增加细胞浆中激素受体向细胞核中移位，从而增强激素的抗炎作用。这从哮喘治疗药物细胞分子水平进一步阐明其相互作用机制。所以GINA方案自轻度持续至重度持续在长期控制治疗的方案中，皆明确了长效β2受体激动剂(LABA)(如SALM)的应用的特征。
本研究按照GINA方案，哮喘患儿经以吸入糖皮质激素为主（中重度加用LABA）综合治疗8～12周后,外周血单个核细胞(PBMC)分泌IL-4、IL-10水平下降，IFN-γ水平升高,与未正规治疗组比较差异有显著性(P<005)。以吸入糖皮质激素为主的综合治疗是行之有效的方法，可显著下调IL-4、IL-10水平，上调IFN-γ水平,从而减轻气道炎症，有效地防止哮喘的发作。所以，我们在哮喘防治中，应该坚持GINA方案，使患儿生活质量得到很大限度的提高。
［参考文献］
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4李利清，霍莉莉，张新光,等.支气管哮喘与Th1/Th2失衡研究进展.中西医结合学报,2005,3(5):403-407.
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